一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌及构建方法技术

本发明专利技术公开了一种表达猪干扰素‑γ基因的重组短短芽孢杆菌及构建方法，其中重组短短芽孢杆菌的构建方法包括以下步骤：（1）按短短芽孢杆菌密码子偏好性优化并合成猪干扰素‑γ基因与短短芽孢杆菌质粒pNY326；（2）将合成的猪干扰素‑γ基因与短短芽孢杆菌质粒pNY326同时用限制性内切酶PstI和EcoRI双酶切；（3）回收双酶切产物进行连接反应，连接产物直接电转化短短芽孢杆菌SP3，使用新霉素抗性筛选转化子，获得重组短短芽孢杆菌。本发明专利技术对短短芽孢杆菌表达的猪干扰素‑γ进行了纯化和活性测定。

【技术实现步骤摘要】
一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌及构建方法
本专利技术涉及一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌及构建方法。
技术介绍
短短芽孢杆菌是一种安全、无毒性的益生菌，同时具有蛋白分泌能力强和胞外蛋白酶活性低的特点，因此特别适合做为胞外分泌蛋白表达系统。短短芽孢杆菌质粒pNY326是一种不能在大肠杆菌中复制的非穿梭质粒，该质粒的弱启动子P5，虽然没有其它芽孢杆菌的启动子强，但较强启动子相比表达更加稳定，适合表达有细胞毒性的蛋白和激素类蛋白，质粒的信号肽切割位点下游第一个酶切位点是PstI，使用该酶切位点可最大限度的减少重组蛋白N端无意义序列的存在，但该酶切位点后需要添加2个碱基再连接目的序列，以防止目的序列移码突变。干扰素是在特定的诱生剂作用下，由细胞分泌的抗病毒、抗肿瘤、影响免疫调节和细胞分化的细胞因子。干扰素分为I型和II型，其中II型又名干扰素-γ，是由激活的T细胞和NK细胞产生，具有抗病毒和免疫调节功能，干扰素-γ抗病毒活性较I型干扰素低，但它的免疫调节功能较强，因此可做为免疫增强剂使用，具有广阔的应用前景。猪干扰素-γ全长501bp，编码166个氨基酸，其中后146个本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种表达猪干扰素‑γ基因的重组短短芽孢杆菌，其特征在于，重组质粒的短短芽孢杆菌为SP3。

【技术特征摘要】
1.一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌，其特征在于，重组质粒的短短芽孢杆菌为SP3。2.根据权利要求1所述的一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌，其特征在于，包含权利要求1所述编码猪干扰素-γ基因的质粒，所述的质粒为pNY326。3.根据权利要求1所述的一种表达猪干扰素-γ基因的重组短短芽孢杆菌的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）按短短芽孢杆菌密码子偏好性优化并合成猪干扰素-γ基因与短短芽孢杆菌质粒pNY326；（2）...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹远东，潘烘，周志，张燕，焦贺勋，
申请(专利权)人：江西嘉博生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江西,36