结合人CD40的激动性抗体及其用途制造技术

公开了与人CD40结合的分离的单克隆激动性抗体和相关的基于抗体的组合物和分子。还公开了使用该抗体的治疗和诊断方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合人CD40的激动性抗体及其用途相关申请本申请要求于2016年4月18日提交的美国临时申请号62/324,170的优先权。上述申请的内容通过引用在此并入。
技术介绍
T细胞和抗原呈递细胞之间的相互作用涉及促进免疫应答的多种辅助分子。一种这样的分子是CD40，它是与CD40L结合的肿瘤坏死因子受体(TNF-R)超家族的成员(RanheimEA等人，Blood.1995June15；85(12):3556-65)。CD40是由277个氨基酸残基组成的跨膜43-48kDa糖蛋白(Braesch-Andersen等人，1989)。CD40由抗原呈递细胞(APC)表达，其天然配体(CD40L)与T细胞的结合激活APC，包括树突细胞和B细胞(Khalil和Vonderhide(2007)UpdateCancerTher,2(2):61–65)，从而增强免疫应答。CD40也在许多肿瘤细胞上表达，并且其在该环境中的连接介导直接的细胞毒性作用，例如CD40与肿瘤细胞的结合导致体外凋亡和体内肿瘤生长受损(Tai等人(2004)CancerRes,64(8):2846–52)。针对CD40的单克隆抗体提供多种潜在的治疗目的，包括治疗癌症。例如，已显示激动性CD40抗体替代CD4+淋巴细胞在T细胞介导免疫的小鼠模型中提供的辅助性T细胞，并且在携带肿瘤的宿主中CD40激动剂引发针对肿瘤相关抗原的有效免疫应答(Bennett等人(1998)Nature,393(6684):478–80)。此外，CD40抗体有望用于疫苗(Fransen等人(2014)Vaccine32:1654-1660)。然而，存在与强烈调节免疫系统的药剂相关的潜在副作用(Sandin等人(2014)CancerImmunolRes,2:80-90)。因此，需要进一步了解使CD40抗体治疗有效的特定性质和机制，以及改进的可用于治疗和/或预防疾病的抗CD40治疗性抗体。
技术实现思路
本专利技术提供了具有特定功能特性的分离的抗CD40抗体，其可以与有利和期望的治疗效果相关联。具体地，已经产生并表征了能够增加对抗原(例如在细胞上表达的抗原)的免疫应答的激动性抗CD40单克隆抗体。如本文所用，术语“抗体”是指全长抗体及其抗原结合部分。在一个实施方式中，抗CD40抗体增强针对抗原的免疫应答，例如通过增强T细胞介导的免疫应答、B细胞活化和/或细胞因子产生。抗体可以单独施用或在组合疗法中(例如与疫苗疗法和/或化学疗法一起)施用。在另一个实施方式中，抗CD40抗体能够增加对抗原的免疫应答，而不诱导CD40表达细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)和/或CD40表达细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)。在另一个实施方式中，抗体包含无效应恒定区。在一个实施方式中，恒定区是IgG2同种型(例如人IgG2)。在又一个实施方式中，抗CD40抗体表现出以下特性中的一种或多种：(a)不阻断CD40L与人CD40的结合，而不依赖于Fc受体结合；(b)阻断CD40L与人CD40的结合，而不依赖于Fc受体结合；(c)激活抗原呈递细胞(APC)上表达的人CD40，而不依赖于Fc受体结合；(d)诱导肿瘤细胞的凋亡；(e)T细胞刺激活性；(f)增强的B细胞激活；和/或(g)能够与CD40L协同作用。优选地，抗体不依赖于Fc受体相互作用而起作用。优选地，抗体是IgG2同种型抗体。在一个实施方式中，激动性抗体能够增加免疫应答而不依赖于Fc受体结合。例如，抗体可以展现出有效的激动特征而不与Fc受体例如FcγR交联。这些激动特征包括例如所测量的T细胞活性增加和/或B细胞激活增加，例如通过选自由HLA-DRV450、CD54PE、CD86APC、CD83BV510、CD19V500、CD54PE、HLA-DRV450、CD23PerCP-Cy5.5、CD69APC、CD86APC、CD38和CD71PE组成的组中的细胞表面标志物的表达所测量。在另一实施方式中，抗体阻断CD40与CD40表达细胞上的CD40L(CD154)的结合。在具体实施方式中，抗体抑制至少约10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％,80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的可溶性CD40L与CD40表达细胞的结合。在具体实施方式中，例如通过FACS、生物层干涉测量法(BLI)或Biacore所测量，抗CD40抗体抑制至少约70％的CD40L的结合。在具体实施方式中，例如通过FACS、BLI或Biacore所测量，抗CD40抗体抑制至少约80％的CD40L的结合。在另一实施方式中，例如通过CD95的表达增加所测量，抗体诱导细胞凋亡。还可以构建抗体以包括Fc区，其针对特定Fc受体(例如FcγRI(CD64)、FcγRIIA(CD32)、FcγRIIB1(CD32)、FcγRIIB2(CD32)、FcγRIIIA(CD16a)、FcγRIIIB(CD16b)、FcεRI,FcεRII(CD23)、FcαRI(CD89)、Fcα/μR,和FcRn)具有特异性。在另一实施方式中，抗体能够以10-10M或更小、优选10-11M或更小的平衡解离常数结合人CD40，和/或与食蟹猴CD40交叉反应。本专利技术的特定抗CD40抗体包括抗体3C3、3G5、1B4、3B6、6H6、2E1.2、1B5-NK、3B6-NS和下述的相关实施方式。在一个实施方式中，抗体包含选自由SEQIDNO：9,10,23,24,37,38,51,52,65,66,65,66,79,80,93,94,107,108组成的组中的重链可变区CDR3序列，包括其保守序列修饰(例如保守氨基酸取代)。抗体可进一步包含选自由SEQIDNO：15,16,29,30,43,44,57,58,71,72,85,86,99,100,113,114组成的组中的轻链可变区CDR3序列，包括其保守序列修饰。在另一实施方式中，重链CDR2和/或CDR1序列分别选自SEQIDNO：7,8,21,22,35,36,49,50,63,64,77,78,91,92,105,106和SEQIDNO：5,6,19,20,33,34,47,48,61,62,61,62,75,76,89,90,103,104，包括其保守序列修饰。在另一实施方式中，轻链CDR2和/或CDR1序列分别选自SEQIDNO：13,14,27,28,41,42,55,56,69,70,84,85,97,98,111,112和SEQIDNO：11,12,25,26,40,41,53,54,67,68,81,82,95,96,109,110，包括其保守序列修饰。在另一实施方式中，抗体包含具有选自由SEQIDNO：3,17,31,45,59,73,87,101组成的组中的氨基酸序列的重链可变区，包括其保守序列修饰。抗体可进一步包含具有选自由SEQIDNO：4,18,32,46,60,74,88,102组成的组中的氨基酸序列的轻链可变区，包括其保守序列修饰。在另一实施方式中，抗体包含具有以下氨基酸序列的重链和/或轻链可变区(包括其保守序列修饰)：(a)SEQIDNO：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种激动性的、分离的单克隆抗体，其结合人CD40，其中，所述抗体直接激活APC和/或增加对抗原的免疫应答而：(a)不依赖于Fc受体结合；(b)不诱导CD40表达细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)；(c)不诱导CD40表达细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)；和/或(d)不依赖于Fc受体结合并且能够与CD40L协同作用。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.18 US 62/324,1701.一种激动性的、分离的单克隆抗体，其结合人CD40，其中，所述抗体直接激活APC和/或增加对抗原的免疫应答而：(a)不依赖于Fc受体结合；(b)不诱导CD40表达细胞的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)；(c)不诱导CD40表达细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)；和/或(d)不依赖于Fc受体结合并且能够与CD40L协同作用。2.根据权利要求1所述的抗体，其还展现出以下性质中的至少一种：(a)诱导细胞凋亡；(b)增强细胞的T细胞刺激活性，如通过IL-12p40的表达增加测量出；(c)增强B细胞激活，如通过选自由HLA-DRV450、CD54PE、CD86APC和CD83BV510、CD19V500、CD54PE、HLA-DRV450、CD23PerCP-Cy5.5、CD69APC、CD86APC、CD38PerCP-Cy5.5和CD71PE组成的组中的至少一种细胞表面标志物的表达增加所测量；(d)以10-10M或更低的平衡解离常数Kd结合人CD40；(e)与食蟹猴CD40交叉反应；和/或(f)结合人CD40以导致细胞激活，如使用NFkB驱动的报告细胞系所测量。3.根据权利要求1所述的抗体，其包含IgG2重链恒定区。4.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含重链和轻链可变区，其中，所述重链和轻链可变区分别包含与以下至少80％相同的氨基酸序列：(a)SEQIDNO：3和4；(b)SEQIDNO：17和18；(c)SEQIDNO：31和32；(d)SEQIDNO：45和46；(e)SEQIDNO：59和60；(f)SEQIDNO：73和74；(g)SEQIDNO：87和88；或(h)SEQIDNO：101和102。5.根据权利要求4所述的抗体，其中，所述重链和轻链可变区分别包含与以下至少90％相同的氨基酸序列：(a)SEQIDNO：3和4；(b)SEQIDNO：17和18；(c)SEQIDNO：31和32；(d)SEQIDNO：45和46；(e)SEQIDNO：59和60；(f)SEQIDNO：73和74；(g)SEQIDNO：87和88；或(h)SEQIDNO：101和102。6.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含具有下列中所示的氨基酸序列的重链和/或轻链可变区：(a)SEQIDNO：3和/或4；(b)SEQIDNO：17和/或18；(c)SEQIDNO：31和/或32；(d)SEQIDNO：45和/或46；(e)SEQIDNO：59和/或60；(f)SEQIDNO：73和/或74；(g)SEQIDNO：87和/或88；或(h)SEQIDNO：101和/或102。7.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含来自分别具有下列中所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区的CDR序列：(a)SEQIDNO：3和4；(b)SEQIDNO：17和18；(c)SEQIDNO：31和32；(d)SEQIDNO：45和46；(e)SEQIDNO：59和60；(f)SEQIDNO：73和74；(g)SEQIDNO：87和88；或(h)SEQIDNO：101和102。8.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含分别具有SEQIDNO：17和18所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区。9.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含分别具有SEQIDNO：135和136所示的氨基酸序列的重链和轻链。10.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含：(a)分别包含SEQIDNO：5,7,9的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：11,13,15的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(b)分别包含SEQIDNO：19,21,23的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：25,27,29的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(c)分别包含SEQIDNO：33,35,37的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：39,41,43的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(d)分别包含SEQIDNO：47,49,51的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：53,55,57的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(e)分别包含SEQIDNO：61,63,65的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：67,69,71的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(f)分别包含SEQIDNO：75,77,79的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：81,83,85的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；(g)分别包含SEQIDNO：89,91,93的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：95,97,99的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列；或(h)分别包含SEQIDNO：103,105,107的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和/或分别包含SEQIDNO：109,111,113的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。11.一种分离的抗体，其结合人CD40并包含分别包含SEQIDNO：19,21,23的重链CDR1、CDR2和CDR3序列，和分别包含SEQIDNO：25,27,29的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列。12.一种分离的抗体，其结合人CD40上的与分别包含具有下列中所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区的抗体相同的表位：(a)SEQIDNO：3和4；(b)SEQIDNO：17和18；(c)SEQIDNO：31和32；(d)SEQIDNO：45和46；(e)SEQIDNO：59和60；(f)SEQIDNO：73和74；(g)SEQIDNO：87和88；或(h)SEQIDNO：101和102。13.一种分离的抗体，其与分别包含具有下列中所示的氨基酸序列的重链和轻链可变区的抗体竞争结合人CD40：(a)SEQIDNO：3和4；(b)SEQIDNO：17和18；(c)SEQIDNO：31和32；(d)SEQIDNO：45和46；(e)SEQIDNO：59和60；(f)SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：T·凯勒，J·戈德斯坦，L·A·维塔利，L·何，T·奥尼尔，A·克罗克，K·桑达拉潘迪扬，L·J·托马斯，J·维植尔，
申请(专利权)人：塞德斯医疗公司，
类型：发明
国别省市：美国,US