新型抗-SIRPa抗体及其治疗应用制造技术

本发明专利技术提供了新型抗‑SIRPa抗体，其能够特异性地拮抗SIRPa与CD47之间的相互作用，而不影响SIRPg与CD47之间的相互作用，以及提供了新型抗‑SIRPa抗体的应用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型抗-SIRPa抗体及其治疗应用本专利技术涉及免疫疗法领域。本专利技术提供了新型抗-SIRPa抗体，其能够特异性地降低SIRPa与CD47之间的相互作用而不影响SIRPg与CD47之间的相互作用。针对适应性免疫的免疫检查点已经在对抗多种癌症中显示出巨大治疗效果，但是该治疗效果只在有限比例的患者中。对骨髓细胞(巨噬细胞、树突细胞、MDSC、PMN)的免疫检查点的研究仍然不足，而这些细胞代表许多实体瘤中最丰富的免疫细胞类型并且通常与不良结果相关联。信号调节蛋白α或SIRPa(也称为SIRPα、CD172a或SHPS-1)在单核细胞、大多数组织巨噬细胞亚群、粒细胞、淋巴组织中的树突细胞亚群、一些骨髓祖细胞和神经元上不同水平表达，在脑的富含突触的区域中具有显著的高表达，例如小脑的颗粒层和海马。SIRPa是密切相关的SIRP蛋白的SIRP配对受体家族的原型成员。编码人SIRPa的基因是多态基因，并且在人群中有几种变体被描述。最常见的蛋白质变体是SIRPav1和v2(登录号NP_542970(P78324)和CAA71403)。人SIRP的多态性导致表面暴露的氨基酸发生变化，但这不影响与CD47的结合。由骨髓细胞表达的SIRPa与普遍存在的受体CD47的相互作用是先天反应的重要免疫检查点，涉及骨髓功能的调节。SIRPa与CD47的相互作用被大量描述并提供了抑制宿主细胞吞噬作用的下调信号。CD47在大多数健康细胞中以较低水平广泛地表达，但在一些癌细胞中也过表达。因此，CD47起到“别吃我”的信号作用。CD47和SIRPa还参与了许多其他相互作用。CD47-SIRPa相互作用的最佳表征生理功能之一是其在造血细胞(特别是红细胞和血小板)的体内平衡中的作用。由于CD47是“别吃我”的信号，因此是宿主细胞吞噬作用(通过巨噬细胞)的重要决定因素，近年来CD47-SIRPa相互作用在癌细胞清除中的潜在贡献得到了深入研究。结果表明，肿瘤中CD47受体的丰度与患者总体存活率呈负相关，并且构成了几种癌症类型的不良预后因素。如今，SIRPa/CD47途径受到不同的药物开发以增强巨噬细胞的吞噬作用。事实上，与受感染的细胞一样，癌细胞携带异常的货物，如不常见的蛋白质或异常水平的正常蛋白质，但这些细胞经常通过同时过表达免疫调节分子来破坏先天免疫控制机制。很明显，这样的机制涉及CD47，一种由正常细胞表达的“自身”蛋白质。CD47与SIRPa相互作用，并导致“别吃我”信号传递给吞噬巨噬细胞，然后使靶细胞不受影响。即使癌细胞被治疗性抗体包裹，癌细胞过表达CD47使得它们对巨噬细胞具有抗性，并且癌细胞过表达CD47与许多实体肿瘤和血液癌症中的不良临床结果相关。在实验模型中，特别是在免疫缺陷小鼠中的人肿瘤-异种移植模型中，通过靶向CD47的试剂阻断CD47/SIRPa途径对于促进巨噬细胞的肿瘤清除和减少癌细胞的传播和转移形成是非常有效的。通过增强巨噬细胞的抗体依赖性吞噬作用，通过靶向CD47的试剂阻断CD47/SIRPa途径已被描述为与耗尽治疗性抗癌抗体如曲妥珠单抗(抗-Her2)、西妥昔单抗(抗-EGFR)、利妥昔单抗(抗-CD20)和阿仑单抗(抗-CD52)协同作用。然而，最近显示，靶向CD47的试剂(抗-CD47或SIRPa-Fc)呈现与CD47生理作用相关的血液学毒性(贫血或血小板减少症)。此外，CD47也与SIRP家族的另一成员SIRP-γ(也称为SIRPg、SIRPγ、CD172g或SIRPβ2)结合，SIRP-γ存在于人T细胞表面上而不在人骨髓细胞上。SIRPg是近3500万年前古代世界灵长类动物中的SIRPb基因复制的结果，并在T淋巴细胞上以限制性方式表达，与骨髓细胞上的SIRPa表达相反。小鼠中不存在SIRPg。已经表明，SIRPg-CD47相互作用介导细胞-细胞粘附、增强超抗原依赖性T细胞介导的增殖，以及共刺激T细胞活化(Piccio等，Blood，105：6，2005)。由于SIRPa和SIRPg之间(特别是在与CD47相互作用的区域)的序列高度相似性，现有技术中公开的抗-SIRPa抗体也结合SIRPg并在人体中具有不良作用，例如抑制T细胞增殖和降低免疫应答。由于已知抗体的测试是在不具有SIRPg基因因而不存在这样的副作用的小鼠模型中进行的，因此无法预测抗-CD47或非选择性抗-SIRPa抗体的这种副作用。因此，本领域仍然需要新的和改进的试剂，特别是抗体，以用于安全的免疫疗法，特别是针对癌症，靶向先天免疫细胞而对T细胞免疫应答没有有害影响。特别地，需要抑制SIRPa-CD47相互作用而不影响SIRPg-CD47相互作用。本专利技术人藉由本文公开的专利技术而向前迈出了重要的一步。本专利技术的目的是通过提供新的试剂(特别是抗体)来满足这种需要，使得可以全部或部分地解决上述问题。在此，专利技术人提供新型抗-SIRPa抗体，特别是人源化抗体，其拮抗SIRPa-CD47相互作用但不特异性结合SIRPg，因此不影响SIRPg-CD47相互作用。本专利技术的抗体尤其具有以下优点：-由于SIRPa表达受限(不与人红细胞(RBC)和血小板结合)，它们避免了血液学毒性；-它们减少肿瘤生长并改变单一疗法中的肿瘤微环境；-它们与检查点抑制剂和共刺激剂呈现协同作用；-它们诱发持久的和强大的抗肿瘤记忆T淋巴细胞应答；-它们促进人类T细胞免疫应答，是SIRPa-CD47相互作用的选择性拮抗剂，而不干扰CD47/SIRPg的相互作用。出乎意料的是，尽管SIRPa和SIRPg序列之间具有高度序列同一性，但本专利技术人提供了这样的选择性抗体。基于这些特征所选择的这些新型抗体特别适用于许多治疗应用，特别是用于治疗癌症，包括炎性癌症和具有浸润性骨髓细胞(特别是具有浸润性MDSC和/或TAM细胞)的癌症。SIRPa抗体(具有表位)一方面，本专利技术涉及一种抗-SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其特异性结合至少一种肽，该肽包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SIRPa中的SEQIDNO：1(SLIPVGP)、SEQIDNO：2(G/ARELIYNQKEGH)、SEQIDNO：3(KFRKGSPD[DV]/[T]E)、SEQIDNO：4(QHTVSFTCESHGFSPRDITLKWF)、SEQIDNO：5(ICEVAHVTLQG)和SEQIDNO：6(YPQRLQLTWLE)。除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与相关领域技术人员通常理解的含义相同的含义。为方便起见，提供了说明书、实施例和权利要求中使用的某些术语和短语的含义。如本文所用，术语“抗体”包括多克隆抗体、单克隆抗体或重组抗体。如本文所用，“单克隆抗体”意指具有共同的重链氨基酸序列和共同的轻链氨基酸序列的抗体分子、抗体的制剂，这与含有不同氨基酸序列的抗体混合物的“多克隆”抗体制剂相反。单克隆抗体可以通过几种已知技术产生，例如噬菌体、细菌、酵母或核糖体展示，以及由杂交瘤衍生的抗体举例说明的经典方法。因此，术语“单克隆”指衍生自一个核酸克隆的所有抗体。本专利技术的抗体包括重组抗体。如本文所用，术语“重组抗体”是指通过重组方法制造、表达、产生或分离的抗体，例如用转染至宿主细胞的重组表达载体表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗‑人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其特异性结合至少一种选自下组的氨基酸序列的肽：人SIRPa中的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6，特别地，其特异性结合人SIRPa中的SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列的肽和至少另一种选自下组的氨基酸序列的肽：人SIRPa中的SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6；和/或其特异性结合包含至少一种选自下组的肽的构象表位：人SIRPa中的SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：71和SEQ ID NO：72。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.02.17 EP 17305182.2;2016.04.14 US 62/322,7071.一种抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其特异性结合至少一种选自下组的氨基酸序列的肽：人SIRPa中的SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6，特别地，其特异性结合人SIRPa中的SEQIDNO：3所示的氨基酸序列的肽和至少另一种选自下组的氨基酸序列的肽：人SIRPa中的SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6；和/或其特异性结合包含至少一种选自下组的肽的构象表位：人SIRPa中的SEQIDNO：70、SEQIDNO：71和SEQIDNO：72。2.根据权利要求1所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其特异性结合如下所示的氨基酸序列的肽：人SIRPa中的SEQIDNO：1、SEQIDNO：2、SEQIDNO：3、SEQIDNO：4、SEQIDNO：5和SEQIDNO：6；和/或其特异性结合由人SIRPa中的SEQIDNO：73所示的氨基酸序列的肽和SIR氨基酸序列的肽组成的构象表位。3.根据权利要求1或2所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其包含：a)重链可变结构域，包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或b)轻链可变结构域，包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：-HCDR1，包含SEQIDNO：14所示的氨基酸序列或由其组成，-HCDR2，包含SEQIDNO：15或SEQIDNO：16所示的氨基酸序列或由其组成，-HCDR3，包含SEQIDNO：17、SEQIDNO：18、SEQIDNO：19或SEQIDNO：20所示的氨基酸序列或由其组成，-LCDR1，包含SEQIDNO：21所示的氨基酸序列或由其组成，-LCDR2，包含SEQIDNO：22所示的氨基酸序列或由其组成，以及-LCDR3，包含SEQIDNO：23所示的氨基酸序列或由其组成。4.一种抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其包含：a)重链可变结构域，包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，和/或b)轻链可变结构域，包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中：-HCDR1，包含SEQIDNO：14所示的氨基酸序列或由其组成，-HCDR2，包含SEQIDNO：15或SEQIDNO：16所示的氨基酸序列或由其组成，-HCDR3，包含SEQIDNO：17、SEQIDNO：18、SEQIDNO：19或SEQIDNO：20所示的氨基酸序列或由其组成，-LCDR1，包含SEQIDNO：21所示的氨基酸序列或由其组成，-LCDR2，包含SEQIDNO：22所示的氨基酸序列或由其组成，以及-LCDR3，包含SEQIDNO：23所示的氨基酸序列或由其组成。5.根据权利要求1～4中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其是抗-SIRPa拮抗剂抗体，其抑制人CD47与人SIRPa的结合。6.根据权利要求1～5中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其不特异性结合人SIRPg。7.根据权利要求1～6中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其不特异性结合人T细胞，特别是CD3+T细胞。8.根据权利要求1～7中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其不抑制人T细胞的增殖。9.根据权利要求1～8中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其不抑制人CD47与人SIRPg的结合。10.根据权利要求1～9中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其包含：-重链可变结构域，包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SEQIDNO：24、SEQIDNO：25、SEQIDNO：26、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29和SEQIDNO：30，和/或-轻链可变结构域，包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SEQIDNO：31、SEQIDNO：32和SEQIDNO：33，特别地，其包含：-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：33所示的氨基酸序列或由其组成，-重链可变结构域，包含选自下组的氨基酸序列或由选自下组的氨基酸序列组成：SEQIDNO：24、SEQIDNO：25、SEQIDNO：26、SEQIDNO：27、SEQIDNO：28、SEQIDNO：29和SEQIDNO：30，特别是SEQIDNO：29、SEQIDNO：30，更特别是SEQIDNO：30。11.根据权利要求1～10中任一项所述的抗-人SIRPa抗体或其抗原结合片段或抗原结合抗体模拟物，其包含：-重链可变结构域，包含SEQIDNO：24所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：31所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：32所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：25所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：33所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：32所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：26所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：33所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：32所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：27所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：33所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：32所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：28所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：33所示的氨基酸序列或由其组成，或-重链可变结构域，包含SEQIDNO：29所示的氨基酸序列或由其组成，和-轻链可变结构域，包含SEQIDNO：32所示的氨基酸序列或...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·普瓦里耶，C·马里，B·瓦努夫，V·高铁尔，V·泰佩尼耶，S·彭加马，
申请(专利权)人：OSE免疫疗法，
类型：发明
国别省市：法国,FR