一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法，试样以50%乙腈的水溶液提取，经离心后，上清液经C18‑SPE固相萃取柱净化，除去杂质，在利用亲水作用色谱HILIC色谱柱分离，串联三重四级杆质谱（UPLC/MS/MS），多反应监测扫描模式（MRM），外标法定量，本发明专利技术三乙膦酸铝的方法检出限是0.01mg/kg，在0.01mg/kg到0.1mg/kg浓度水平的平均回收率在71%~95%，相对标准偏差RSD≤10%。本发明专利技术的方法操作简便、重现性好，有效去除样品提取液中的杂质，能够快速的对食品中三乙膦酸铝农药同时进行定性、定量分析。

【技术实现步骤摘要】
一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法
本专利技术属于食品检测方法
，尤其涉及一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法。
技术介绍
三乙磷酸铝(Fosetyl—aluminium)是一种有机磷类内吸性杀菌剂，具有保护和治疗作用。因其对霜霉属、疫霉属等藻菌引起的病害有良好的预防效果，所以被广泛应用于蔬菜的种植中。目前多采用气相色谱火焰光度检测器检测蔬菜中三乙磷酸铝，如日本厚生劳动省公布的官方方法，这种方法需要用重氮甲烷将其衍生成易挥发的化合物后再用气相色谱检测。重氮甲烷毒性大，不易贮存，制备时有发生爆炸的危险。所以这个方法不适合常规检测实验室中大批样品的检测。三乙磷酸铝具有极高的水溶性，分子中连接的乙基又使其具有有机物分子的性质，这种特性决定三乙磷酸铝能够被高效液相色谱串联质谱分析。国内外有报道用高效液相色谱串联质谱法测定莴苣、啤酒花和废水中三乙磷酸铝残留量，但这些方法较为繁琐，且试剂消耗量大、对环境不友好，批处理性差，且不适用于基质较为复杂的绿叶菜类、含油类食品。目前，我国尚无食品中三乙膦酸铝的检测方法的国家标准。因此，建立的快速、有效、灵敏、可靠且实用的残留分析方法对于食品安全具有重要的现实意义。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术中存在的不足，利用液液萃取技术和固相萃取技术对样品进行预处理，结和亲水作用HILIC色谱分离技术、高效液相色谱串联质谱技术，提供一种快速、高效的食品中三乙膦酸铝残留量的检测的方法。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：食品中三乙膦酸铝残留量的检测的方法，包括以下步骤：（1）提取：称取样品到塑料离心管中，加入50%乙腈的水溶液，充分涡旋混匀，进行离心；（2）净化：将步骤（1）离心后得到的水溶液过C18固相萃取柱净化；（3）过膜过滤：将步骤（2）得到的净化液过膜，待上机检测；（4）UPLC/MS/MS检测：仪器条件：流动相：A：含0.2%甲酸5mM甲酸铵水溶液+乙腈（100+5，V/V），B：乙腈离子化模式：ESI-模式色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHAmideColumn（内径2.1mm×长150mm，粒径1.8μm）进样量：1μL色谱分离条件如下表：质谱条件：多反应监测（MRM）扫描模式，三乙膦酸铝多反应监测（MRM）扫描参数如下表：其中带*为定量离子。进一步，步骤（1）中所述的提取是称取均匀制样的样品10.0g于50mL离心管中，加入20mL50%乙腈的水溶液,充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，上清液转移至一只50mL比色管中，残渣再用20mL50%乙腈的水溶液提取,充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，合并两次提取液，并用乙腈定容至50mL，混合均匀后待净化。步骤（2）中所述的净化是将步骤（1）得到的提取液5.0mL过C18-SPE固相萃取柱，净化，直接收集，该固相萃取柱预先依次用3mL乙腈、3mL水、3mL步骤（1）的提取液活化。步骤（3）中所述的过膜过滤式将步骤(2)得到的净化液过0.22μm聚四氟乙烯滤膜（PTFE滤膜），滤入进样瓶中。步骤（4）中所述的UPLC/MS/MS检测是步骤（3）所得的滤液，按照步骤（4）中所述仪器条件，上机检测。本专利技术的有益效果是：本专利技术采用液液萃取技术和固相萃取技术相结合的方法对样品进行预处理。液液萃取技术基本操作是利用化合物在两种互不相溶（或微溶）的溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中；固相萃取技术基本操作就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物或杂质吸附，使样品的基体和干扰化合物与目标化合物分离，达到分离和富集目标化合物的目的。本专利技术利用亲水作用HILIC色谱分离技术对样品进行色谱分离。亲水作用HILIC色谱分离是区别于正相色谱、反相色谱和离子色谱的一种反反相色谱分离技术，它能保留与分离强极性三乙膦酸铝。三乙膦酸铝的多反应检测（MRM）谱图详见图1。本专利技术方法检测食品中三乙膦酸铝，能够快速的进行定性、定量，检出限完全能够满足检测需求，检测效率大大提升。本专利技术采用50%乙腈水溶液提取，然后经过C18-SPE固相萃取柱净化，能够有效去除组分中的脂肪酸、糖、脂肪等干扰杂质，避免了传统方法中使用重氮甲烷等有毒、危险试剂，本专利技术对人和环境非常友好。本专利技术是样品稀释进样后采用高灵敏度的UPLC-MS/MS检测，7分钟即可完成色谱分离及进样，外标法即可定性、定量。与传统方法相比较，本专利技术不需要传统方法中的旋转蒸发、氮气干涸、浓缩等繁琐的富集操作，不需要高效液相色谱方法的30分钟甚至更长的色谱分离及进样时间，本专利技术省时省力省成本，且高效、快速、准确。附图说明图1为三乙膦酸铝多反应监测（MRM）谱图。具体实施方式以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。配制三乙膦酸铝标准品溶液，取阴性菠菜、苹果、大米、猪肉，均质粉碎均匀，分别向菠菜、苹果、大米、猪肉中添加3种不同浓度的混标，添加浓度为10μg/kg、20μg/kg、100μg/kg，于-18℃冰箱中冷冻存储备用，添加水平均等于或小于我国的限量标准，每个含量水平重复10次。实施例1：取上述菠菜样品，检测其三乙膦酸铝残留含量，步骤如下：（1）提取：称取10.0g菠菜样品到50mL塑料离心管中，加入20mL50%乙腈的水溶液，充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，上清液转移至一只50mL比色管中，残渣再用20mL50%乙腈的水溶液提取,充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，合并两次提取液，并用乙腈定容至50mL，混合均匀后待净化。；（2）净化：将步骤（1）离心后得到的提取液5.0mL过C18-SPE固相萃取柱，净化，直接收集，该固相萃取柱预先依次用3mL乙腈、3mL水、3mL步骤（1）的提取液活化；（3）过膜过滤：将步骤（2）得到的净化液过0.22μm聚四氟乙烯滤膜（PTFE滤膜），滤入进样瓶中，待上机检测；（4）UPLC/MS/MS检测：仪器条件：流动相：A：含0.2%甲酸5mM甲酸铵水溶液+乙腈（100+5，V/V），B：乙腈离子化模式：ESI-模式色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHAmideColumn（内径2.1mm×长150mm，粒径1.8μm）进样量：1μL色谱分离条件如下：三乙膦酸铝多反应监测（MRM）扫描参数如下表：表中带*为定量离子。所得到的菠菜中的三乙膦酸铝残留含量的平均回收率和相对标准偏差RSD见表1。实施例2：取上述苹果样品，检测其三乙膦酸铝残留含量，步骤如下：（1）提取：称取10.0g苹果样品到50mL塑料离心管中，加入20mL50%乙腈的水溶液，充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，上清液转移至一只50mL比色管中，残渣再用20mL50%乙腈的水溶液提取,充分涡旋混匀，4000r/min离心5min，合并两次提取液，并用乙腈定容至50mL，混合均匀后待净化。；（2）净化：将步骤（1）离心后得到的提取液5.0mL过C18-SPE固相萃取柱，净化，直接收集，该固相萃取柱预先依次用3mL乙腈、3mL水、3mL步骤（1）的提取液活化；（3）过膜过滤：将步骤（2）得到的净化液过0.22μm聚四氟乙烯滤膜（PTFE滤膜），滤入进样瓶中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：称取样品到塑料离心管中，加入50%乙腈的水溶液，充分涡旋混匀，进行离心，得到提取液；（2）净化：将步骤（1）离心后得到的提取液过C18固相萃取柱净化，得到净化液；（3）过膜过滤：将步骤（2）得到的净化液过膜，待上机检测；（4）UPLC/MS/MS检测：仪器条件：流动相：A：含0.2%甲酸5mM甲酸铵水溶液+乙腈（100+5，V/V），B：乙腈离子化模式：ESI‑模式色谱柱：ACQUITY UPLCTM BEH Amide Column （内径2.1mm×长150 mm ，粒径1.8μm）进样量：1 μL色谱分离条件如下表：

【技术特征摘要】
1.一种食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法，其特征在于包括以下步骤：（1）提取：称取样品到塑料离心管中，加入50%乙腈的水溶液，充分涡旋混匀，进行离心，得到提取液；（2）净化：将步骤（1）离心后得到的提取液过C18固相萃取柱净化，得到净化液；（3）过膜过滤：将步骤（2）得到的净化液过膜，待上机检测；（4）UPLC/MS/MS检测：仪器条件：流动相：A：含0.2%甲酸5mM甲酸铵水溶液+乙腈（100+5，V/V），B：乙腈离子化模式：ESI-模式色谱柱：ACQUITYUPLCTMBEHAmideColumn（内径2.1mm×长150mm，粒径1.8μm）进样量：1μL色谱分离条件如下表：；质谱条件：多反应监测（MRM）扫描模式，三乙膦酸铝多反应监测（MRM）扫描参数如下表：，其中带*为定量离子。2.根据权利要求1所述的食品中三乙膦酸铝残留量的检测方法，其特征在于步骤（1）中所述的提取是称取均匀制样的样品10.0g于50mL离心管中，加入20mL5...

【专利技术属性】
技术研发人员：池连学，张禧庆，梁晓辉，
申请(专利权)人：烟台杰科检测服务有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37