重楼皂苷XI的制备方法及其在治疗扁桃体炎中的应用技术

本发明专利技术提出了一种重楼皂苷XI的制备方法，按照以下方法制备：S1、称取重楼粗粉，加入缓冲溶液，高压加热浸提，冷却，加入纤维素酶和淀粉酶，超声波辅助提取，乙酸乙酯‑石油醚混合溶液萃取，过滤，减压浓缩，与硅胶混合，得重楼硅胶粉；S2、将重楼硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和甲醇的混合液进行洗脱，得到洗脱产物，薄层层析分析，合并相同样，得重楼皂苷XI粗样，减压浓缩，得到重楼皂苷XI浓缩粗样；S3、将重楼皂苷XI浓缩粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液洗脱，薄层层析分析，相同样合并，用石油醚脱脂后，乙酸乙酯‑丙酮萃取，减压浓缩，即得重楼皂苷XI。将本发明专利技术制备的重楼皂苷XI应用到治疗扁桃体炎，具有明显的效果。

【技术实现步骤摘要】
重楼皂苷XI的制备方法及其在治疗扁桃体炎中的应用
本专利技术涉及中药制药
，具体涉及一种重楼皂苷XI的制备方法及其在治疗扁桃体炎中的应用。
技术介绍
扁桃体炎通常是指位于咽喉部位的扁桃体出现的非特异性炎症，多是由于病毒或细菌感染引起的。在临床上多表现为扁桃体肿大、充血，有大量的中性粒细胞浸润，并伴有发热、咽喉疼痛等症状。临床上采用抗生素类药物对扁桃体炎进行治疗，由于当下耐药菌的不断增加，症状缓解较慢，治疗效果并不理想，极容易引起各种并发症，导致邻近的器官受到感染。重搂系百合科(Lilliaccae)重楼属(Paris)多种植物的根茎，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效，现代药理研究其更具有抗肿瘤，止血、抗炎等药理活性，其活性成分为重楼总皂苷。主要分布在我国云南、广西、四川等地。萧梅芳等人探讨了重楼皂苷I在体外对人肝癌SMMC-7721细胞株增殖和凋亡的影响及相关机制。研究显示，重楼皂苷I能时间和浓度依赖性的抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖，可能是重楼皂苷I通过阻滞肿瘤细胞的生长及诱导细胞凋亡等机制，从而抑制肝癌细胞的增殖。(萧梅芳等，重楼皂苷I对肝癌细胞的增殖及凋亡的影响.生命科学研究.2011，15(6)：519)50μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液在体外可以抑制狼疮性肾炎局部免疫反应，可能是通过提高淋巴细胞内TGF-β蛋白和IL-10蛋白的表达量来调节Th1/Th2失衡，进而提高CD4+CD25+Treg的免疫抑制作用(王娟等，重楼皂甙Ⅱ对狼疮性肾炎患者外周血CD4+CD25+T调节细胞表达的细胞因子的影响.2010，10(1)：50)。重楼皂苷XI(23S，25S)-3β,23,27-trihydroxyspirost-5en-3O-β-D-glucopyranosyl-(1→6)-β-D-glucopyranoside，是一类重要的甾体皂苷，也是重楼中主要功效成分之一，具有较高的药用价值，它也是著名的中成药云南白药、季德胜蛇药和宫血宁胶囊等的主要组成药物。重楼总皂苷可以显著降低多发性创伤模型Wistar大鼠血清中TNF-α、IL-1β及IL-6细胞因子的含量，从而减轻其肺部的损伤及局部炎症反应(凌丽等.重楼总皂苷对多发性创伤大鼠血清细胞因子水平的影响，2009，11(6)：241)。但目前，对重楼皂苷XI的报道较少，特别是将其应用到治疗扁桃体炎的药物中更是鲜有报道。在重楼皂苷的提取方面目前多以重楼总皂苷或几种皂苷混合物的提取为主，功效成分不确定，且存在提取技术烦琐，效率低且纯度不高等问题。苗药重楼和蒙药草乌叶、黑云香在治疗扁桃体炎中具有明显的效果，将其与其他中药复配，制得的中药组合物，在治疗扁桃体肿大、充血、扁桃体炎中均有良好的疗效。其中，重楼消炎去肿、土木香草乌叶清热解毒止痛、黑云香协同消炎止痛，与其他几味中药材复方配合组药，功效更佳。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术提供一种重楼皂苷XI的制备方法及其在治疗扁桃体炎中的应用，其目的在于，提供一种重楼皂苷XI的制备方法，通过高压浸提，超声波辅助混合酶提取，多次硅胶柱纯化，得到的重楼皂苷XI纯度高(可达到98％以上)，得率高(92-95％)，且方法简便，不需要苛刻的实验条件，成本低，易于实现工业化应用。本专利技术提供一种重楼皂苷XI的制备方法，按照以下方法制备：步骤一、称取重楼粗粉，加入一定体积的缓冲溶液，置于灭菌锅中高压加热浸提，提取结束后，冷却至50℃，加入一定量的纤维素酶和淀粉酶，超声波辅助提取一定时间后，高温灭火5min，用乙酸乙酯-石油醚混合溶液萃取三次，过滤，合并滤液，减压旋蒸浓缩，与硅胶混合，得重楼硅胶粉；步骤二、将步骤一制备的重楼硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和甲醇的混合液对产物进行洗脱，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，找出并提取含有重楼皂苷XI的粗样，合并相同样，得重楼皂苷XI粗样，减压浓缩，得到重楼皂苷XI浓缩粗样；步骤三、将步骤三得到的重楼皂苷XI浓缩粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述重楼皂苷XI浓缩粗样洗脱，继续进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，将与重楼皂苷XI的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述重楼皂苷XI的纯化产物的甲醇溶液，该溶液用石油醚脱脂后，乙酸乙酯-丙酮萃取，减压浓缩除去溶剂，即得重楼皂苷XI。作为本专利技术进一步的改进，重楼皂苷XI的纯度为98％以上，所述重楼皂苷XI的得率为92％-98％。作为本专利技术进一步的改进，步骤一中所述缓冲溶液为pH＝4.6的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液；所述重楼粗粉的粒经数在24-60目之间；所述重楼粗粉与缓冲溶液的固液比为1：(15-25)。作为本专利技术进一步的改进，步骤一中所述高压为1.5-2个大气压，温度为70-90℃，浸提时间为60-90min。作为本专利技术进一步的改进，步骤一中所述提取时间为120-180min；所述超声功率为600-800W；所述纤维素酶用量为(30-50)U/g底物，淀粉酶用量为(10-15)U/g底物。作为本专利技术进一步的改进，步骤一中所述硅胶为100-200目；所述乙酸乙酯-石油醚混合溶液的体积比为(1-5)：2。作为本专利技术进一步的改进，步骤二中所述硅胶为200-300目；所述洗脱为梯度洗脱；所述氯仿和甲醇的配比依次为100:1、30:1、20:1、10:1、1:1。作为本专利技术进一步的改进，步骤三中所述洗脱为梯度洗脱；所述甲醇溶液的质量分数依次为80％、85％和100％，所述乙酸乙酯-丙酮的体积比为1：(1-7)。作为本专利技术进一步的改进，步骤二和步骤三中所述紫外光为254nm。本专利技术进一步保护上述一种治疗扁桃体炎的中药组合物，所述组合物由包括以下重量份的原料制备而成：重楼皂苷XI25份；荆芥22份；玉叶金花20份；炙甘草20份；蜂蜜17份；知母15份；白芷15份；浙贝母12份；草乌叶10份；黑云香10份；杭白菊7份；薄荷5份。本专利技术进一步保护上述一种治疗扁桃体炎的中药组合物的制备方法，按照以下步骤制备：步骤一、取荆芥、玉叶金花、炙甘草、知母、白芷、浙贝母、草乌叶、黑云香、杭白菊、薄荷晒干、粉碎后混合，加入8-10倍体积水，浸泡60-120min，煎煮120-180min，减压过滤，滤液备用；步骤二、将步骤一所得药渣中加入5-7倍体积水，煎煮60-90min，减压过滤，滤液备用；步骤三、将步骤一和步骤二所得滤液合并，过400目筛，加入蜂蜜和重楼皂苷XI，混合均匀，浓缩滤液至相对密度为1.3-1.7，添加辅料，制备成常规剂型。作为本专利技术进一步的改进，辅料选自麦芽糊精、淀粉、淀粉浆、甘露醇、磷酸氢钙、二氧化硅、硬脂酸镁、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、滑石粉、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、乙醇、微粉硅胶中的一种或几种。作为本专利技术进一步的改进，常规剂型包括粉剂、颗粒剂、丸剂、片剂及胶囊剂。本专利技术具有如下有益效果：1.本专利技术制备得到的重楼皂苷XI纯度高(可达到98％以上)，得率高，且方法简便，不需要苛刻的实验条件，成本低，易于实现工业化应用；2.重楼皂苷XI具有明确止血消炎和治疗扁桃体炎的活性，能够热毒疮痈、咽喉肿痛、清热利湿、解毒消肿，与荆本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重楼皂苷XI的制备方法，其特征在于，按照以下方法制备：步骤一、称取重楼粗粉，加入一定体积的缓冲溶液，置于灭菌锅中高压加热浸提，提取结束后，冷却至50℃，加入一定量的纤维素酶和淀粉酶，超声波辅助提取一定时间后，高温灭火5min，用乙酸乙酯‑石油醚混合溶液萃取三次，过滤，合并滤液，减压旋蒸浓缩，与硅胶混合，得重楼硅胶粉；步骤二、将步骤一制备的重楼硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和甲醇的混合液对产物进行洗脱，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，找出并提取含有重楼皂苷XI的粗样，合并相同样，得重楼皂苷XI粗样，减压浓缩，得到重楼皂苷XI浓缩粗样；步骤三、将步骤三得到的重楼皂苷XI浓缩粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述重楼皂苷XI浓缩粗样洗脱，继续进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，将与重楼皂苷XI的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述重楼皂苷XI的纯化产物的甲醇溶液，该溶液用石油醚脱脂后，乙酸乙酯‑丙酮萃取，减压浓缩除去溶剂，即得重楼皂苷XI。

【技术特征摘要】
1.一种重楼皂苷XI的制备方法，其特征在于，按照以下方法制备：步骤一、称取重楼粗粉，加入一定体积的缓冲溶液，置于灭菌锅中高压加热浸提，提取结束后，冷却至50℃，加入一定量的纤维素酶和淀粉酶，超声波辅助提取一定时间后，高温灭火5min，用乙酸乙酯-石油醚混合溶液萃取三次，过滤，合并滤液，减压旋蒸浓缩，与硅胶混合，得重楼硅胶粉；步骤二、将步骤一制备的重楼硅胶粉上硅胶柱，用氯仿和甲醇的混合液对产物进行洗脱，得到洗脱产物，将得到的洗脱产物进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，找出并提取含有重楼皂苷XI的粗样，合并相同样，得重楼皂苷XI粗样，减压浓缩，得到重楼皂苷XI浓缩粗样；步骤三、将步骤三得到的重楼皂苷XI浓缩粗样上反相硅胶柱，用甲醇溶液对所述重楼皂苷XI浓缩粗样洗脱，继续进行薄层层析，在紫外光下观察显色，与重楼皂苷XI的标样对比，将与重楼皂苷XI的标样相同的斑点且在荧光下观察无其他杂质的样品合并，得含有所述重楼皂苷XI的纯化产物的甲醇溶液，该溶液用石油醚脱脂后，乙酸乙酯-丙酮萃取，减压浓缩除去溶剂，即得重楼皂苷XI。2.根据权利要求1所述一种重楼皂苷XI的的制备方法，其特征在于，所述重楼皂苷XI的纯度为98％以上，所述重楼皂苷XI的得率为92％-98％。3.根据权利要求1所述一种重楼皂苷XI的的制备方法，其特征在于，步骤一中所述缓冲溶液为pH＝4.6的Na2HPO4-柠檬酸缓冲溶液；所述重楼粗粉的粒经数在24-60目之间；所述重楼粗粉与缓冲溶液的固液比为1：(15-25)。4.根据权利要求1所述一种重楼皂苷XI的的制备方法，其特征在于，步骤一中所述高压为1.5-2个大气压，温度为70-90℃，浸提时间为60-90min。5.根据权利要求1所述一种重楼皂苷XI的的制备方法，其特征在于，步骤一中所述提取时间为120-180min；所述超声功率为600-800W；所述纤维素酶用量为(30-50)U/g底物，淀粉酶用量为(10-15)U/g底物。6.根据权利要求1所述一种重楼皂苷XI的的制备方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏祥华，李小勇，赵立春，乔丽娅，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西,45