含Gly-Pro-Arg-Pro的五肽修饰的华法林,其合成,活性和应用制造技术

含Gly‑Pro‑Arg‑Pro的五肽修饰的华法林,其合成,活性和应用，本发明专利技术公开了下式的华法林‑4‑O‑乙酰‑Gly‑Pro‑Arg‑Pro‑AA(式中AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基),公开了它们的制备方法,公开了它们的抗静脉血栓活性，因而本发明专利技术公开了它们在制备抗静脉血栓药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
含Gly-Pro-Arg-Pro的五肽修饰的华法林,其合成,活性和应用
本专利技术涉及华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA,涉及它们的制备方法,涉及它们的抗静脉血栓活性，因而本专利技术涉及它们在制备抗静脉血栓药物中的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
静脉血栓症已成为当下发病率高和死亡率高的疾病。静脉血栓症主要包括深静脉血栓和肺栓塞。深静脉血栓和肺栓塞发病的患者数不仅超过了心肌梗塞和中风发病的总人数，而且比乳腺癌和艾滋病所引起死亡的总人数高。由于静脉血栓症的发病率随年龄增长呈指数态增加，所以对我国这样的老龄化国家的人民健康的威胁尤其严重。如果把人口基数考虑进去，对我国国计民生的绝对负面影响尤其严重。于是，静脉血栓症的预防及治疗一直是医药领域所关注的重点。虽然华法林作为代表药物于1941年被用于临床实践，但是华法林的安全窗口窄。剂量不足会导致肺栓塞，剂量过高有致命性出血的风险。过去的50多年对华法林进行了大量结构改造，却都没有能够得到抗静脉血栓活性满意的类似物。与传统的思维不同，专利技术人修饰华法林结构的目标是扩大华法林的安全窗口。使它们在低剂量下显示满意的抗静脉血栓活性避免肺栓塞风险，使它们的高剂量也仍然低于华法林的常规剂量避免出血的风险。经过5年探索，专利技术人发现华法林的4位用乙酰Gly-Pro-Arg-Pro-AA修饰(AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基)生成的华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA在0.1μmol/kg剂量下具有优秀的抗静脉血栓活性。这个剂量比华法林的剂量4.87μmol/kg低48.7倍，也就是说它们的安全窗口比华法林的安全窗口大48.7倍。可见，本专利技术具有显著的技术进步。根据这个发现，专利技术人提出了本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供下式的华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA(式中AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基)。本专利技术的第二个内容是提供华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA(式中AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基)的制备方法，该方法包括：1)合成华法林-4-O-乙酸苄酯；2)合成华法林-4-O-乙酸；3)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成Gly-Pro-OBzl；4)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro；5)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成Arg(NO2)-Pro-Asp(OBzl)-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Ile-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Leu-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Phe-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Tyr-OBzl和Arg(NO2)-Pro-Val-OBzl；6)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg(NO2)-Pro-Asp(OBzl)-OBzl,华法林-4-O-乙酰-Gly-ProArg(NO2)-Pro-Ile-OBzl,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg(NO2)-Pro-Leu-OBzl,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg(NO2)-Pro-Phe-OBzl,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg(NO2)-Pro-Tyr-OBzl和华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg(NO2)-Pro-Val-OBzl；7)氢解脱保护基合成华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-Asp,华法林-4-O-乙酰-Gly-ProArg-Pro-Ile,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-Leu,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-Phe,华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-Tyr和华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-Val。本专利技术的第三个内容是评价华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA(式中AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基)的抗静脉血栓活性。附图说明图1华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA的合成路线.(i)溴-2-乙酸苄酯,丙酮,K2CO3,45℃；(ii)CH3OH,Pd/C,H2；(iii)二环己基碳二亚胺(DCC),1-羟基苯并三唑(HOBt),N-甲基吗啉(NMM),四氢呋喃(THF)；(iv)氯化氢的乙酸乙酯溶液(4N)；5a和6a中AA为Asp残基；5b和6b中AA为Ile残基；5c和6c中AA为Leu残基；5d和6d中AA为Phe残基；5e和6e中AA为Tyr残基；5f和6f中AA为Val残基。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备华法林-4-O-乙酸苄酯将26.48g(80.00mmol)华法林与400mL丙酮于45℃搅拌至华法林溶解。往得到的溶液中加14mL(88mmol)溴乙酸苄酯，继续于45℃搅拌96h，薄层层析(TLC，石油醚/乙酸乙酯＝2/1)显示反应完成。反应液过滤除，滤液减压浓缩，得到的淡黄色油状物用硅胶柱层析纯化(石油醚/乙酸乙酯＝8/1)，得到19.77g(54％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):457[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ/ppm＝7.89(dd,J1＝3.0Hz,J2＝9.0Hz,1H),7.63(dt,J1＝3.0Hz,J2＝9.0Hz,1H),7.43～7.31(m,9H),7.24(t,J＝9.0Hz,2H),7.15(tt,J＝9.0Hz,1H),5.26(s,2H),5.61(s,1H),5.02(d,J＝15.0Hz,1H),4.85(d,J＝15.0Hz,1H),4.97(t,J＝9.0Hz,1H),3.45(dq,J1＝9.0Hz,J2＝18.0Hz,2H),2.11(s,3H)。实施例2制备华法林-4-O-乙酸将19.77g(43.36mmol)华法林-4-O-乙酸苄酯溶于150mL四氢呋喃，然后与4.94g钯碳(Pd/C)悬浮。往里通氢气72h。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)显示反应完全。滤去Pd/C，滤液减压浓缩，得到15.58g(98％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e):367[M+H]+；1H-NMR(300MHz,DMSO-d6):δ/ppm＝12.86(s,1H),7.90(d,J＝6.0Hz,1H),7.63(t,J＝6.0Hz,1H),7.43～7.34(m,4H),7.27(t,J＝9.0Hz,2H),7.17(t,J＝9.0Hz,1H),4.99(t,J＝9.0Hz,1H),4.75(dd,J1＝15.0Hz,J2＝30.0Hz,2H),3.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.下式的华法林‑4‑O‑乙酰‑Gly‑Pro‑Arg‑Pro‑AA，

【技术特征摘要】
1.下式的华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA，式中AA为Asp残基,Ile残基,Leu残基,Phe残基,Tyr残基和Val残基。2.权利要求1的华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro-Arg-Pro-AA的制备方法，该方法包括：1)合成华法林-4-O-乙酸苄酯；2)合成华法林-4-O-乙酸；3)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成Gly-Pro-OBzl；4)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成华法林-4-O-乙酰-Gly-Pro；5)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成Arg(NO2)-Pro-Asp(OBzl)-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Ile-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Leu-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Phe-OBzl,Arg(NO2)-Pro-Tyr-OBzl和Arg(NO2)-Pro-Val-OBzl；6)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，1-羟基苯并三唑为催化剂，采用液相法合成华法林-4-O-乙酰-Gl...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵明，彭师奇，王玉记，吴建辉，侯梦雨，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11