一种快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，涉及生物技术领域。该试剂盒包括免疫荧光试纸条，试纸条包括支撑垫片、检测膜、偶合物垫片、过滤垫片、吸水垫片和样本垫片；样本垫片包被有红细胞阻断剂，检测膜上设有心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白测试带和质控带，心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白测试带分别包被有心肌肌钙蛋白Ｉ抗体A、肌酸激酶同工酶抗体A与肌红蛋白抗体A，质控带上包被有抗链霉亲和素抗体，偶合物垫片上包被有异嗜性抗体阻断剂、荧光染料偶合物。本发明专利技术免疫荧光试剂盒能够快速、准确、高灵敏度的同时检测样本中的心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白，有助于急性心肌梗死的早期快速诊断。

An Immunofluorescence Kit for Rapid Quantitative Detection of Cardiac Troponin I, Creatine Kinase Isozyme and Myoglobin

The invention provides an immunofluorescence kit for rapid quantitative detection of cardiac troponin I, creatine kinase isoenzyme and myoglobin, which relates to the field of biotechnology. The kit includes immunofluorescence test strip, which includes support gasket, detection membrane, conjugate gasket, filter gasket, water absorbent gasket and sample gasket; sample gasket is coated with erythrocyte blocker, and the test membrane is equipped with cardiac troponin I, creatine kinase isoenzyme and myoglobin test band and quality control band, and myocardium. Troponin I, creatine kinase isoenzyme and myoglobin test bands were coated with cardiac troponin I antibody A, creatine kinase isoenzyme antibody A and myoglobin antibody A, respectively. Antistreptavidin antibody was coated on the quality control band, and heterophilic antibody blocker and fluorescent dye conjugate were coated on the conjugate gasket. The immunofluorescence kit can simultaneously detect cardiac troponin I, creatine kinase isozyme and myoglobin in samples with fast, accurate and high sensitivity, and is helpful for early and rapid diagnosis of acute myocardial infarction.

【技术实现步骤摘要】
一种快速定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种快速定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒。
技术介绍
急性心肌梗死(AMI)是冠状动脉急性、持续性缺血缺氧所引起的心肌坏死。临床上多有剧烈而持久的胸骨后疼痛，休息及硝酸酯类药物不能完全缓解，伴有血清心肌酶活性增高及进行性心电图变化，可并发心律失常、休克或心力衰竭，常可危及生命。急性心肌梗死发生后，如果在数小时内不能得到明确诊断及适当治疗，心肌将因缺血、缺氧造成不可逆坏死；在急性心肌梗死的诊断过程中，心电图是不可缺少的检测项目之一，但大量临床资料显示其敏感性只有50％，因此，血清心肌损伤标志物的联合检测成为目前急性心肌梗死诊断的主流趋势。心肌肌钙蛋白I(cTnI)：肌钙蛋白为肌肉收缩调节蛋白，包括三个结构不同的亚基，即肌钙蛋白T(TnT)、肌钙蛋白I(TnI)和肌钙蛋白C(TnC)。心肌肌钙蛋白I是一种结构蛋白，与肌动球蛋白在静止状态时相结合，抑制肌动球蛋白的ATP酶活性。心肌中I亚基结构(cTnI)不同于其他肌肉组织，具有心肌特异性；同时心肌肌钙蛋白I分子量小，心肌损伤后，迅速释放至血液中，4-6小时后血中浓度升高，并可维持4-10天。由于其高度的心肌特异性和灵敏度，肌钙蛋白I已成为目前最理想的心肌梗死标志物。全球心肌梗死工作组、欧洲心脏病学会(ESC)、美国心脏病学会(ACC)、美国心脏学会(AHA)、欧洲高血压学会(EHS)和世界卫生组织(WHO)，将心肌肌钙蛋白I定为急性心肌梗死(AMI)诊断的“金标准”、急性冠脉综合征(ACS)危险分层的首选标志物。肌酸激酶同工酶(CK-MB)：肌酸激酶(CK)同工酶是由M亚基和B亚基以不同方式组合成的二聚体，主要存在骨骼肌和心肌细胞，有三种同工酶：CK-MM，CK-MB，CK-BB，其中肌酸激酶同工酶在心肌中的活性是骨骼肌中的5倍，肌酸激酶同工酶在急性心肌梗死发病后4-8小时升高，12-20小时达到高峰，对于急性心肌梗死诊断的特异性和敏感性均较优。肌红蛋白(Myoglobin)：肌红蛋白是存在于心肌和骨骼肌胞浆中的色素蛋白，在急性心肌梗死(AMI)发病后1-4小时就可在血中检测到升高，6-7小时达到峰值，是代表心肌损伤的最早期生化标志物之一，具有高度的敏感性。但肌红蛋白无心肌特异性，其与心肌肌钙蛋白I及肌酸激酶同工酶联合检测可有助于急性心肌梗死的早期诊断。现有技术中，缺乏准确性高、灵敏度高、检测时间短的心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的试剂盒。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种快速定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，能够快速、准确、高灵敏度的同时检测全血、血清或血浆中的心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白，有助于急性心肌梗死的早期快速诊断。本专利技术的目的采用如下技术方案实现。一种快速定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，包括免疫荧光试剂条，所述试纸条包括支撑垫片、设置于所述支撑垫片上的检测膜，所述检测膜的两端分别连接有过滤垫片和吸水垫片，所述过滤垫片连接有偶合物垫片，所述偶合物垫片的另一端连接有样本垫片；所述样本垫片包被有红细胞阻断剂，自样本垫片至吸水垫片方向所述检测膜上依次设有心肌肌钙蛋白I测试带、肌酸激酶同工酶测试带、肌红蛋白测试带和质控带，所述心肌肌钙蛋白I测试带包被有心肌肌钙蛋白I抗体A，所述肌酸激酶同工酶测试带包被有肌酸激酶同工酶抗体A，所述肌红蛋白测试带包被有肌红蛋白抗体A，所述质控带上包被有抗链霉亲和素抗体，所述偶合物垫片上包被有异嗜性抗体阻断剂、荧光染料标记的心肌肌钙蛋白I抗体B、肌酸激酶同工酶抗体B与肌红蛋白抗体B。在本专利技术中，所述心肌肌钙蛋白I抗体A是购自Hytest公司的鼠抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体，货号4TC2；所述肌酸激酶同工酶抗体A是购自Biospacific公司的鼠抗人肌酸激酶同工酶抗体，货号：A27020067P；所述肌红蛋白抗体A是购自Biospacific公司的鼠抗人肌红蛋白抗体，货号：A27340228P；所述抗链霉亲和素抗体购自Prospec公司，货号：ANT-345。在本专利技术中，所述异嗜性抗体阻断剂购自ScantibodiesLaboratory公司，货号：3KG775。在本专利技术中，所述红细胞阻断剂是小鼠抗人红细胞单克隆抗体。在本专利技术中，所述心肌肌钙蛋白I抗体B是Biospacific公司的鼠抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体，货号为A34600384P，所述肌酸激酶同工酶抗体B是购自Biospacific公司的鼠抗人肌酸激酶同工酶抗体，货号：A27080359P；所述肌红蛋白抗体B是购自Fitzgerald公司的鼠抗人肌红蛋白抗体，货号：10-M50C。在本专利技术中，所述样本垫片、偶合物垫片、过滤垫片、检测膜和吸水垫片均设置于支撑垫片上、且呈直线排布。在本专利技术中，所述心肌肌钙蛋白I测试带、肌酸激酶同工酶测试带、肌红蛋白测试带和质控带四者平行。本专利技术试剂盒可以用于快速、准确、高灵敏度的检测全血、血清和血浆中的心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白，有助于急性心肌梗死的早期快速诊断。本专利技术试纸条对样本中cTnI的检测限为0.08ng/ml，检测的线性范围是0.1ng/ml～40ng/ml；对CK-MB的检测限为0.5ng/ml，检测的线性范围是1ng/ml～50ng/ml；对Myoglobin的检测限为5ng/ml，检测的线性范围是15ng/ml～400ng/ml。在线性范围内，剂量-反应曲线相关系数(r)不低于0.990。另外，本专利技术试纸条重复性检测结果的变异系数均<10.0％，说明本试剂检测结果重复性好，精密度高。本专利技术免疫荧光试剂盒的临床意义在于(1)有助于急性冠状动脉综合征的早期诊断和危险分层；(2).估计心肌缺血损伤面积；(3)各种胸痛原因的鉴别诊断；(4)左心室功能评估；(5)某些治疗药物的临床疗效评估；(6)更加频繁地早期检测cTnI或CK-MB，尤其是联合检测Myoglobin，可以帮助尽早诊断出心肌梗死并且有利于尽早启动治疗；(7)诊断各种心肌损伤：心肌炎，心肌创伤，心脏手术，围手术期心脏并发症，严重脓毒血症和脓毒血症导致的左心衰竭，充血性心功能不全等疾病。附图说明图1是本专利技术试纸条的结构简图，其中1-样本垫片，2-偶合物垫片，3-过滤垫片，4-检测膜，5-支撑垫片，6-吸水垫片。具体实施方式实施例1制备定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的免疫荧光试剂条如图1，定量检测心肌肌钙蛋白I、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的免疫荧光试纸条，该试纸条包括支撑垫片5、设置于支撑垫片上的检测膜4，检测膜的两端分别连接有过滤垫片3和吸水垫片6，过滤垫片连接有偶合物垫片2，偶合物垫片的另一端连接有样本垫片1，其中样本垫片包被有红细胞阻断剂，自样本垫片至吸水垫片方向检测膜上依次设有心肌肌钙蛋白I测试带、肌酸激酶同工酶测试带、肌红蛋白测试带和质控带，心肌肌钙蛋白I测试带包被有心肌肌钙蛋白I抗体，肌酸激酶同工酶测试带包被有肌酸激酶同工酶抗体，肌红蛋白测试带包被有肌红蛋白抗体，质控带上包被有抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，其特征在于包括免疫荧光试纸条，所述试纸条包括支撑垫片、设置于所述支撑垫片上的检测膜，所述检测膜的两端分别连接有过滤垫片和吸水垫片，所述过滤垫片连接有偶合物垫片，所述偶合物垫片的另一端连接有样本垫片；所述样本垫片包被有红细胞阻断剂，所述检测膜上设有心肌肌钙蛋白Ｉ测试带、肌酸激酶同工酶测试带、肌红蛋白测试带和质控带，所述心肌肌钙蛋白Ｉ测试带包被有心肌肌钙蛋白Ｉ抗体A，所述肌酸激酶同工酶测试带包被有肌酸激酶同工酶抗体A，所述肌红蛋白测试带包被有肌红蛋白抗体A，所述质控带上包被有抗链霉亲和素抗体，所述偶合物垫片上包被有异嗜性抗体阻断剂、荧光染料标记的心肌肌钙蛋白Ｉ抗体B、肌酸激酶同工酶抗体B与肌红蛋白抗体B。

【技术特征摘要】
1.一种快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，其特征在于包括免疫荧光试纸条，所述试纸条包括支撑垫片、设置于所述支撑垫片上的检测膜，所述检测膜的两端分别连接有过滤垫片和吸水垫片，所述过滤垫片连接有偶合物垫片，所述偶合物垫片的另一端连接有样本垫片；所述样本垫片包被有红细胞阻断剂，所述检测膜上设有心肌肌钙蛋白Ｉ测试带、肌酸激酶同工酶测试带、肌红蛋白测试带和质控带，所述心肌肌钙蛋白Ｉ测试带包被有心肌肌钙蛋白Ｉ抗体A，所述肌酸激酶同工酶测试带包被有肌酸激酶同工酶抗体A，所述肌红蛋白测试带包被有肌红蛋白抗体A，所述质控带上包被有抗链霉亲和素抗体，所述偶合物垫片上包被有异嗜性抗体阻断剂、荧光染料标记的心肌肌钙蛋白Ｉ抗体B、肌酸激酶同工酶抗体B与肌红蛋白抗体B。2.根据权利要求1所述快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶和肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，其特征在于所述心肌肌钙蛋白Ｉ抗体A是购自Hytest公司的鼠抗人心肌肌钙蛋白Ｉ单克隆抗体，货号4TC2；所述肌酸激酶同工酶抗体A是购自Biospacific公司的鼠抗人肌酸激酶同工酶抗体，货号：A27020067P；所述肌红蛋白抗体A是购自Biospacific公司的鼠抗人肌红蛋白抗体，货号：A27340228P；所述抗链霉亲和素抗体购自Prospec公司，货号：AN...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈子健，刘建源，郁靓，朱奇峰，宗荣芳，钱亦妮，李娜，於敏，高月秀，解慧梅，郝福星，邱树磊，郭方超，
申请(专利权)人：瑞莱生物科技江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32