本发明专利技术公开了一种快速定量检测人血清淀粉样蛋白A的试剂盒，包括免疫荧光试纸条、卡壳，免疫荧光试纸条含有偶合物垫片，偶合物垫片上载有SAA单克隆抗体‑生物素‑链霉亲和素‑荧光染料偶合物。本发明专利技术还公开了一种荧光染料偶合物的制备方法，包括如下步骤：S1.将鼠抗人SAA单克隆抗体采用生物素进行标记，形成SAA单克隆抗体‑生物素；将荧光染料采用链霉亲和素进行标记，形成链霉亲和素‑荧光染料；S2.将SAA单克隆抗体‑生物素、链霉亲和素‑荧光染料混合于缓冲液中，孵育。本发明专利技术的免疫荧光试剂盒能够快速定量检测人血清淀粉样蛋白A，检测样本无需稀释，能够快速、准确、高灵敏度的同时检测全血、血清或血浆中的人血清淀粉样蛋白A。
1、血清淀粉样蛋白a(serum amyloid a protein,saa)是一类多基因编码的多形态蛋白家族，属于急性时相反应蛋白，在疾病诊疗中发挥着重要作用。在炎症或感染急性期，saa在48～72小时内迅速升高，并于疾病恢复期迅速下降。saa具有高度敏感性，已有研究表明，细菌、病毒感染，动脉粥样硬化、冠心病、急性移植排斥反应、肿瘤等疾病中均检测到血清saa升高，saa对于这些疾病的早期诊断具有重要价值。
2、目前临床和实验室检测saa的方法包括放射性免疫测定法、酶联免疫吸附法、乳胶免疫比浊法、免疫层析法等。放射性免疫测定法存在放射污染已逐渐退出临床检验领域；酶联免疫分析法的检测灵敏度不够高，检测范围窄，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性，目前主要应用于传染性疾病筛查等对灵敏度要求低的项目。乳胶免疫比浊法操作简单、快速，但是灵敏度低、低值重复性差。其中，免疫层析法包括胶体金定量免疫层析法、荧光定量免疫层析法、化学发光定量检测法。目前临床使用的荧光定量免疫层析法的原理是双抗体夹心法，绝大多数使用的荧光标记物为荧光微球、荧光染料直接标记的工艺。但是，免疫荧光双抗体夹心法检测需要对样本进行稀释，操作繁杂。因此，开发出一种采用更有效的荧光定量免疫层析法及应用更佳的荧光标记物检测人血清淀粉样蛋白a的试剂盒，具有重要的价值。截至目前，尚未查到别家开发出不需要对样本进行稀释的人血清淀粉样蛋白a免疫层析检测试剂盒。
r/>技术实现思路
1、为了解决现有技术存在的问题，本专利技术公开了一种应用新型荧光聚合物的基于竞争法原理的荧光免疫层析技术定量检测人血清淀粉样蛋白a的试剂盒。具体技术方案如下：
2、在本专利技术的第一方面，提供一种快速定量检测人血清淀粉样蛋白a的试剂盒，包括免疫荧光试纸条、卡壳，所述免疫荧光试纸条含有偶合物垫片，其特征在于所述偶合物垫片上载有荧光染料偶合物，所述荧光染料偶合物为saa单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-荧光染料偶合物。
3、进一步的，所述荧光染料为cf770。
4、在一些具体实施方案中，所述免疫荧光试纸条包括支撑垫片、检测膜、过滤垫片、吸水垫片、样本垫片，所述支撑垫片上设置有所述检测膜，所述检测膜的两端分别连接有所述过滤垫片和所述吸水垫片，所述偶合物垫片的两端分别与所述过滤垫片和所述样本垫片连接。
5、进一步的，所述样本垫片、偶合物垫片、过滤垫片、检测膜和吸水垫片均设置于支撑垫片上且呈直线排布。
6、在一些具体实施方案中，所述样本垫片包被有红细胞阻断剂。
7、进一步的，红细胞阻断剂为鼠抗人红细胞单克隆抗体。
8、在一些具体实施方案中，所述检测膜上设置包被人血清淀粉样蛋白a抗原的测试带t线和包被羊抗链霉亲和素多克隆抗体的质控带c线。
9、在一些具体实施方案中，所述样本垫片的材质是玻璃纤维；所述偶合物垫片的材质是玻璃纤维；所述过滤垫片的材质是玻璃纤维；所述检测膜是硝酸纤维素膜；所述支撑垫片的材质为聚氯乙烯；所述吸水垫片的材质为玻璃纤维和棉绒混合物。
10、试剂盒采用免疫荧光层析技术，基于双抗原竞争法原理定量检测样本中血清淀粉样蛋白a的浓度。先将待测样本加入到检测试纸条的样本加样口中，随着液体的流动，待检样本先经过样本垫片1，然后再与偶合物垫片2上包被的荧光染料偶合物结合形成反应复合物(抗原1-抗体反应)。该反应复合物沿着检测膜4向前移动，未与待测物结合的荧光偶合物被固定在检测膜4检测线t线上的血清淀粉样蛋白a抗原所捕获(抗原2-抗体反应)，样本中的血清淀粉样蛋白a越多，检测线t线上积聚的复合物越少，荧光信号越弱，荧光信号的强度与样本中的待测物数量成反比关系，通过配套仪器可检测出待测样本中的血清淀粉样蛋白a的浓度。荧光染料偶合物被固定在检测膜4的羊抗链霉亲和素多克隆抗体所捕获作为质控线c线。
11、在本专利技术的第二方面，提供一种荧光染料偶合物的制备方法，包括如下步骤：
12、s1.将鼠抗人saa单克隆抗体采用生物素进行标记，形成saa单克隆抗体-生物素；将荧光染料采用链霉亲和素进行标记，形成链霉亲和素-荧光染料；
13、s2.将saa单克隆抗体-生物素、链霉亲和素-荧光染料混合于缓冲液中，孵育。
14、在一些具体实施方案中，所述s2步骤中，将saa单克隆抗体-生物素、链霉亲和素-荧光染料按链霉亲和素与生物素1:3～7的物质的量比混合于缓冲液中，23～27℃孵育30～60min。
15、进一步的，所述s2步骤中，将saa单克隆抗体-生物素、链霉亲和素-荧光染料按链霉亲和素与生物素1：4的物质的量比混合于缓冲液中，25℃孵育30min。
16、在本专利技术的第三方面，提供一种荧光染料偶合物在制备快速定量检测人血清淀粉样蛋白a的试剂盒中的应用。
17、进一步的，所述荧光染料偶合物为saa单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-荧光染料偶合物。
18、与现有技术相比，本专利技术具备如下有益效果：
19、本专利技术的免疫荧光试剂盒能够快速定量检测人血清淀粉样蛋白a，检测样本无需稀释，能够快速、准确、高灵敏度的同时检测全血、血清或血浆中的人血清淀粉样蛋白a，有助于快速诊断非特异性炎症。
20、以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
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【技术保护点】
1.一种快速定量检测人血清淀粉样蛋白A的试剂盒，包括免疫荧光试纸条、卡壳，所述免疫荧光试纸条含有偶合物垫片，其特征在于所述偶合物垫片上载有荧光染料偶合物，所述荧光染料偶合物为SAA单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-荧光染料偶合物。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为CF770。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫荧光试纸条包括支撑垫片、检测膜、过滤垫片、吸水垫片、样本垫片，所述支撑垫片上设置有所述检测膜，所述检测膜的两端分别连接有所述过滤垫片和所述吸水垫片，所述偶合物垫片的两端分别与所述过滤垫片和所述样本垫片连接；所述样本垫片、偶合物垫片、过滤垫片、检测膜和吸水垫片均设置于支撑垫片上且呈直线排布。
4.根据权利要求1或3所述的试剂盒，其特征在于，所述样本垫片包被有红细胞阻断剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述红细胞阻断剂为鼠抗人红细胞单克隆抗体。
6.根据权利要求1或3所述的试剂盒，其特征在于，所述检测膜上设置包被人血清淀粉样蛋白A抗原的测试带T线和包被羊抗链霉亲和素多克隆抗体的质控带C线。
7.一种荧光染料偶合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述S2步骤中，将SAA单克隆抗体-生物素、链霉亲和素-荧光染料按链霉亲和素与生物素1：3～7的物质的量比混合于缓冲液中，23～27℃孵育30～60min。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述S2步骤中，将SAA单克隆抗体-生物素、链霉亲和素-荧光染料按链霉亲和素与生物素1：4的物质的量比混合于缓冲液中，25℃孵育30min。
10.SAA单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-荧光染料偶合物在制备快速定量检测人血清淀粉样蛋白A的试剂盒中的应用。
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【技术特征摘要】
1.一种快速定量检测人血清淀粉样蛋白a的试剂盒，包括免疫荧光试纸条、卡壳，所述免疫荧光试纸条含有偶合物垫片，其特征在于所述偶合物垫片上载有荧光染料偶合物，所述荧光染料偶合物为saa单克隆抗体-生物素-链霉亲和素-荧光染料偶合物。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述荧光染料为cf770。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述免疫荧光试纸条包括支撑垫片、检测膜、过滤垫片、吸水垫片、样本垫片，所述支撑垫片上设置有所述检测膜，所述检测膜的两端分别连接有所述过滤垫片和所述吸水垫片，所述偶合物垫片的两端分别与所述过滤垫片和所述样本垫片连接；所述样本垫片、偶合物垫片、过滤垫片、检测膜和吸水垫片均设置于支撑垫片上且呈直线排布。
4.根据权利要求1或3所述的试剂盒，其特征在于，所述样本垫片包被有红细胞阻断剂。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘辉荣，朱永青，窦彩云，李文婷，沈逸凡，王静梅，
申请(专利权)人：瑞莱生物科技江苏有限公司，
类型：发明
国别省市：
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