检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法技术

本发明专利技术提供了一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其包括如下步骤：A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO2纳米粒子和3,3',5,5'‑四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。本发明专利技术具有如下的有益效果：1、本发明专利技术所利用的CeO2纳米粒子在水溶液中分散较好；2、本发明专利技术所提出方法检测时间短。

【技术实现步骤摘要】
检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法
本专利技术涉及一种检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法，属于分析测试

技术介绍
谭等人利用Cu-MOFs类过氧化物酶活性实现了碱性磷酸酶的检测(AnalyticaChimicaActa,2018,1004,74)。具体检测步骤：首先，将PPi及不同浓度ALP置于37℃恒温孵育40分钟；然后向溶液中依次加入Cu-MOFs、过氧化氢、ABTS及HEPES缓冲溶液，混合均匀后后置于37℃恒温孵育50分钟进行紫外-可见吸收光谱测试。该方法需要制备的Cu-MOFs分散性较差，检测时间较长，同时需要使用不稳定的过氧化氢用于氧化过氧化物酶底物。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷，本专利技术的目的是提供一种检测碱性磷酸酶活性以及碱性磷酸酶抑制剂浓度的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术提供了一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其包括如下步骤：A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO2纳本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO2纳米粒子和3,3',5,5'‑四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外‑可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。

【技术特征摘要】
1.一种检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：A1：将三(羟甲基)氨基甲烷、焦磷酸盐混匀后，分成若干份反应体系，每一份所述反应体系中分别加入不同浓度的碱性磷酸酶，在37℃下孵育后，在每一份反应体系中依次加入醋酸缓冲液、CeO2纳米粒子和3,3',5,5'-四甲基联苯胺，在22～47℃下孵育后，分别进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程；A2：将待测碱性磷酸酶按照步骤A1的操作进行紫外-可见吸收光谱的测量，得到ΔA，将ΔA代入步骤A1中得到的碱性磷酸酶活性与ΔA的关系方程，计算出待测碱性磷酸酶的活性。2.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述三(羟甲基)氨基甲烷的pH值为7.4，焦磷酸盐的浓度为0.07mM，CeO2纳米粒子的浓度为0.05～0.3mg/mL，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的浓度为0.1～0.9mM。3.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述孵育时间不超过9min。4.如权利要求1所述的检测碱性磷酸酶活性的方法，其特征在于，所述醋酸缓冲液的pH值为3.6～5.6。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：逯一中，倪朋娟，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37