一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是(1)设计并选择合适的靶向小鼠Pdzd7基因的Guide RNA；(2)体外合成Cas9 mRNA和Guide RNA；(3)将Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比共同配制成注射样品对受精卵注射；(4)对获得的F0代小鼠进行鉴定；(5)阳性F0代小鼠传代及F1代小鼠的获得与鉴定。本方法可以成功获得与人类中p.C732LfsX18致病突变相近的Pdzd7基因突变小鼠模型，为研究人类中PDZD7致病突变的相关因素和诊断治疗提供了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种Pdzd7基因突变动物模型的构建方法
本专利技术属于利用基因修饰技术制作基因突变动物模型
，具体涉及一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法。
技术介绍
CRISPR/Cas(ClusteredRegularlyInterspacedShotPalindromicrepeats/CRISPR-associated)系统是原核生物中一种抵抗外源基因侵入的获得性免疫系统，在细菌和古生菌中CRISPR系统整合侵入宿主的噬菌体或者质粒DNA的片段到CRISPR位点，然后通过相应的CRISPRRNAs(crRNAs)引导Cas核酸内切酶对外源DNA序列进行切割，从而抵抗病毒或者噬菌体的入侵。CRISPR/Cas系统分为3种类型(TypeⅠ、TypeⅡ和TypeⅢ)，其中TypeⅡ系统因其简单、高效以及功能多样化等优点，自2013在哺乳动物细胞中成功实现基因编辑后，现已被广泛用于多种模式生物的基因组修饰技术应用中。Ⅱ型系统可以通过crRNA的引导利用单个Cas9核酸酶对DNA靶位点进行精确充分地切割。CRISPR/Cas9系统相关载体构建简单快速，便于操本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是：(1)在小鼠Pdzd7基因11号外显子上p.C728LfsX18致病突变位点附近设计合适的Guide RNA；其中引物Guide RNA target site 1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物Guide RNA target site 2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；(2)体外合成Guide RNA和Cas9 mRNA；(3)将合成后Guide RNA和Cas9 mRNA等摩尔比配制成100ul注射样品，将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄原核中，培养恢复后移植入假孕受...

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas9技术的Pdzd7基因突变动物模型的构建方法，步骤是：(1)在小鼠Pdzd7基因11号外显子上p.C728LfsX18致病突变位点附近设计合适的GuideRNA；其中引物GuideRNAtargetsite1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，引物GuideRNAtargetsite2的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；(2)体外合成GuideRNA和Cas9mRNA；(3)将合成后GuideRNA和Cas9mRNA等摩尔比配制成100ul注射样品，将样品注射到取自C57BL/6J母鼠受精卵的雄...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐志刚，杜海波，王燕飞，
申请(专利权)人：山东大学深圳研究院，山东大学，
类型：发明
国别省市：广东,44