一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法。本发明专利技术采用在陆川猪基因组的CD163基因的外显子7上设计两条gRNA，分别构建至pX458和Px458R载体上，使CD163基因发生DNA片段的精确删除而破坏外显子7所编码的SRCR5半个结构域，从而获得抗PRRSV感染的CD163基因编辑猪。本发明专利技术的方法通过双荧光筛选能够更加有效地破坏CD163的SRCR5结构域。

【技术实现步骤摘要】
一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法
本专利技术涉及生物
，具体来说，涉及一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪繁殖障碍和仔猪的呼吸道症状为主要特征的高度传染性疾病。CD163是一种位于细胞膜上的富含半胱氨酸(SRCR)结构域的PRRSV细胞受体，在PRRSV感染后病毒的脱壳与核酸释放过程中发挥重要的作用。CD163共含有9个SRCR结构域，其中SRCR5在病毒感染过程中发挥主要的作用，有研究表明，SRCR5的缺失或破坏能抑制PRRSV的感染。同时有体外实验证明，SRCR5主要由CD163基因的外显子7负责编码。该发现为构建抗PRRSV的CD163基因编辑动物提供了依据，即通过基因编辑技术结合体细胞核移植的方法，制备出SRCR5被破坏的抗PRRSV的CD163基因编辑动物。Cas9和gRNA是CRISPR/Cas9系统的基本成分，gRNA用于特异位本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法，其特征在于：在陆川猪基因组的CD163基因的外显子7上设计两条gRNA，分别构建至pX458和pX458R载体上，使CD163基因实现DNA片段的精确删除而破坏外显子7所编码的SRCR5结构域，得到抗PRRSV感染的CD163基因编辑猪；其中，所述CD163基因的外显子7的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种利用CRISPR/Cas9编辑陆川猪CD163基因的方法，其特征在于：在陆川猪基因组的CD163基因的外显子7上设计两条gRNA，分别构建至pX458和pX458R载体上，使CD163基因实现DNA片段的精确删除而破坏外显子7所编码的SRCR5结构域，得到抗PRRSV感染的CD163基因编辑猪；其中，所述CD163基因的外显子7的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：用于打靶所述CD163基因的外显子7的所述两条gRNA分别为核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的单链DNA分子以及核苷酸序列如SEQIDNO.3所示的单链DNA分子。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：通过CRISPR/Cas9进行基因编辑对应的精确删除区域为如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列自5’末端第24-147位的核苷酸。4.根据权利要求2或3中任一项所述的方法，其特征在于，通过CRISPR/Cas9进行基因编辑的步骤如下：步骤1：将核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的gRNA-10构建到能表达Cas9...

【专利技术属性】
技术研发人员：何祖勇，陈瑶生，刘小红，王敏，刘小凤，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44