一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用制造技术

一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507及其应用，属于食品安全免疫检测技术领域。本发明专利技术甲霜灵完全抗原与等量弗氏佐剂混合乳化完全，通过背部皮下注射免疫BALB/c小鼠。首次免疫（100μg/只）用完全弗氏佐剂，多次加强免疫（50μg/只）用不完全弗氏佐剂，最后一次用甲霜灵完全抗原（25μg/只，不含佐剂）冲击免疫。取高效价的IC50小鼠的脾细胞，通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接竞争酶联免疫法筛选和三次亚克隆，得到甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507。此细胞株分泌的单克隆抗体，对甲霜灵具有较好的特异性和检测灵敏度（IC50值为40 ng/mL），为食品中甲霜灵残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

A Hybridoma Cell Line Containing Metalaxyl Monoclonal Antibody and Its Application

A monoclonal antibody hybridoma cell line of metalaxyl 20170507 and its application belong to the field of food safety immunoassay technology. The methylprednisolone complete antigen and the equivalent Freund's adjuvant are emulsified completely, and BALB/c mice are immunized by subcutaneous injection on the back. The first immunization (100 ug/rat) was performed with complete Freund's adjuvant, the last one with complete antigen of metalaxyl (25 ug/rat, without adjuvant) and the second one with incomplete Freund's adjuvant. The spleen cells of IC50 mice with high titer were fused with mouse myeloma cells by PEG method, screened by indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay and subcloned for three times, and the hybridoma cell line 20170507 of metalaxyl monoclonal antibody was obtained. The monoclonal antibody secreted by this cell line has good specificity and detection sensitivity for metalaxyl (IC50 value is 40 ng/mL). It provides raw materials for the immunoassay of metalaxyl residues in food and has practical application value.

【技术实现步骤摘要】
一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用
本专利技术涉及一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检测

技术介绍
甲霜灵(metalaxyl，简称MET)，属酰胺类杀菌剂，高效低毒、残效期长。主要用于卵菌纲、藻菌纲、真菌引起的各种霜霉病、晚疫病、早疫病、猝倒病以及枯腐病、果腐病等。2017年6月22日，欧盟委员会发布(EU)2017/1164号实施条例，修订（EC）396/2005法规中甲霜灵的最大残留限量标准（MRL），其在坚果类、乳、蛋中的最大残留限量标准（MRL）均为0.01mg/kg。为了有效监督监测食品中使用甲霜灵的情况，需要寻找一种特异性好，灵敏度高的测定方法，而目前检测方法如薄层层析法、气相色谱法、液相色谱法等，分离纯化过程冗长，灵敏度低，加上食品中干扰物多，难以获得准确结果。因此建立快速简便的甲霜灵检测方法具有重要意义。酶联免疫法（ELISA）是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的纯度要求不高而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测。建立高效的免疫学检测方法，筛选高特异性的单克隆抗体是重要前提。
技术实现思路
本专利技术的目的在于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14703，保藏日期为2017年9月5日。

【技术特征摘要】
1.一株甲霜灵单克隆抗体杂交瘤细胞株20170507，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.14703，保藏日期为2017年9月5日。2.甲霜灵单克隆抗体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：胥传来，林璐，匡华，徐丽广，马伟，刘丽强，吴晓玲，宋珊珊，胡拥明，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32