一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用制造技术

技术编号:19542072 阅读:46 留言:0更新日期:2018-11-24 20:20
本发明专利技术涉及肿瘤免疫领域,具体涉及一种靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的CAR‑T细胞的构建及其应用。本发明专利技术的CAR‑T细胞是通过将靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合抗原受体(CAR)转染至T细胞构建而成,其中靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合型抗原受体由CD8抗原的前导肽、抗间皮素单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内信号域和抗PD‑L1抗体分泌区依次连接组成。本发明专利技术的CAR‑T细胞的间皮素SS1P scFv可以特异性的与表达间皮素糖蛋白的肿瘤细胞结合,促进抗肿瘤相关细胞因子的分泌,从而对这类肿瘤细胞产生杀伤效应;另外,本发明专利技术的CAR‑T细胞还能分泌PD‑L1抗体,特异性的与肿瘤细胞表达产生的PD‑L1相结合,阻断PD‑L1/PD‑1信号对T细胞活性的抑制效应,有利于CAR‑T长时间对肿瘤细胞生长产生有效的抑制。

Construction and application of CAR-T cells targeting mesothelin and carrying PD-Ll blocker

The invention relates to the field of tumor immunity, in particular to the construction and application of a CAR T cell targeting mesothelin and carrying a PD Ll blocker. The CAR_T cells of the present invention are constructed by transfecting chimeric antigen receptors (CARs) targeting mesothelin and carrying PD_Ll blockers into T cells. The chimeric antigen receptors targeting mesothelin and carrying PD_Ll blockers are composed of CD8 antigen precursors, anti-mesothelin single chain antibodies, hinge regions, transmembrane regions and intracellular signal domains. The secretory regions of anti-PD L1 antibody were connected in turn. The mesothelin SS1P scFv of the CAR T cell can specifically bind to the tumor cell expressing the mesothelin glycoprotein, promote the secretion of anti-tumor-related cytokines, thereby producing killing effect on such tumor cells. In addition, the CAR T cell of the present invention can also secrete PD L1 antibody, which is specific to the tumor cell. The combination of PD_L1 and PD_L1 can block the inhibitory effect of PD_L1/PD_1 signal on T cell activity, which is beneficial to the long-term inhibitory effect of CAR_T on the growth of tumor cells.

【技术实现步骤摘要】
一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用
本专利技术涉及肿瘤免疫领域,具体涉及一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞的构建及其应用。
技术介绍
间皮素(mesothelin,MSLN)是一种通过磷脂酰肌醇区(GPI)锚定在细胞质膜上的糖蛋白,其在实质性器官如心脏、肾脏、肝脏中几乎不表达,在正常情况下,其主要表达于腹膜、胸腹腔和心包上的间皮细胞中,而在上气管、卵巢、扁桃体和输卵管等上皮细胞表面低表达。最近对于实体瘤的研究发现,间皮素在肺癌、胃癌、食管癌胸腺癌中都处于过表达,从而改变细胞的生物学特征。间皮素在细胞内主要是通过两条途径来发挥调节细胞功能的作用,一是通过其GPI结构域直接激活细胞内信号通路,二是与其受体CA125/MUC16相互作用。当细胞内间皮素处于过表达的状态时,就会激活NFκB、MAPK和PI3K细胞内信号通路,促进细胞增殖,抵抗细胞凋亡。而且,通过对卵巢癌细胞系的研究发现,间皮素还可以通过与CA125相互作用而导致异常的细胞粘附,促进癌症细胞的转移。此外,通过间皮素基因敲除小鼠的研究发现,间皮素基因的缺失,并未影响小鼠的生长发育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向间皮素并携带PD‑Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,该嵌合型抗原受体由CD8抗原的前导肽、抗间皮素单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内信号域和抗PD‑L1抗体分泌区依次连接组成;所述抗间皮素单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述抗PD‑L1抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,该嵌合型抗原受体由CD8抗原的前导肽、抗间皮素单链抗体、铰链区、跨膜区、胞内信号域和抗PD-L1抗体分泌区依次连接组成;所述抗间皮素单链抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示,所述抗PD-L1抗体的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示。2.根据权利要求1所述的一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,所述铰链区为人CD8α、或者TCRβ中的任一种,所述CD8α铰链区DNA序列如SEQIDNO.3所示。3.根据权利要求1所述的一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,所述跨膜区为CD4、CD8或CD28跨膜区中的任一种;所述CD28跨膜区DNA序列如SEQIDNO.4所示。4.根据权利要求1所述的一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,所述胞内信号域为CD3δ、4-1BB、CD137、CD134、CD28或CD86中的至少一种;所述CD3ζ胞内信号域DNA序列如SEQIDNO.5所示。5.根据权利要求1所述的一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体,其特征在于,所述抗PD-L1抗体分泌区编码序列包括内部核糖体进入位点序列、抗PD-L1抗体序列和人IgG1序列。6.权利要求1-5中任一项所述靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的嵌合型抗原受体的应用,其特征在于,所述嵌合型抗原受体应用于制备抗肿瘤的药物,所述肿瘤细胞过表达间皮素或表达PD-L1。7.一种靶向间皮素并携带PD-Ll阻断剂的CAR-T细胞,其特征在于,所述CAR-T细胞能特异性...

【专利技术属性】
技术研发人员:尚小云
申请(专利权)人:苏州茂行生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:江苏,32

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