本发明专利技术公开了野生大麻和栽培大麻荧光定量分析的内参基因及其应用。其作为内参基因的是基因PP2A或基因EF1α，基因PP2A或基因EF1α在野生大麻和栽培大麻始果期不同部位中表达稳定性最高，解决了野生大麻和栽培大麻基因表达研究中没有内参基因的现状，为下一步研究不同基因型大麻中基因表达研究提供了有力的支持。
【技术实现步骤摘要】
野生大麻和栽培大麻荧光定量分析的内参基因及其应用
本专利技术涉及植物分子生物学领域，具体是指用于野生大麻和栽培大麻荧光定量分析的内参基因及其应用。
技术介绍
大麻(CannabissativaL.)，别称火麻、线麻，为大麻科(Cannabinaceae)大麻属(Cannabis)一年生草本植物，多雌雄异株，是一种传统的经济作物，广泛应用于造纸、纺织、食品和制药等领域。大麻主要起源于中亚地区，现全世界均有分布(栽培种或野生种)。我国大麻资源丰富，其中野生大麻在我国的云南、西藏、新疆、内蒙古和东北地区均有分布，而栽培大麻分布范围更广，涵盖我国大部分省区，目前主要集中在云南、黑龙江、内蒙、甘肃、山西和安徽等地。野生大麻和栽培大麻在株高、分枝数、千粒重和大麻素含量等生物学性状和农艺性状方面具有显著差异。通常野生大麻植株矮小，茎秆质地较硬，种子落粒性强，大麻素含量低，且具有栽培大麻所不具备的部分优良特性如抗寒、抗病和抗盐碱等，是育种工作者开展品种选育和遗传改良的优异资源和材料。因此，明确这两种不同类型大麻在上述生物学性状和农艺性状的基因表达差异就显得尤为关键。实时荧光定量PCR技术是一项快速准确、灵敏度高和特异性强的定量分析技术，现已广泛应用于植物领域中基因表达分析和研究。该项技术的准确性和可靠性受诸多实验因素如RNA的产量和质量、反转录效率等的影响，因此，为了减少样本间的误差，获得更为精确的数据，需要选择合适的内参基因进行校正和标准化。而理想化的内参基因应该在各种类型的细胞、组织和各种外界因素下都恒定表达。然而，近年来大量研究结果表明，并没有表达绝对稳定的内参基因，任何一种内参基因的所谓恒定表达都只是在一定类型的细胞或实验条件下“有范围”的恒定。到目前为止，在水稻、玉米、土豆、黄瓜、西红柿和苹果等作物上已不乏内参基因的筛选和验证的报道，而在野生大麻和栽培大麻中开展与大麻素合成相关基因的表达分析时尚没有合适的内参基因可供选择。本专利技术根据7个候选基因在野生大麻和栽培大麻始果期(此时期大麻素含量最高)不同部位的表达情况，筛选出适用于研究这两种不同类型大麻基因表达分析的内参基因。
技术实现思路
为解决目前还没有适用于野生大麻和栽培大麻基因表达研究的内参基因的技术问题，本专利技术提供了作为野生大麻和栽培大麻实时荧光定量分析的内参基因及其引物的应用。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下技术方案实现：1.用于大麻基因表达研究的内参基因，其特征在于：所述内参基因为内参基因PP2A或内参基因EF1α，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.2所示。2.大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述内参基因为内参基因PP2A或内参基因EF1α，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.2所示。3.根据技术方案2所述的大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述植株不同部位为大麻植株的根、茎、叶、花或假果。4.技术方案1所述的用于大麻基因表达研究的内参基因或权利要求2或3所述的大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述大麻为野生大麻或栽培大麻。5.扩增基因PP2A或基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因的引物，其特征在于：扩增基因PP2A作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因的引物为PP2A引物，所述PP2A引物由引物PP2A-F和引物PP2A-R组成：所述引物PP2A-F的碱基序列如SEQIDNO.8所示，所述引物PP2A-R的碱基序列如SEQIDNO.9所示，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示；扩增基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因的引物为EF1α引物：所述EF1α引物由引物EF1α-F和引物EF1α-R组成：所述引物EF1α-F的碱基序列如SEQIDNO.10所示，所述引物EF1α-R的碱基序列如SEQIDNO.11所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.2所示；所述大麻为野生大麻或栽培大麻。6.基因PP2A或基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。7.根据技术方案6所述的基因PP2A或基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因，其特征在于：所述植株不同部位为大麻植株的根、茎、叶、花或假果。8.根据技术方案6或7所述的基因PP2A或基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因，其特征在于：所述大麻为野生大麻或栽培大麻。本专利技术的有益效果：1、本专利技术首次筛选出在野生大麻和栽培大麻始果期植株不同部位中表达最稳定的内参基因，数据真实可靠。2、筛选出的内参基因适用于野生和栽培两种不同类型大麻同一时期不同部位中与大麻素合成相关基因或其他功能基因的表达分析，能显著提高所得数据的准确性，其操作相对简单，成本较低，灵敏度高，精确度高，解决了野生大麻和栽培大麻基因表达研究中没有内参基因的现状，为下一步开展不同基因型大麻中基因表达研究提供了有力的支持。3、本专利技术设计的用于作为在野生大麻和栽培大麻始果期植株不同部位中表达最稳定的内参基因的引物，特异性强，准确性高。综上所述，本专利技术首次筛选出在野生大麻和栽培大麻始果期植株不同部位中表达最稳定的内参基因，筛选出的内参基因适用于野生和栽培两种不同类型大麻同一时期植株不同部位中与大麻素合成相关基因或其他功能基因的表达分析，能显著提高所得数据的准确性，其操作相对简单，成本较低，灵敏度高，精确度高。序列表中SEQIDNO.1所示的是内参基因PP2A的核苷酸序列，基因PP2A的GeneBankAccessionNo.:JP470792.1。序列表中SEQIDNO.2所示的是内参基因EF1α的核苷酸序列，基因EF1α的GeneBankAccessionNo.:JP452083.1。序列表中SEQIDNO.3所示的是基因ACT2的核苷酸序列，基因ACT2的GeneBankAccessionNo.:JP451309.1。序列表中SEQIDNO.4所示的是基因18SrRNA的核苷酸序列，18SrRNA基因的GeneBankAccessionNo.:JP477000.1。序列表中SEQIDNO.5所示的是基因GAPDH的核苷酸序列，GAPDH基因的GeneBankAccessionNo.:JP451550.1。序列表中SEQIDNO.6所示的是基因UBQ的核苷酸序列，基因UBQ的GeneBankAccessionNo.:JP465573.1。序列表中SEQIDNO.7所示的是基因TUB的核苷酸序列，基因TUB的GeneBankAccessionNo.:JP475803.1。序列表中SEQIDNO：8所示的是引物PP2A-F的碱基序列。序列表中SEQIDNO：9所示的是引物PP2A-本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于大麻基因表达研究的内参基因，其特征在于：所述内参基因为内参基因PP2A或内参基因EF1α，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2所示。
【技术特征摘要】
1.用于大麻基因表达研究的内参基因，其特征在于：所述内参基因为内参基因PP2A或内参基因EF1α，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.2所示。2.大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述内参基因为内参基因PP2A或内参基因EF1α，所述内参基因PP2A的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.1所示，所述内参基因EF1α的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO.2所示。3.根据权利要求2所述的大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述植株不同部位为大麻植株的根、茎、叶、花或假果。4.权利要求1所述的用于大麻基因表达研究的内参基因或权利要求2或3所述的大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR内参基因，其特征在于：所述大麻为野生大麻或栽培大麻。5.扩增基因PP2A或基因EF1α作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因的引物，其特征在于：扩增基因PP2A作为大麻始果期植株不同部位实时荧光定量PCR的内参基因的引物为PP2A引物，所述PP2A引物由引物PP2A-F和引物PP2A-R组成：所述引物PP...
【专利技术属性】
技术研发人员：郭蓉，郭鸿彦，陈璇，杨明，张庆滢，郭孟璧，许艳萍，吕品，
申请(专利权)人：云南省农业科学院经济作物研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。