基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法技术

本发明专利技术公开一基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，通过获处理过的目标核酸样本，添加所述目标核酸样本和水相溶液至液滴生成设备，生成反应液滴,其中所述反应液滴包括至少一待测核酸片段；使用重组酶聚合酶扩增技术扩增反应液滴中的待测核酸片段,利用基因编辑技术使得所述待测核酸片段中的目的基因信号获得级联放大效应；收集所述目的基因对应的阳性信号，将所述阳性信号转化为图像数据；利用泊松分布原理对所述图像数据中的荧光阈值进行处理，得到所述阳性信号对应的所述待测核酸片段中目的基因的数量，从而基于CRISPR技术快速高效地定量检测目的基因的浓度。

【技术实现步骤摘要】
基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，所述特异性核酸片段定量检测方法可被应用于快速高效地定量检测特定核酸片段。
技术介绍
随着科技的发展以及医学水平的提高，人们对于多种疾病与基因的突变或多态性的相关性研究已取得实际性进展，进而也逐渐了解到基因的突变或多态性与单基因疾病、多因子疾病之间的关系。基于基因和疾病之间的关系，人们可通过检测靶基因或者含有该靶基因的区域内的基因突变来简便且准确地检测疾病，而基因的检测就是通过核酸检测技术来完成。目前，医院和检测机构常用的核酸检测技术是基于PCR(聚合酶链式反应)技术发展而来的，聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它最大特点是能将微量的DNA大幅增加，从而便于DNA的后续检测，其原理是利用DNA在体外摄氏高温时变性会变成单链，低温时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调整温度至DNA聚合酶最适反应温度，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖的方向合成互补链原理完成DNA的扩增，但这就意味着PCR技术对温度控制要求高，也使得PC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，包括步骤：S1：获取处理过的目标核酸样本；S2:添加所述目标核酸样本和水相溶液至液滴生成设备，生成反应液滴,其中所述反应液滴包括至少一待测核酸片段；S3:使用重组酶聚合酶扩增技术扩增反应液滴中的待测核酸片段,利用基因编辑技术使得所述待测核酸片段中的目的基因获得级联放大效应,释放阳性信号；S4：收集所述目的基因对应的荧光信号，将所述荧光信号转化为图像数据；以及S5：利用泊松分布原理对所述图像数据中的荧光阈值进行处理，得到所述阳性信号对应的所述待测核酸片段中目的基因的数量。

【技术特征摘要】
1.一基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，包括步骤：S1：获取处理过的目标核酸样本；S2:添加所述目标核酸样本和水相溶液至液滴生成设备，生成反应液滴,其中所述反应液滴包括至少一待测核酸片段；S3:使用重组酶聚合酶扩增技术扩增反应液滴中的待测核酸片段,利用基因编辑技术使得所述待测核酸片段中的目的基因获得级联放大效应,释放阳性信号；S4：收集所述目的基因对应的荧光信号，将所述荧光信号转化为图像数据；以及S5：利用泊松分布原理对所述图像数据中的荧光阈值进行处理，得到所述阳性信号对应的所述待测核酸片段中目的基因的数量。2.根据权利要求1所述的基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，所述步骤S4进一步包括以下步骤：S41：朝向所述液滴生成设备的方向发射光束，激发所述目的基因，产生荧光信号；以及S42:光学镜头收集所述荧光信号，图像传感器转化所述荧光信号为所述图像数据，其中所述发射光束和所述图像传感器的光敏面均位于所述液滴生成设备的像方共轭位置。3.根据权利要求2所述的基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，所述步骤S4进一步包括以下步骤：S411:朝向垂直于所述液滴生成设备的法线方向发射光束，所述发射光束经设置于所述液滴生成设备前端的分光二色镜反射至所述液滴生成设备；以及S421：沿着所述液滴生成设备的法线方向收集光束，其中所述光束透过所述分光二色镜。4.根据权利要求3所述的基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，在所述步骤S411当中，发射光束被整形以及被激光过滤后被发射至所述液滴生成设备，在所述步骤S412当中，所述荧光信号被荧光过滤后被收集。5.根据权利要求4所述的基于CRISPR技术的特异性核酸片段定量检测方法，其特征在于，所述光学镜头为连续变倍镜头，根据所述液滴生成设备的尺寸调整所述光学镜头的像...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱留伟，余皓，
申请(专利权)人：领航基因科技杭州有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33