本发明专利技术公开了一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA及在增加食管癌放射治疗敏感性中的应用，所述干扰RNA的上游序列为：SEQ ID No.1；下游序列为：SEQ ID No.2。本发明专利技术通过实验发现长链非编码RNA DNM3OS在食管癌细胞中具有很高的表达性，并且可以作为食管癌细胞的放疗靶点，本发明专利技术中的干扰RNA可以抑制DNM3OS的表达，并且将本发明专利技术中的干扰RNA以及携带该干扰RNA的载体转染食管癌细胞时，可以显著抑制DNM3OS在食管癌细胞中的表达，增加了食管癌细胞的放疗敏感性，对于食管癌的治疗有积极效果。
【技术实现步骤摘要】
一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA及在增加食管癌放射治疗敏感性中的应用
本专利技术属于医疗
，具体涉及一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA及在增加食管癌放射治疗敏感性中的应用。
技术介绍
食管癌是我国常见的恶性肿瘤，每年新诊断25万新发病例，占全世界1/2，死亡率17.38/10万，占全部恶性肿瘤死亡的16.05％，居第四位。食管癌临床确诊时约70％-80％的患者已丧失手术机会，放疗成为局部晚期食管癌的主要治疗手段。由于放疗抵抗性的存在，食管癌患者放疗后五年生存率尚不足15％。生物研究进入基因组学时代后最重要的科学发现之一为人类基因组90％以上转录为非蛋白编码RNA，只有约2％的基因组为编码序列。长链非编码RNA(longnon-codingRNAs，lncRNAs)为非编码RNA的重要成员，是一类长度大于200nt的非编码RNA。研究发现，lncRNAs可通过染色体修饰、转录调控及转录后调控等多种机制影响肿瘤细胞增殖、存活及转移侵袭等。目前国内外对于食管癌放疗抵抗性的研究多集中于编码RNA，而对于长链非编码RNA与食管癌放疗敏感性的相关文献目前仅有三篇，如研究发现lncRNAAFAP1-AS1及LOC285194可作为食管癌放化疗抵抗性的预测因子，并与食管癌患者放化疗预后显著相关，而且AFAP1-AS1及LOC285194是否可以作为食管癌放射治疗增敏靶点则不明确，因此对于长链非编码RNA是否可以作为食管癌放疗敏感性的增敏靶点，存在很大的研究意义。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA，该干扰RNA可抑制DNM3OS在食管癌细胞中的表达，增加食管癌细胞的放疗敏感性。本专利技术的技术方案为：一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA，所述干扰RNA的上游序列为：SEQIDNo.1；下游序列为：SEQIDNo.2。本专利技术通过实验发现长链非编码RNADNM3OS(geneID:100628315)在食管癌细胞中具有很高的表达性，本专利技术中干扰RNA可以显著抑制DNM3OS在食管癌细胞中的表达，可以增加食管癌细胞的放疗敏感性，对于食管癌的治疗有积极效果。本专利技术还提供了一种携带上述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA的载体。本专利技术在载体上携带上抑制DNM3OS表达的干扰RNA，然后将载体转染至食管癌细胞上，可以增加食管癌细胞的放疗敏感性。本专利技术中载体的种类可以选择多种，作为优选，所述载体为慢病毒。可稳定地下调食管癌细胞中DNM3OS的表达。本专利技术中慢病毒的选择也有多种，作为优选，所述慢病毒为LV3-pGLV-h1-GFP-puro-DNM3OS。可高效地转染食管癌细胞，并稳定地下调食管癌细胞中DNM3OS的表达。本专利技术还提供了上述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA在增加食管癌放射治疗敏感性中的应用。本专利技术还提供了上述的载体在增加食管癌放射治疗敏感性中的应用。本专利技术还提供了一种食管癌放射治疗增敏药物，包括上述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA。本专利技术还提供了一种食管癌放射治疗增敏试剂盒，包括上述的携带抑制DNM3OS表达的干扰RNA的载体。本专利技术还提供了一种食管癌放射治疗增敏试剂盒，包括上述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA。与现有技术相比，本专利技术的有益效果体现在：本专利技术通过实验发现长链非编码RNADNM3OS在食管癌细胞中具有很高的表达性，并且可以作为食管癌细胞的放疗靶点，本专利技术中的干扰RNA可以抑制DNM3OS的表达，并且将本专利技术中的干扰RNA以及携带该干扰RNA的载体转染食管癌细胞时，可以显著抑制DNM3OS在食管癌细胞中的表达，增加了食管癌细胞的放疗敏感性，对于食管癌的治疗有积极效果。附图说明图1为KYSE-30细胞转染DNM3OSsiRNA后经过放射线照射后的细胞存活曲线图。图2为KYSE-140细胞转染DNM3OSsiRNA后经过放射线照射后的细胞存活曲线图。具体实施方式实施例1收集食管癌细胞株KYSE-30、KYSE-140、KYSE-150、KYSE-180、KYSE-450及正常食管上皮细胞Het-1A的RNA，通过qRT-PCR实验检测DNM3OS在上述细胞中的表达量。具体实验步骤如下所述：(1)细胞收集及提取总RNAa.将上述细胞样本弃掉培养基，加入1mLTrizol，室温放置5min后用1mL移液枪反复吹打细胞，直至无明显细胞团块后将液体转移至高温灭菌过的1.5mLEP管中。b.加入0.2mL氯仿，上下颠倒EP管数十下，室温静置15min后，于4℃，13000rpm，离心15min。c.离心后小心吸取上层水相至另一高温灭菌过的1.5mLEP管中，加入等体积异丙醇，上下颠倒EP管数十次，室温放置10min后，于4℃，12000rpm，离心15min，弃上清，RNA沉积于管底及管壁。d.加入1mL冰上预冷的75％乙醇洗涤上述RNA沉淀数次，于4℃，7500rpm，离心5min。e.弃上清，空气干燥10min后，加入50μLDEPC水溶解RNA后，取2.5μL用紫外分光光度计检测260nm及280nm处的吸光值。若A260/280nm吸光值的比值位于1.7～2.0之间，表明提取的RNA质量合格可进行下一步的后续实验。(2)逆转录反应a.将PCR管置于冰上预冷，在管中依次加入2uL5×EraserBuffer，1uLgDNAErsase，总RNA1ug，加DEPC水补足至10uL，混合均匀。b.将PCR管放入PCR仪进行第一步逆转录：工艺参数为42℃，2min，结束后将产物立即置于冰上。c.向上述产物中加入以下试剂：4uL5×primescriptbuffer，1uLprimescriptRTenzymemix，4uLRTPrimermix，1uLDEPC水，混合均匀。d.将PCR管放入PCR仪中进行第二步逆转录：工艺参数为37℃，15min，85℃，5s，结束后将产物4℃保存。(3)引物设计与合成引物设计根据GeneBank上登录的人DNM3OS基因的mRNA序列资料，采用Primer5.0引物设计软件设计，上游引物序列为SEQIDNo.3，下游引物序列为SEQIDNo.4。引物由深圳华大基因科技有限公司合成。(4)qRT-PCR反应a.稀释cDNA:将上述cDNA产物加入100uLDEPC水稀释。b.配制体系：SYBRGreen12.5uL，cDNA2uL，上下游引物各0.5uL，DEPC水9.5uL。每组均设3个复孔。c.上机：50℃，2min预温，95℃，10min预变性，95℃，15s，58℃，1min(采集荧光)，共40个循环。溶解曲线：95℃，15s，60℃，1min(采集荧光)，95℃，30s，60℃，15s。d.下机：实验结束后进行数据分析。检测发现DNM3OS在KYSE-30细胞的表达量较在Het-1A中的表达量高39.4553倍，DNM3OS在KYSE-140细胞的表达量较在Het-1A中的表达量高34.9271倍，DNM3OS在KYSE-150细胞的表达量较在Het-1A中的表达量高35.8426倍，DNM3OS在KYSE-180细胞的表达量较在Het-1A中的表达量高28.5365倍，DNM3OS在KYSE-450细胞的表达量本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA的上游序列为：SEQ ID No.1；下游序列为：SEQ ID No.2。
【技术特征摘要】
1.一种抑制DNM3OS表达的干扰RNA，其特征在于，所述干扰RNA的上游序列为：SEQIDNo.1；下游序列为：SEQIDNo.2。2.一种携带如权利要求1所述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA的载体。3.如权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体为慢病毒。4.如权利要求3所述的载体，其特征在于，所述慢病毒为LV3-pGLV-h1-GFP-puro-DNM3OS。5.如权利要求1所述的抑制DNM3OS表达的干扰RNA在...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴式琇，张红芳，
申请(专利权)人：吴式琇，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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