一种大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于肿瘤生物学技术领域，公开了一种制备大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的方法，是以大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞作为亲本细胞，采用溴隐亭模拟人体内给药过程，通过反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法，诱导建立获得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC。本发明专利技术所提供方法制备得到的大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株具有耐药性稳定的优点，可用于研究人泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞形态学及生物学特点，研究肿瘤耐药机制，分析抗肿瘤药物敏感性及筛选和评估抗肿瘤药物，还可用于制备肿瘤耐药逆转剂或药物，具有较高的科研和生产应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株及其制备方法和应用
本专利技术涉及肿瘤生物学
，即一种大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的制备方法和应用。
技术介绍
垂体腺瘤作为一种良性肿瘤，占全部颅内肿瘤的大约10～15%。根据体内激素分泌活动可将其分为功能型和无功能型，根据肿瘤大小又可将其分为微腺瘤、大腺瘤和巨大腺瘤。泌乳素腺瘤作为最常见的垂体腺瘤，可过量分泌泌乳素并产生一系列症状。根据尸检及放射学研究，其发病率约为40～57%。虽然泌乳素腺瘤是一种良性肿瘤，但由于其造成高泌乳素血症和颅内压迫作用，可产生严重的临床症状：头痛、视力障碍、颅神经功能障碍、女性月经紊乱、闭经、泌乳、性功能障碍、不孕不育等。不仅如此，大量研究表明泌乳素腺瘤还可导致代谢综合征，如超重、胰岛素抵抗、血脂异常等。多巴胺受体激动剂是泌乳素腺瘤的首选治疗手段。但部分不能耐受多巴胺受体激动剂或对其产生了耐药性的病人在接受了外科切除或放射治疗后，往往会复发。因此，研究泌乳素腺瘤的溴隐亭耐药机制对解决其不良预后并寻找安全有效的替代药物至关重要。大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞系是目前研究泌乳素腺瘤常用的一种细胞株，但关于泌乳素腺瘤的耐药细胞株仍较少见，特别是由溴隐亭诱导的泌乳素腺瘤耐药细胞株未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种制备大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的方法，制备得到的大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株具有耐药性稳定的优点。本专利技术的另一目的在于提供上述方法制备得到的大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株。本专利技术的另一目的在于提供上述大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株在制备肿瘤耐药逆转剂或药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种制备大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的方法，是以大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞作为亲本细胞，采用溴隐亭模拟人体内给药过程，通过反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法，诱导建立获得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC。在诱导过程中，增加适当的溴隐亭浓度非常重要，理想状况是既通过增加药物浓度筛选出部分耐药细胞又不致于使细胞全部死亡，从而不断获得有更高耐药性的MMQ/BRC细胞。因此本专利技术采用反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法来诱导建立获得耐药细胞株MMQ/BRC。所述方法包括以下具体步骤：S1.取大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞系，接种于含10%胎牛血清的DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养；S2.取对数期生长期MMQ细胞或当细胞密度达到80%时，接种于含2μmol/mL终浓度溴隐亭的新鲜DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养，观察细胞是否能在此浓度下的培养基中稳定生长、传代；S3.按S2的方法进行培养并逐渐提高溴隐亭终浓度，依次为4μmol/mL、6μmol/mL、8μmol/mL、10μmol/mL，并冻存每个浓度下生长状态良好的细胞；S4.将10μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为10μmol/mL、20μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S5.重复S4两次，冻存两种浓度下的细胞；将20μmol/mL终浓度下的细胞继续培养并提高溴隐亭终浓度，依次为22μmol/mL、24μmol/mL、26μmol/mL、28μmol/mL、30μmol/mL；S6.将30μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为30μmol/mL、40μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S7.重复S6两次，冻存两种浓度下的细胞，将40μmol/mL终浓度下的细胞继续培养并提高溴隐亭终浓度，依次为42μmol/mL、44μmol/mL、46μmol/mL、48μmol/mL、50μmol/mL；S8.将50μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为50μmol/mL、60μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S9.重复S8两次，冻存两种浓度下的细胞，将60μmol/mL终浓度下的细胞继续培养并提高溴隐亭终浓度，依次为62μmol/mL、64μmol/mL、66μmol/mL、68μmol/mL、70μmol/mL；S10.将70μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为70μmol/mL、80μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S11.重复S10两次，冻存两种浓度下的细胞，将80μmol/mL终浓度下的细胞继续培养并提高溴隐亭终浓度，依次为82μmol/mL、84μmol/mL、86μmol/mL、88μmol/mL、90μmol/mL；S12.将90μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为90μmol/mL、100μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S13.长期以100μmol/mL浓度维持细胞对溴隐亭的耐药性，冻存对数期细胞，即得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株。本专利技术还请求保护上述方法制备得到的大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株，利用CCK8检测细胞株对溴隐亭的半数抑制率IC50，结果表明，由该方法制备得到的细胞株性能差异不显著、耐药性稳定，MMQ/BRC对溴隐亭的IC50约为亲本细胞MMQ的5倍。本专利技术还请求保护上述大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株在制备肿瘤耐药逆转剂或药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所提供方法制备得到的大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株具有耐药性稳定的优点，可用于研究人泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞形态学及生物学特点；可用于在体外构建肿瘤耐药模型，研究肿瘤耐药机制及其相关信号通路的研究的细胞模型，分析抗肿瘤药物敏感性及筛选和评估抗肿瘤药物；还可用于制备肿瘤耐药逆转剂或药物，具有较高的科研和生产应用价值。附图说明图1为实施例1中MMQ和MMQ/BRC的IC50；“***”表示p<0.005。图2为实施例1中不同时间段MMQ细胞和MMQ/BRC细胞上清中泌乳素表达水平；“n.s”表示无意义。图3为实施例1中MMQ/BRC细胞和MMQ细胞凋亡率，***p<0.005。具体实施方式下面结合说明书附图及具体实施例对本专利技术作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。实施例1大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC的诱导建立本专利技术是以大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞作为亲本细胞，采用溴隐亭模拟人体内化疗过程，通过反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法，诱导建立获得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC。具体步骤如下：（1）取大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞系（购自协和细胞库），接种于含10%胎牛血清的DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养；（2）取对数期生长期MMQ细胞或当细胞密度达到80%时，接种于含2μmol/mL终浓度溴隐亭的新鲜DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养，观察细胞是否能在此浓度下的培养基中稳定生长、传代；（3）按步骤（2）的方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的方法，其特征在于，是以大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞作为亲本细胞，采用溴隐亭模拟人体内给药过程，通过反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法，诱导建立获得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC。

【技术特征摘要】
1.一种制备大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株的方法，其特征在于，是以大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞作为亲本细胞，采用溴隐亭模拟人体内给药过程，通过反复大剂量冲击联合逐步递增药物浓度的方法，诱导建立获得大鼠泌乳素腺瘤溴隐亭耐药细胞株MMQ/BRC。2.根据权利要求1所述的方法，包括以下具体步骤：S1.取大鼠泌乳素腺瘤MMQ细胞系，接种于含10%胎牛血清的DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养；S2.取对数生长期MMQ细胞或当细胞密度达到80%时，接种于含2mmol/mL终浓度溴隐亭的新鲜DMEMF12培养基中，置于37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养，观察细胞是否能在此浓度下的培养基中稳定生长、传代；S3.按S2的方法进行培养并逐渐提高溴隐亭终浓度，依次为4μmol/mL、6μmol/mL、8μmol/mL、10μmol/mL，并冻存每个浓度下生长状态良好的细胞；S4.将10μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为10μmol/mL、20μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S5.重复S4两次，冻存两种浓度下的细胞；将20μmol/mL终浓度下的细胞继续培养并提高溴隐亭终浓度，依次为22μmol/mL、24μmol/mL、26μmol/mL、28μmol/mL、30μmol/mL；S6.将30μmol/mL终浓度下的细胞传代成两瓶，添加溴隐亭，终浓度分别为30μmol/mL、40μmol/mL，继续培养并观察细胞状态；S7.重复S6两次，冻存两种浓度下的细胞，将40μmol/m...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱永红，简孟瑶，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44