铜绿假单胞菌PCRV连接的抗原疫苗制造技术

本发明专利技术公开了包含共价连接至铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)PcrV载体蛋白的抗原（例如糖抗原）的缀合物，所述铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白包含与SEQ ID NO：1‑4的序列具有至少80%同一性的氨基酸序列，其中所述抗原（直接或通过接头）连接至铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白的氨基酸残基。本发明专利技术还公开了含有糖基化位点共有序列的铜绿假单胞菌PcrV蛋白。

Antigen vaccine linked to Pseudomonas aeruginosa PCRV

The present invention discloses a conjugate containing an antigen (e.g. a sugar antigen) covalently linked to the PcrV carrier protein of Pseudomonas aeruginosa. The PcrV carrier protein of Pseudomonas aeruginosa contains at least 80% of the amino acid sequence identical to the sequence of SEQ ID NO:1_4, and the antigen (either directly or indirectly). The adapter is connected to the amino acid residues of the carrier protein of Pseudomonas aeruginosa PcrV. The invention also discloses a Pseudomonas aeruginosa PcrV protein containing a common sequence of glycosylation sites.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】铜绿假单胞菌PCRV连接的抗原疫苗
本专利技术涉及以下领域：基于缀合物的免疫原性组合物和疫苗、其制备以及此类组合物在医学中的用途。更具体而言，其涉及PcrV作为来自铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的新的载体蛋白的用途。PcrV可以用作其他抗原的载体蛋白，特别是糖抗原或其他缺乏T细胞表位的抗原。PcrV载体蛋白可以作为载体蛋白和本身作为抗原。背景长久以来，已经建立了T非依赖性抗原与载体蛋白的缀合作为使T细胞帮助成为正常T非依赖性抗原的免疫应答的一部分的一种方式。以这种方式，可以通过允许免疫记忆的发展和应答的加强能力(boostability)来增强免疫应答。已经通过将细菌荚膜糖与载体蛋白缀合而开发出的成功的缀合疫苗是本领域已知的；载体蛋白具有将T非依赖性多糖抗原变成能够引发免疫记忆应答的T依赖性抗原的已知作用。例如，WO02/58737公开了包含与载体蛋白缀合的来自脑膜炎奈瑟球菌（N.meningitidis）血清组A、C、W135和Y的纯化荚膜多糖的疫苗。本领域已知几种载体蛋白，其中破伤风类毒素、白喉类毒素、CRM197和来自流感嗜血杆菌（Haemoph本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.包含共价连接至铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) PcrV载体蛋白的抗原的缀合物，所述铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白包含与SEQ ID NO：1‑4的序列具有至少70%或80%同一性的氨基酸序列，其中所述抗原（直接或通过接头）连接至铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白的氨基酸残基。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.10.21 GB 1518668.71.包含共价连接至铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)PcrV载体蛋白的抗原的缀合物，所述铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白包含与SEQIDNO：1-4的序列具有至少70%或80%同一性的氨基酸序列，其中所述抗原（直接或通过接头）连接至铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白的氨基酸残基。2.权利要求1的缀合物，其中所述氨基酸残基不是天冬酰胺残基。3.权利要求1的缀合物，其中所述氨基酸残基是天冬酰胺残基。4.权利要求3的缀合物，其中所述天冬酰胺残基不是引入与SEQIDNO：1-4的序列具有至少80％同一性的氨基酸序列中的D/E-X-N-X-S/T共有序列的部分，其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸。5.权利要求3的缀合物，其中所述天冬酰胺残基是引入与SEQIDNO：1-4的序列具有至少70%或80%同一性的氨基酸序列中的D/E-X-N-X-S/T共有序列的部分，其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸，其中天冬酰胺残基位于与SEQIDNO：3的氨基酸24-166或氨基酸281-317之间等同的位置处或位于其氨基酸317处。6.权利要求3的缀合物，其中所述天冬酰胺残基是引入与SEQIDNO：1-4的序列具有至少70%或80%同一性的氨基酸序列中的D/E-X-N-X-S/T共有序列的部分，其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸，其中天冬酰胺残基位于与SEQIDNO：4的氨基酸1-143或氨基酸258-294之间等同的位置处或位于其氨基酸294处。7.权利要求3的缀合物，其中所述天冬酰胺残基是D/E-X-N-X-S/T共有序列的部分，其中X是除脯氨酸以外的任何氨基酸，其中天冬酰胺残基没有通过突变引入SEQIDNO：5的序列或与SEQIDNO：5具有至少80％同一性的序列中。8.权利要求5-7中任一项的缀合物，其中通过除去PcrV肽序列并用包含D/E-X-N-X-S/T共有序列的肽将其置换来将包含D/E-X-N-X-S/T共有序列的肽引入氨基酸序列中。9.权利要求8的缀合物，其中所述PcrV肽序列包含1-7个氨基酸。10.权利要求8的缀合物，其中所述PcrV肽序列包含1个氨基酸。11.权利要求5-10中任一项的缀合物，其中将包含D/E-X-N-X-S/T共有序列的肽在SEQIDNO：3的氨基酸残基24-143或SEQIDNO：4的氨基酸残基1-120之间的位置处引入氨基酸序列中。12.权利要求11的缀合物，其中将包含D/E-X-N-X-S/T共有序列的肽在SEQIDNO：3的氨基酸残基24-48或SEQIDNO：4的氨基酸残基1-24之间的位置处引入氨基酸序列中。13.权利要求1-12中任一项的缀合物，其中将至少2、3或4个D/E-X-N-X-S/T共有序列引入SEQIDNO:1-4中任一者的序列或与其具有至少70%或80%同一性的序列中。14.权利要求1-13中任一项的缀合物，其中所述PcrV载体蛋白具有包含SEQIDNO:6-62中至少一种的序列。15.权利要求14的缀合物，其中所述PcrV载体蛋白具有包含SEQIDNO:6-12和33中至少一种的序列。16.权利要求15的缀合物，其中所述PcrV载体蛋白具有包含SEQIDNO:6-12和33中至少3种的序列。17.权利要求15或16的缀合物，其中所述PcrV载体蛋白具有包含SEQIDNO：6和/或SEQIDNO：9和/或SEQIDNO：11和/或SEQIDNO：33的序列。18.权利要求1-3中任一项的缀合物，其中所述抗原通过使用化学缀合方法可获得的化学键与铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白共价连接。19.权利要求18的缀合物，其中所述化学缀合方法选自碳二亚胺化学作用、还原性胺化、氰化化学作用（例如CDAP化学作用）、马来酰亚胺化学作用、酰肼化学作用、酯化学作用和N-羟基琥珀酰亚胺化学作用。20.权利要求18或权利要求19的缀合物，其中所述抗原与铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白上的天冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、组氨酸、精氨酸或色氨酸氨基酸共价连接。21.权利要求18-20中任一项的缀合物，其中将所述抗原直接连接至铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白。22.权利要求18-20中任一项的缀合物，其中将所述抗原经接头附接至铜绿假单胞菌PcrV载体蛋白。23.权利要求22的缀合物，其中所述接头选自具有4-12个碳原子的接头、双官能接头、末端含有1或2个反应性氨基的接头、B-丙酰胺基、硝基苯基-乙胺、卤代酰基卤化物、6-氨基己酸和ADH。24.权利要求1-23中任一项的缀合物，其中所述抗原是糖。25.权利要求24的缀合物，其中所述抗原是细菌荚膜糖。26.权利要求24的缀合物，其中所述抗原是细菌脂多糖或脂寡糖。27.权利要求26的缀合物，其中所述抗原是来自铜绿假单胞菌的脂多糖。28.权利要求27的缀合物，其中所述抗原是来自铜绿假单胞菌的O抗原，任选O1、O2、O3、O4、O5、O6、O7、O8、O9、O10、O11、O12、O13、O14、O15、O16、O17、O18、O19或O20，例如O6或O11。29.具有与SEQIDNO：1-4的序列具有至少70%或80％同一性的氨基酸序列的PcrV蛋白，所述氨基酸序列包含D/E-X-N-X-S/T共有序列，其中X是除脯氨酸外的任何氨基酸。30.权利要求29的PcrV蛋白，D/E-X-N-X-S/T共有序列位于SEQIDNO：3的氨基酸23-166或氨基酸281-317之间或氨基酸317的位置，其中X是除脯氨酸之外的任何氨基酸。31.权利要求29的PcrV蛋白，D/E-X-N-X-S/T共有序列位于SEQIDNO：4的氨基酸1-143或氨基酸258-294之间或氨基...

【专利技术属性】
技术研发人员：CMPSJ费龙，SJ克姆勒，MT科瓦里克，JL克巴特，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时,BE