本发明专利技术公开了一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相、制备方法和人参皂苷检测应用。本发明专利技术发现，在硅胶表面键合1,2‑二羟基蒽醌、2,6‑二羟基蒽醌或1,8‑二羟基蒽醌可以显著提高硅胶对人参皂苷RZ1和RK1的分离效果。1,2‑二羟基蒽醌、2,6‑二羟基蒽醌、1,4‑二羟基蒽醌或1,8‑二羟基蒽醌虽然都是二羟基蒽醌结构，但是1,4‑二羟基蒽醌的键合并不能增强硅胶对人参皂苷RZ1和RK1的分离能力，这可能与羟基位置有关。因此，可以生产制备1,2‑二羟基蒽醌、2,6‑二羟基蒽醌或1,8‑二羟基蒽醌键合硅胶填料的色谱柱作为人参皂苷RZ1和RK1的专属分析色谱柱，成本低廉，使用方法简单。
Anthraquinone derivative bonded silica gel stationary phase, preparation method and ginsenoside detection application
The invention discloses an anthraquinone derivative bonded silica gel stationary phase, a preparation method and a ginsenoside detection application. The invention discovers that the separation effect of ginsenoside RZ 1 and RK 1 can be significantly improved by bonding 1,2 dihydroxyanthraquinone, 2,6 Dihydroxyanthraquinone or 1,8 Dihydroxyanthraquinone on the surface of silica gel. Although 1,2-,2,6-,2,6-,1,4-,1,4-,2-dihydroxyanthraquinone or 1,8-,2-dihydroxyanthraquinone are all Dihydroxyanthraquinone structures, the bond combination of 1,4-,2-dihydroxyanthraquinone does not enhance the separation ability of ginsenoside RZ 1 and RK 1 by silica gel, which may be related to the position of hydroxyl groups. Therefore, the chromatographic column with 1,2-, 2,6-, Dihydroxyanthraquinone or 1,8-, dihydroxyanthraquinone-bonded silica gel filler can be prepared as the exclusive analytical column for ginsenosides RZ 1 and RK 1. The cost is low and the method of use is simple.
【技术实现步骤摘要】
一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相、制备方法和人参皂苷检测应用
本专利技术属于分析检测领域，涉及异构体化合物的分离，具体涉及一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相、制备方法和人参皂苷检测应用。
技术介绍
人参皂苷是名贵药材人参和西洋参等人参属植物的主要有效成分，具有较好的抗肿瘤、抗炎、抗氧化和抑制细胞凋亡等药理活性。人参皂苷种类繁杂，其中还有多对或多组同分异构体。有些同分异构体化学极性非常相似，导致这些同分异构体的分离分析存在较大困难。以人参皂苷RZ1、RK1和RG5为例，三者互为同分异构体，从生源途径上，人参皂苷RG3的C20羟基与C21氢发生消除反应得到人参皂苷RK1，人参皂苷RG3的C20羟基与C22氢发生消除反应得到人参皂苷RG5和RZ1，人参皂苷RK1与RG5、RZ1为双键位置异构，人参皂苷RG5与RZ1为双键顺反异构。其中，人参皂苷RZ1与人参皂苷RK1在液相色谱的保留行为非常相似，极难分离。以人参皂苷RZ1最早发现者SangMyungLEE为例(参考文献：GinsenosidesfromHeatProcessedGinseng,ChemPharmBull,2009)，研究者采用了二维液相色谱才将人参皂苷RZ1与人参皂苷RK1分开。但是，本领域技术人员知道，二维液相色谱发展非常不成熟，重现性差，不能满足药物质量控制的严格要求。各国药典对二维液相色谱都非常慎重，目前仅有美国药典收载了个别极其难以分离的品种。中国专利CN107505409A公开了一种分离人参皂苷RZ1与人参皂苷RK1的方法，该方法采用的是一种基于反相硅胶柱色谱的手性流动相添加法，虽然分离度好，但是手性流动相配制较为繁琐，且必须临用现配，流动相稳定性差。因此，有必要开发一种固定相，使用普通的流动相即可有效分离人参皂苷RZ1与RK1。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，第一目的是提供一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，第二目的是提供该固定相的制备方法，第三目的是提供该固定相的人参皂苷检测应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：技术方案一：一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，在硅胶表面键合1,2-二羟基蒽醌得到。上述蒽醌衍生物键合硅胶固定相的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，先用3mol/L盐酸浸泡硅胶12h，再热回流10h，然后反复用水洗至中性，最后用丙酮洗2次，在160℃下烘烤除水活化6h，冷却后保存于干燥器中备用；步骤S2，取6.0g经活化的干燥硅胶，加入80mL无水甲苯，搅拌下加入4.0mLKH-560和3滴三乙胺催化剂，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲苯抽提24h，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，80℃下真空干燥8h，得到偶联剂键合硅胶GBS；步骤S3，加热搅拌下，使1.0g充分干燥的1,2-二羟基蒽醌溶解到80mL无水新蒸甲苯中，搅拌下接着加入4.0gGBS，2滴高氯酸，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲醇索氏提取残余的1,2-二羟基蒽醌，直至洗液为无色透明，80℃下真空干燥8h，得1,2-二羟基蒽醌键合硅胶固定相，经真空干燥10h后干燥保存。优选地，所述硅胶为球形硅胶，粒径5μm，孔径比表面积为450m2/g。一种专属用于分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱柱，其固定相为上述的蒽醌衍生物键合硅胶固定相。一种分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱方法，色谱参数如下：色谱柱：上述的色谱柱；流动相A相：水；流动相B相：乙腈；洗脱程序：0-5min，35％B；5-20min，35％→85％B。优选地，流速为1.0mL/min。优选地，柱温为35℃。优选地，检测波长为203nm。技术方案二：一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，在硅胶表面键合2,6-二羟基蒽醌得到。上述蒽醌衍生物键合硅胶固定相的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，先用3mol/L盐酸浸泡硅胶12h，再热回流10h，然后反复用水洗至中性，最后用丙酮洗2次，在160℃下烘烤除水活化6h，冷却后保存于干燥器中备用；步骤S2，取6.0g经活化的干燥硅胶，加入80mL无水甲苯，搅拌下加入4.0mLKH-560和3滴三乙胺催化剂，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲苯抽提24h，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，80℃下真空干燥8h，得到偶联剂键合硅胶GBS；步骤S3，加热搅拌下，使1.0g充分干燥的2,6-二羟基蒽醌溶解到80mL无水新蒸甲苯中，搅拌下接着加入4.0gGBS，2滴高氯酸，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲醇索氏提取残余的2,6-二羟基蒽醌，直至洗液为无色透明，80℃下真空干燥8h，得2,6-二羟基蒽醌键合硅胶固定相，经真空干燥10h后干燥保存。优选地，所述硅胶为球形硅胶，粒径5μm，孔径比表面积为450m2/g。一种专属用于分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱柱，其固定相为上述的蒽醌衍生物键合硅胶固定相。一种分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱方法，色谱参数如下：色谱柱：上述的色谱柱；流动相A相：水；流动相B相：乙腈；洗脱程序：0-5min，35％B；5-20min，35％→85％B。优选地，流速为1.0mL/min。优选地，柱温为35℃。优选地，检测波长为203nm。技术方案三：一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，在硅胶表面键合1,8-二羟基蒽醌得到。上述蒽醌衍生物键合硅胶固定相的制备方法，包括如下步骤：步骤S1，先用3mol/L盐酸浸泡硅胶12h，再热回流10h，然后反复用水洗至中性，最后用丙酮洗2次，在160℃下烘烤除水活化6h，冷却后保存于干燥器中备用；步骤S2，取6.0g经活化的干燥硅胶，加入80mL无水甲苯，搅拌下加入4.0mLKH-560和3滴三乙胺催化剂，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲苯抽提24h，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，80℃下真空干燥8h，得到偶联剂键合硅胶GBS；步骤S3，加热搅拌下，使1.0g充分干燥的1,8-二羟基蒽醌溶解到80mL无水新蒸甲苯中，搅拌下接着加入4.0gGBS，2滴高氯酸，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲醇索氏提取残余的1,8-二羟基蒽醌，直至洗液为无色透明，80℃下真空干燥8h，得1,8-二羟基蒽醌键合硅胶固定相，经真空干燥10h后干燥保存。优选地，所述硅胶为球形硅胶，粒径5μm，孔径比表面积为450m2/g。一种专属用于分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱柱，其固定相为上述的蒽醌衍生物键合硅胶固定相。一种分离人参皂苷RZ1和RK1的色谱方法，色谱参数如下：色谱柱：上述的色谱柱；流动相A相：水；流动相B相：乙腈；洗脱程序：0-5min，35％B；5-20min，35％→85％B。优选地，流速为1.0mL/min。优选地，柱温为35℃。优选地，检测波长为203nm。有益效果：本专利技术发现，在硅胶表面键合1,2-二羟基蒽醌、2,6-二羟基蒽醌或1,8-二羟基蒽醌可以显著提高硅胶对人参皂苷RZ1和RK1的分离效果。1,2-二羟基蒽醌、2,6-二羟基蒽醌、1,4-二羟基蒽醌或1,8-二羟基蒽醌虽然都是二羟基蒽醌结构，但是1,4-二羟基蒽醌的键合并不能增强硅胶对人参皂苷RZ1和RK1的分离能力，这可能与羟基位置有关。因此，可以生产制备1,2-二羟基蒽醌、2,6-二羟基蒽醌或1,8-二羟基蒽醌键合硅胶填料的色谱柱作为人参皂苷RZ1和本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，其特征在于：在硅胶表面键合1,2‑二羟基蒽醌得到。
【技术特征摘要】
1.一种蒽醌衍生物键合硅胶固定相，其特征在于：在硅胶表面键合1,2-二羟基蒽醌得到。2.权利要求1所述蒽醌衍生物键合硅胶固定相的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤S1，先用3mol/L盐酸浸泡硅胶12h，再热回流10h，然后反复用水洗至中性，最后用丙酮洗2次，在160℃下烘烤除水活化6h，冷却后保存于干燥器中备用；步骤S2，取6.0g经活化的干燥硅胶，加入80mL无水甲苯，搅拌下加入4.0mLKH-560和3滴三乙胺催化剂，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲苯抽提24h，依次用丙酮、甲醇和丙酮洗涤，80℃下真空干燥8h，得到偶联剂键合硅胶GBS；步骤S3，加热搅拌下，使1.0g充分干燥的1,2-二羟基蒽醌溶解到80mL无水新蒸甲苯中，搅拌下接着加入4.0gGBS，2滴高氯酸，在氮气保护下加热回流24h，冷却，用甲醇索氏提取残余的1,...
【专利技术属性】
技术研发人员：林思思，
申请(专利权)人：林思思，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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