双重标记磁珠及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种双重标记磁珠及其制备方法和应用。该双重标记磁珠在醛基葡聚糖包被的纳米氧化铁磁珠表面固定有捕获抗体和固定寡核苷酸片段，在检测时，当捕获抗体捕获有目标微生物时，可以产生第一重信号。该第一重信号的有无可以反映出磁珠通过特异性的捕获抗体有无捕获到微生物。后续进一步可以通过特异性设计的第二扩增引物对对捕获的微生物的特异性核酸区域进行扩增，并借助第二荧光检测探针检测得到第二重信号，该第二重信号的有无即可反映由捕获抗体捕获的微生物是否是目的微生物。通过双重信号进行微生物检测，检测结果的准确性和可靠性显著提高，并且在检测时，首先经由捕获抗体捕获和富集目的微生物，因而检测灵敏度也显著提高。

Double labeled magnetic beads and their preparation and Application

The invention relates to a double labelled magnetic bead and a preparation method and application thereof. The double labeled magnetic beads are immobilized with capturing antibodies and oligonucleotide fragments on the surface of aldehyde-based dextran coated nanometer iron oxide magnetic beads. When capturing antibodies to capture target microorganisms, the first heavy signal can be generated. The presence or absence of the first signal can reflect whether the magnetic beads capture microorganisms through specific antibodies. Further, the specific nucleic acid region of the captured microorganism can be amplified by the second amplification primer specially designed, and the second signal can be detected by the second fluorescence detection probe. The presence or absence of the second signal can reflect whether the microorganism captured by the captured antibody is the target microorganism. The accuracy and reliability of the results of microbial detection by dual signals are significantly improved, and the detection sensitivity is also significantly improved by capturing antibodies to capture and enrich the target microorganisms.

【技术实现步骤摘要】
双重标记磁珠及其制备方法和应用
本专利技术涉及分子生物学检测领域，尤其是涉及一种双重标记磁珠及其制备方和应用。
技术介绍
1947年，DickGW等在非洲乌干达的恒河猴体内发现了一种全新的黄病毒，并将之命名为寨卡病毒(Zikavirus)。五年后，同样在乌干达报道了人类首例临床病例。在随后的50多年时间里，有报道的寨卡病例仅局限在非洲和亚洲地区，且只呈散发流行。直到2007年，在雅浦群岛暴发了寨卡病毒大规模流行，总共约73％的人口受到了感染，其中18％的人口有临床症状产生。自此以后，寨卡疫情有向全球蔓延的趋势，近两年在美洲和东南亚暴发的寨卡疫情充分验证了这一点。目前为止，全球已有67个国家和地区报道了寨卡病例，一百多万人口遭受了寨卡病毒的感染。WHO宣布寨卡病毒疫情已构成国际关注的突发公共卫生事件，并且称聚集性婴儿小头病例和某些神经系统混乱疾病如格林－巴利综合症与寨卡病毒有关联。对寨卡病毒的早期诊断有助于有效遏制疾病的传播，目前针对寨卡病毒检测主要方法包括寨卡病毒血清学检测以及RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)法对病毒核酸进行检测。但无论是血清学检测还是核酸检测法，一般只能产生单个检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双重标记磁珠，其特征在于，包括醛基葡聚糖包被的纳米氧化铁磁珠以及固定在所述纳米氧化铁磁珠表面的捕获抗体和固定寡核苷酸片段，所述捕获抗体通过其端部的氨基与所述纳米氧化铁磁珠表面包被的醛基葡聚糖上的醛基反应结合而被固定，所述固定寡核苷酸片段通过其5’端修饰的氨基与所述纳米氧化铁磁珠表面包被的醛基葡聚糖上的醛基反应结合而被固定。

【技术特征摘要】
1.一种双重标记磁珠，其特征在于，包括醛基葡聚糖包被的纳米氧化铁磁珠以及固定在所述纳米氧化铁磁珠表面的捕获抗体和固定寡核苷酸片段，所述捕获抗体通过其端部的氨基与所述纳米氧化铁磁珠表面包被的醛基葡聚糖上的醛基反应结合而被固定，所述固定寡核苷酸片段通过其5’端修饰的氨基与所述纳米氧化铁磁珠表面包被的醛基葡聚糖上的醛基反应结合而被固定。2.如权利要求1所述的双重标记磁珠，其特征在于，所述醛基葡聚糖包被的纳米氧化铁磁珠的粒径为50nm±15nm。3.一种检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1或2所述的双重标记磁珠，还包括第一扩增引物对、第一荧光检测探针以及游离寡核苷酸片段；所述第一扩增引物对的上游引物与所述固定寡核苷酸片段的5’端或靠近5’端的部分片段的序列一致，所述第一扩增引物对的下游引物与所述游离寡核苷酸片段的5’端或靠近5’端的部分片段的序列一致，所述第一荧光检测探针与所述游离寡核苷酸片段中部的部分片段的序列一致，所述游离寡核苷酸片段的3’端的部分片段与所述固定寡核苷酸片段的3’端的部分片段互补配对。4.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，所述固定寡核苷酸片段的序列如SEQIDNO:1所示；所述第一扩增引物对的上游引物和下游引物的序列分别如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示；所述第一荧光检测探针的序列如SEQIDNO:4所示；所述游离寡核苷酸片段的序列如SEQIDNO:5所示。5.如权利要求3所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括第二扩增引物和第二荧光检测探针，所述第二扩增引物用于扩增所述捕获抗体捕获的微生物中的特异性核酸片段，所述第二荧光检测探针用于检测由所述第二扩增引物扩增的特异性核酸片段。6.如权利要求3～5中任一项所述的检测试剂盒，其特征在于，还包括结合/除杂缓冲液、洗涤缓冲液、洗脱缓冲液、结合抗体蛋白层析柱、阳性参考品、阴性参考品以及PCR反应液中的至少一种。7.一种双重标记磁珠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：向醛基葡聚糖包被的纳米氧化铁磁珠溶液中加入碱性缓冲液，调节酸碱度至碱性后加入捕获抗体，振荡反应，使所述捕获抗体的端部的氨基与所述纳米氧化铁磁珠表面包被的醛基葡聚糖上的醛基...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯长洪，温华杰，李家玉，古晓奎，王哲，高秋芳，雷志斌，
申请(专利权)人：广东顺德工业设计研究院广东顺德创新设计研究院，
类型：发明
国别省市：广东,44