一种小鼠肺癌模型的构建方法技术

本发明专利技术提供一种小鼠肺癌模型的构建方法，包括如下步骤：S1取6‑8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应1‑2周后，置于动式吸入染毒柜的主体柜中进行苯并芘暴露，暴露的条件参数包括：5天/周，5‑8h/天，苯并芘暴露浓度为9‑12μg/m

Construction method of a mouse lung cancer model

The invention provides a method for constructing a mouse lung cancer model, which includes the following steps: S1 takes wild type mice of C57BL/6J aged 6 to 8 weeks, adapts to 1 to 2 weeks, and exposes them to benzopyrene in the main cabinet of the mobile inhalation containers. The exposure conditions include: 5 days/week, 5 to 8 hours/day, and the exposure concentration of benzopyrene is 9 to 12 ug/m.

【技术实现步骤摘要】
一种小鼠肺癌模型的构建方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种小鼠肺癌模型的构建方法。
技术介绍
肺癌作为当前全球最常见和死亡率最高的恶性肿瘤之一，严重威胁着人类的生命和健康。随着我国工业化、城市化进程的加速，肺癌的危害日益加剧，现已成为我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。随着肺癌日益成为一种高发的恶性肿瘤疾病，肺癌给人们的生活和经济造成了巨大的负担，已成为一个严重的公共卫生问题。肺癌的临床表现复杂，难以早期发现和诊断等使得肺癌疗效难以提高。由于不能直接利用人体进行试验，因此构建动物肺癌模型是肺癌发病机制研究以及相关治疗药物开发的重要手段。目前，常用肺癌动物模型主要包括两种类型：诱导模型和移植模型。中国专利申请CN104826136A公开了大鼠移植性肺癌模型的建立方法，包括如下步骤：Walker-256细胞腹水的制备，Walker-256细胞接种到SD大鼠肺部，大鼠生长14天以后，得到移植性肺癌模型。与移植性肺癌模型相比，诱导肺癌模型更容易反映肺癌在人体的实际发生情况。已有很多研究报道了小鼠诱发型肺癌模型的方法，包括鼻滴注致癌物诱发肺癌、肺穿刺致癌剂诱发肺癌、皮下注射诱发肺癌等。然而，鼻滴注法使用移液枪吸取滴注液，逐滴滴入动物鼻腔，操作比较耗时，滴注液也很可能经口腔到达胃部；肺穿刺法是将致癌剂直接通过胸壁穿刺注射入肺内，因多次穿刺可能造成气胸、血胸、感染等引起实验动物死亡，且操作比较繁琐等缺点；皮下注射是直接经皮下注射致癌物，容易在皮下局部形成肿瘤，同时肝脏及胃肠道的肿瘤发生率较高，致癌器官的特异性不理想，且与人体接触苯并芘致肺癌的实际相差较大。因此，上述诱导肺癌模型的构建方法均存在不同程度的不足，难以满足相关要求。
技术实现思路
为解决现有技术中存在的问题，本专利技术通过长期动式吸入诱癌剂的方式成功建立了小鼠肺癌模型。动式吸入在暴露过程中能够保持染毒柜内二氧化碳分压、温度和湿度的恒定，且维持诱癌剂暴露浓度的基本恒定，动式吸入无人为损伤肺部原来的结构，也不会引起感染等干扰，符合人体实际环境暴露途径，更能反映肺癌在人体的实际发生情况，有利于肺癌相关治疗药物的开发。本专利技术的目的将通过下面的详细描述来进一步说明。本专利技术提供一种小鼠肺癌模型的构建方法，包括如下步骤：S1取6-8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应1-2周后，置于动式吸入染毒柜的主体柜中进行苯并芘暴露，暴露的条件参数包括：5天/周，5-8h/天，苯并芘暴露浓度为9-12μg/m3；暴露期间小鼠停止供食，自由饮水；S2暴露23-28周后，得到小鼠肺癌模型。本专利技术选用多环芳烃类致癌物苯并芘(BaP)作为诱癌剂，主要是考虑到BaP在空气中广泛存在，且动物实验和流行病学研究均显示，肺癌的发病率和死亡率与空气中BaP的水平呈显著正相关。BaP为固态粉末状，无法直接使用，本专利技术将其溶于有机溶剂DMSO，然后用超纯水稀释到设计的暴露浓度；对照组则采用溶剂对照。本专利技术通过运用动式吸入染毒柜，实现了BaP的动式吸入，与人体暴露于大气中BaP的实际情况较接近。为了监测小鼠动式吸入过程中BaP的外暴露浓度，采用活性炭管法检测染毒柜内BaP浓度；同时采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)测定小鼠全血中BDPE-DNA加合物含量，检测BaP的内暴露浓度。通过监测外暴露浓度和内暴露浓度，确保BaP有效的进入小鼠体内。通过对BaP暴露浓度和时间进行研究发现，较高浓度的BaP中短期暴露容易导致小鼠的死亡等不理想情况的发生，本专利技术采用长期重复暴露，并进一步根据我国国标GB3095-2012《环境空气质量标准》规定的环境空气BaP限量标准和相关现有技术文献，将苯并芘暴露浓度设计为9-12μg/m3，进一步优选9.8-10.5μg/m3，暴露期间小鼠停止供食，自由饮水，非暴露期间自由饮水且供应饲料，观察记录小鼠的生存状况和体重变化，并定期取肺组织进行病理分析，鉴定肺癌模型是否构建成功，结果显示暴露23-28周后成功构建小鼠肺癌模型，重复性好。优选地，所述动式吸入染毒柜包括主体柜、机械通风系统和配气系统。主体柜的数量为2个，便于同时进行实验组和对照组的考察。优选地，所述苯并芘以苯并芘溶液的形式注入，苯并芘溶液的浓度为0.01mg/mL，经配气系统的注射泵定量输送到高压雾化装置。苯并芘溶液经高压雾化装置雾化成粒径为0.1-0.8μm的气溶胶。苯并芘溶液被雾化成气溶胶，有利于维持暴露浓度的均衡和稳定。优选地，所述暴露的条件参数还包括：温度19-25℃，相对湿度50-70％，氧气含量19-23％(含量指体积百分含量)。优选地，所述主体柜维持0.07-0.09MPa的负压；所述机械通风系统维持12-15次/h的换气频率。优选地，所述小鼠为雌性小鼠。配气系统采用高精度注射泵将BaP溶液定量的输送到高压雾化装置，通过喷嘴加速气流，高速气体为液体的充分分散提供必要的湍流和剪切力，BaP溶液瞬间被分裂成粒径不到1微米的气溶胶。动式吸入染毒柜中设置有2个主体柜，实验组小鼠和BaP溶液、对照组小鼠和对照溶液分别放入相应的主体柜内，由同一个操作系统控制，保证两组参数完全一致。机械通风系统维持12-15次/h的换气频率，保证氧气浓度为19-23％及BaP溶液的均匀分布，主体柜内维持轻微的负压以免气溶胶从柜内逸出，同时保证主体柜中气流的稳定性。每周清洗主体柜1次，保证动式吸入染毒柜内环境清洁。更优选地，所述BaP暴露浓度为9.8-10.5μg/m3。更优选地，所述步骤S2的暴露周期为25-26周。相应地，本专利技术还提供一种小鼠肺癌模型，采用所述的小鼠肺癌模型的构建方法制得。与现有技术相比，本专利技术的有益效果包括：(1)本专利技术通过长期动式吸入诱癌剂BaP的方式成功建立了小鼠肺癌模型，无人为损伤肺部原来的结构，也不会引起感染等干扰，符合人体实际环境暴露途径，更能反映肺癌在人体的实际发生情况，有利于肺癌相关治疗药物的开发；(2)本专利技术所需的实验设备简单，操作方法简便，可成功构建小鼠肺癌模型且重复性好，不会导致小鼠感染和死亡等不理想情况的发生，适用范围广。附图说明图1不同实验动物的体重变化示意图。图2BaP标准系列溶液的浓度测定标准曲线。图3BaP暴露90d小鼠肺组织病理分析图(×100)。图4BaP暴露180d小鼠肺组织病理分析图(A：×100，B：箭头指向部分×200)。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细说明。材料和设备：1.1实验动物野生型C57小鼠(C57BL/6J野生型小鼠)：SPF级，6-8周龄，质量18-20g，购自广东省医学实验动物中心，合格证号为11400700104488。1.2主要试剂和配置BPDE-DNA检测试剂盒购自美国CellBiolabs公司。BaP溶液：称取10mgBaP，将其溶于10mLDMSO，配成浓度为1mg/mL储备液，充分混匀后避光保存，使用时加超纯水稀释成0.01mg/mLBaP溶液。对照溶液：5mLDMSO加入到495mL超纯水中配制成1％DMSO溶液。1.3主要实验设备动式吸入染毒柜购自广州九方公司，型号：L-RD/0600B。实施例一小鼠的处理取SPF级C57BL/6J野生型小鼠，适应一周后，随机分为2组，对照组48只，暴露组48只，其中雌雄各半本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小鼠肺癌模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：S1取6‑8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应1‑2周后，置于动式吸入染毒柜的主体柜中进行苯并芘暴露，暴露的条件参数包括：5天/周，5‑8h/天，苯并芘暴露浓度为9‑12μg/m3；暴露期间小鼠停止供食，自由饮水；S2暴露23‑28周后，得到小鼠肺癌模型。

【技术特征摘要】
1.一种小鼠肺癌模型的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：S1取6-8周龄的C57BL/6J野生型小鼠，适应1-2周后，置于动式吸入染毒柜的主体柜中进行苯并芘暴露，暴露的条件参数包括：5天/周，5-8h/天，苯并芘暴露浓度为9-12μg/m3；暴露期间小鼠停止供食，自由饮水；S2暴露23-28周后，得到小鼠肺癌模型。2.根据权利要求1所述的小鼠肺癌模型的构建方法，其特征在于：所述动式吸入染毒柜包括主体柜、机械通风系统和配气系统。3.根据权利要求1或2所述的小鼠肺癌模型的构建方法，其特征在于：所述苯并芘以苯并芘溶液的形式注入，苯并芘溶液的浓度为0.01mg/mL，经配气系统的注射泵定量输送到高压雾化装置。4.根据权利要求1至3中任一项所述的小鼠肺...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄海燕，付英斌，吴德生，肖云军，刘建军，
申请(专利权)人：深圳市疾病预防控制中心深圳市卫生检验中心，深圳市预防医学研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44