The present application relates to a method for obtaining DNA information of rare species and belongs to the technical field of determination or detection of enzymes or microorganisms. After obtaining the tissue of South China tiger, the DNA was purified and fragmented randomly. The DNA was separated and recovered. The recovered DNA was catalyzed by adding A and linked with T_vector. The conjugated products were transformed. Positive colonies were screened out, cultured overnight, plasmid was recovered, sequenced and specific. Primer design, synthesis, re-implementation of PCR and PCR products sequencing, and primer design of the sequence used to compare, if consistent, that the DNA fragment is indeed the DNA of the target species. The application for DNA information acquisition of rare species has the advantages of simple operation, high acquisition rate and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种珍稀物种DNA信息获取方法
本申请涉及一种珍稀物种DNA信息获取方法,属于包含酶或微生物的测定或检测方法
技术介绍
华南虎(PantheratigrisAmoyensis)是我国特有的虎的亚种,于1981年被列入CITES公约附录Ⅰ保护名单,亦称“中国虎”,目前认为已在自然界中灭绝,仅在几个有限的动物园中圈养供游客观赏。世界上有很多此类的濒危动物。随着组学研究技术的发展,获取任何生物的DNA信息并非难事,只是成本太高,在没有一定前期工作基础的情况下,难以获得任何级别的经费支持。因此,如何在经费有限的情况下获得一些DNA信息并开展一些工作,为今后争取国家经费做好前期工作,打下良好基础就显得尤为重要。基于此,做出本申请。
技术实现思路
针对现有珍稀动物DNA获取所存在的上述缺陷,本申请提供一种操作便捷、获取率高、成本低廉的珍稀物种DNA信息获取方法。为实现上述目的,本申请采取的技术方案如下:一种珍稀物种DNA信息获取方法,包括以下步骤:(1)取对应物种的组织,以酚/氯仿提取法纯化DNA,并对DNA样品进行涡旋震荡处理,使DNA发生随机性片段化;(2)对DNA片段进行分离,回收特定分子量的DNA,对回收得到的DNA进行TaqDNA聚合酶催化反应;(3)对催化产物进行T-载体进行连接反应;(4)对连接产物进行转化;(5)对转化获得的菌落进行阳性菌落筛选,选出阳性菌落;(6)对筛选出来的阳性菌落进行过夜培养、质粒回收,对DNA片段进行测序,并进行特异性引物设计;(7)以步骤(1)中纯化得到的DNA为模板,以步骤(6)中得到的引物实施PCR并对PCR产物再次 ...
【技术保护点】
1.一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取对应物种的组织,以酚/氯仿提取法纯化DNA,并对DNA样品进行涡旋震荡处理,使DNA发生随机性片段化;(2)对DNA片段进行分离,回收特定分子量的DNA,对回收得到的DNA进行TaqDNA聚合酶催化反应;(3)对催化产物进行T‑载体连接反应;(4)对连接产物进行转化;(5)对转化获得的菌落进行阳性菌落筛选,选出阳性菌落;(6)对筛选出来的阳性菌落进行过夜培养、质粒回收,对DNA片段进行测序,并进行特异性引物设计;(7)以步骤(1)中纯化得到的DNA为模板,以步骤(6)中得到的引物实施PCR以及对PCR产物再次测序,并与步骤(6)中的DNA测序进行比较,两者一致,即可确认其为对应物种的DNA。
【技术特征摘要】
1.一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取对应物种的组织,以酚/氯仿提取法纯化DNA,并对DNA样品进行涡旋震荡处理,使DNA发生随机性片段化;(2)对DNA片段进行分离,回收特定分子量的DNA,对回收得到的DNA进行TaqDNA聚合酶催化反应;(3)对催化产物进行T-载体连接反应;(4)对连接产物进行转化;(5)对转化获得的菌落进行阳性菌落筛选,选出阳性菌落;(6)对筛选出来的阳性菌落进行过夜培养、质粒回收,对DNA片段进行测序,并进行特异性引物设计;(7)以步骤(1)中纯化得到的DNA为模板,以步骤(6)中得到的引物实施PCR以及对PCR产物再次测序,并与步骤(6)中的DNA测序进行比较,两者一致,即可确认其为对应物种的DNA。2.如权利要求1所述的一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于:步骤(1)中,所述涡旋震荡处理采用间歇方式,其振荡频率为50HZ,每次震荡的时长为2s,两个震荡周期之间的间隔时间为2s,重复10次。3.如权利要求1所述的一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于:步骤(2)中,DNA分离采用琼脂糖凝胶电泳。4.如权利要求3所述的一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于:所述回收的DNA分子量为500-1000bp。5.如权利要求1所述的一种珍稀物种DNA信息获取方法,其特征在于:步骤(3)中,T-载体与目的基因片段的摩尔质量比在1:2-8。6...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨仙玉,张先福,马敬华,刘建勋,施伟斌,
申请(专利权)人:浙江农林大学,杭州野生动物世界有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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