用于NHL和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物制造技术

本发明专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白、核酸和细胞。特别是，本发明专利技术涉及癌症的免疫疗法。本发明专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(能够例如作为刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗组合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于NHL和其他癌症免疫治疗的新型肽和肽组合物
本专利技术涉及用于免疫治疗方法的肽、蛋白质、核酸和细胞。特别是，本专利技术涉及癌症的免疫疗法。本专利技术还涉及单独使用或与其他肿瘤相关肽(刺激抗肿瘤免疫反应或体外刺激T细胞并转入患者的疫苗复合物的活性药物成分)联合使用的肿瘤相关T细胞(CTL)肽表位。与主要组织兼容性复合体(MHC)分子结合的肽或与此同类的肽也可以是抗体、可溶性T细胞受体和其他结合分子的靶标。本专利技术涉及数种新型肽序列及其变体，它们源自人肿瘤细胞的HLA-I类分子，可用于引发抗肿瘤免疫反应的疫苗组合物中或作为开发药物/免疫活性化合物和细胞的目标。
技术介绍
非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一组异质的淋巴组织增生疾病。NHL通常起源于淋巴组织并可扩散到其他器官(NationalCancerInstitute，2015)。NHL是第七最常见的癌症类型，占美国所有新发癌症病例的4.3％(SEERStatfacts，2014)。它是欧洲和美国最常见的血液恶性肿瘤(Inogesetal.，2014)。发生NHL的可能性随年龄增加：确诊时的中位年龄为66岁。NHL在白人血统人群中更常见(每10万人21例)，其次是非裔(每10万人15例)和亚裔(每10万人14例)。男性发生NHL的风险高于女性(男性每10万人23.9例，女性每10万人16.3例)(SEERStatfacts，2014)。NHL患者的5年相对存活率为70％，并且随确诊时的癌症阶段而变化。对于局部性疾病，5年相对存活率为82％。如果NHL已扩散到身体其他部位，则5年相对存活率区域阶段疾病下降为73.8％，远程转移阶段疾病下降为62.4％(SEERStatfacts，2014)。危险因素包括(高)年龄、男性、种族(白种人)、暴露于苯或辐射、HIV、自身免疫疾病、感染HTLV-1、EBV或HHV8，感染幽门螺杆菌、鹦鹉热衣原体、空肠弯曲杆菌或HCV，(高)体重和乳房植入体(AmericanCancerSociety，2015)。NHL有60多种亚型。三种最常见的亚型为弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL，最常见的亚型)、滤泡性淋巴瘤(FL，第二最常见的亚型)和小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞性淋巴瘤(SLL/CLL，第三最常见的亚型)。DLBCL、FL和SLL/CLL占NHL的85％左右(Lietal.，2015)。NHL的治疗取决于组织学类型和阶段。弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的NHL类型，占所有NHL的30％。DLBCL属于侵袭性NHL亚型，并且大多数患者显示疾病快速进展。侵袭性NHL的国际预后指数(IPI)使用五个重要风险因素对总生存率做出预后判断：1.年龄(≤60岁对比＞60岁)2.血清乳酸脱氢酶(LDH)(正常对比升高)3.体能状态(0或1分对比2-4分)4.期别(I或II期对比III或IV期)5.淋巴结外部位累及(0或1分对比2-4分)。有两种或更多风险因素的患者5年时的无复发存活率和总体存活率小于50％。bcl-2和myc基因重排和/或myc过度表达的患者预后特别差。共同表达CD20和CD30的DLBCL患者预后较好，预期可进行抗CD30特异性治疗(NationalCancerInstitute，2015)。滤泡性淋巴瘤(FL)是第二最常见的NHL类型，包含20％的所有NHL，占所有惰性淋巴瘤的70％。超过90％的患者表现出bcl-2基因重排。多数患者在确诊时年龄为50岁或更大，并患有晚期疾病。滤泡淋巴瘤国际预后指数(FLIPI)使用五个重要风险因素对总生存率做出预后判断：1.年龄(≤60岁对比＞60岁)2.血清乳酸脱氢酶(LDH)(正常对比升高)3.期别(I或II期对比III或IV期)4.血红蛋白水平(≥120g/L对比＜120g/L)5.淋巴结部位的数量(≤4对比＞4)。没有或只有一个危险因素的患者10年存活率为85％。有三个或更多危险因素的患者10年存活率为40％(NationalCancerInstitute，2015)。NHL的诊断使用异常淋巴结切除活检或累及器官切开活检进行。除了免疫组织化学外，还使用细胞遗传学、分子遗传学和荧光原位杂交(FISH)方法来明确诊断(Armitage，2007)。分期在评估患者病史、体格检查和实验室检查(包括血液学参数、筛查性化学检查，特别是血清乳酸脱氢酶(LDH)水平测试)之后进行。影像学检查包括胸部、腹部、骨盆的计算机断层扫描和PET扫描(Armitage，2007)。确定预后和治疗决定要区分惰性NHL类型和侵袭性NHL。惰性NHL进展缓慢，具有良好的预后并在早期对放疗、化疗和免疫治疗有反应，但在晚期不可治愈。侵袭性NHL进展快速，但对强化联合化疗有反应(NationalCancerInstitute，2015)。根据确诊时的疾病期别，将患者分类为以下不同的预后组(NationalCancerInstitute，2015)：AnnArbor分期系统通常用于患有NHL的患者。在该系统中，I期、II期、III期和IV期再细分为A和B类。有明确全身症状的患者属于B类，而没有这些症状的患者属于A类。B类症状包括诊断前六个月内体重不明原因地下降超过10％，不明原因地发热体温超过38℃，且有盗汗。根据特定器官/部位受累情况使用以下专门代号(NationalCancerInstitute，2015)：代号具体部位E主要淋巴集聚附近淋巴结外恶性肿瘤N结节H肝脏L肺脏M骨髓S脾脏P胸膜O骨骼D皮肤为了确定精确分期，使用基于临床评估结果的临床分期(CS)和基于初始活检后有创程序结果的病理学分期(PS)(NationalCancerInstitute，2015)。NHL的治疗取决于组织类型和分期。标准治疗方案包括(NationalCancerInstitute，2015)：惰性、I期和相邻II期NHL：标准治疗方案选项包括放射治疗、利妥昔单抗(抗CD20单克隆抗体)±化疗、观察等待和针对晚期疾病患者的其他治疗。惰性、非相邻II/III/IV期NHL：标准治疗方案选项包括无症状患者观察等待、利妥昔单抗、阿托珠单抗(抗CD20单克隆抗体)、嘌呤核苷类似物(氟达拉滨、2-氯脱氧腺苷)、烷化剂(环磷酰胺、苯丁酸氮芥)±类固醇、苯达莫司汀、联合化疗(CVP、C-MOPP(环磷酰胺、长春新碱、丙卡巴肼和泼尼松)、CHOP、FND(氟达拉滨、米托蒽醌+地塞米松))、钇标记的替伊莫单抗和维持性利妥昔单抗。利妥昔单抗(R)被视为一线治疗，单独或与其他药物(R-苯达莫司汀、RF(氟达拉滨)、R-CVP(环磷酰胺、长春新碱和泼尼松)、R-CHOP(环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松)、R-FM(氟达拉滨、米托蒽醌)、R-FCM(氟达拉滨、环磷酰胺和米托蒽醌))联合使用。正在接受临床评估的是骨髓移植(BMT)或外周干细胞移植(PSCT)、独特型疫苗和放射性标记的单克隆抗体(ofatumumab：抗CD20单克隆抗体)。惰性、复发性NHL：标准治疗方案选项包括化疗(单药或组合药物)、利妥昔单抗、来那度胺、放射性标记的抗CD20单克隆抗体(钇-90替伊莫单抗)和姑息放疗。正在接受临床评估的治疗方案包括SCT。侵袭性、I期和相本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQ ID No.1至SEQ ID No.311的氨基酸序列、以及与SEQ ID No.1至SEQ ID No.311具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导T细胞与该变体肽发生交叉反应，其中所述肽不是全长多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.02.19 GB 1602918.3;2016.02.19 US 62/297,4951.一种肽及其药用盐，所述肽包括选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.311的氨基酸序列、以及与SEQIDNo.1至SEQIDNo.311具有至少88％同源性的其变体序列，其中变体肽与主要组织兼容性复合体(MHC)结合和/或诱导T细胞与该变体肽发生交叉反应，其中所述肽不是全长多肽。2.根据权利要求1所述的肽，其中所述肽有能力与MHC-I或-II类分子结合，其中所述肽与MHC结合时能够被CD4和/或CD8T细胞识别。3.根据权利要求1或2所述的肽或其变体，其中氨基酸序列包括SEQIDNo.1至SEQIDNo.311中任一个的连续氨基酸延伸区段。4.根据权利要求1至3中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽或其变体的总长度为8至100个氨基酸、优选为8至30个氨基酸、更优选为8至16个氨基酸、最优选为该肽由或基本由SEQIDNo.1至SEQIDNo.311中任一项的氨基酸序列组成。5.根据权利要求1至4中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽被修饰，和/或包含非肽键。6.根据权利要求1至5中任一项所述的肽或其变体，其中所述肽为融合蛋白的一部分，尤其包含HLA-DR抗原相关不变链(Ii)的N-端氨基酸。7.一种核酸，编码权利要求1至6中任一项所述的肽或其变体，其任选地连接到异源启动子序列。8.一种表达载体，表达权利要求7所述的核酸。9.一种重组宿主细胞，其包括权利要求1至6所述的肽、权利要求7所述的核酸、权利要求8所述的表达载体，其中所述宿主细胞优选为抗原提呈细胞，例如树突状细胞。10.权利要求1至6任一项中所述的肽或其变体、权利要求7中所述的核酸、权利要求8中所述的表达载体、或权利要求9所述的宿主细胞在药物中的用途。11.一种制备权利要求1至6中任一项所述的肽或其变体的方法，该方法包括培养权利要求9所述的宿主细胞，该宿主细胞提呈权利要求1至6所述的肽、或表达权利要求7所述的核酸、或载有权利要求8所述的表达载体，以及从该宿主细胞或其培养基中分离出肽或其变体。12.一种体外制备激活的T淋巴细胞的方法，该方法包括将T细胞与载有抗原的人I或II类MHC分子体外接触一段时间，该时间足以以抗原特异性的方式激活T细胞，人I或II类MHC分子在合适的抗原提呈细胞表面或人工模拟的抗原提呈细胞结构表面上表达，其中所述抗原为权利要求1至4任一项中所述的肽。13.一种激活的T淋巴细胞，由权利要求12所述的方法制成，其有选择性地识别一种细胞，该细胞提呈含权利要求1至4任一项中给定氨基酸序列的多肽。14.一种杀灭患者中靶细胞的方法，其中该靶细胞提呈含有权利要求1至4中任一项给出的氨基酸序列的多肽，所述方法包括向患者施用有效量的权利要求13所述的激活的T细胞。15.一种抗体，特别是可溶性或膜结合性抗体，其特异性地识别权利要求1至5中所述的肽或其变体，优选为与MHC分子结合时的权利要求1至5中任一项所述的肽或变体。16.权利要求1至6任一项中所述的肽、权利要求7所述的核酸、权利要求8所述的表达载体、权利要求9所述的细胞或权利要求13所述的激活的毒性T淋巴细胞或权利要求15所述的抗体在诊断和/或治疗癌症或制造抗癌药物中的用途。17.根据权利要求16所述的用途，其中所述癌症选自NHL、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肾细胞癌、脑癌、胃癌、结直肠癌、肝细胞癌、胰腺癌、白血病、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、膀胱癌、子宫癌、胆囊癌、胆管癌和其他肿瘤，这些肿瘤过表达能够衍生得到SEQIDNo.1至SEQIDNo.311的肽的蛋白。18.一种试剂盒，包括：(a)容器，包含药物组合物，该药物组合物含有权利要求1至6中任一项所述的肽或变体、权利要求7所述的核酸、权利要求8所述的表达载体、权利要求10所述的细胞、权利要求13所述的激活的T淋巴细胞、或权利要求15所述的抗体，以溶液或冻干的形式；(b)任选地，第二个容器，其含有冻干剂型的稀释液或重构液；(c)任选地，至少一种以上选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.71的肽，以及(d)任选地，(i)使用溶液或(ii)重构和/或使用冻干剂型的说明书。19.根据权利要求18所述的试剂盒，进一步包括一个或多个(iii)缓冲剂，(iv)稀释剂，(v)过滤液，(vi)针，或(v)注射器。20.根据权利要求18或19所述的试剂盒，其中所述肽选自SEQIDNo.1至SEQIDNo.311。21.一种用于生产个性化抗癌疫苗以用作个体患者的基于化合物的和/或细胞疗法，所述方法包括：a)识别个体患者的肿瘤样本所提呈的肿瘤相关肽(TUMAP)；b)将a)中识别的肽与已经针对免疫原性和/或在肿瘤中相对正常组织过提呈进行预先筛选的肽库进行比较；c)选择库中的与在该患者中识别的TUMAP匹配的至少一种肽；以及d)基于步骤c)生产和/或制备个性化疫苗或化合物或细胞疗法。22.根据权利要求21中所述的方法，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：奥利弗·施尔，安德烈·马尔，托尼·温斯切尼克，安妮塔·维贝，延斯·弗里切，哈普瑞特·辛格，
申请(专利权)人：伊玛提克斯生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE