一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法技术

本发明专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法，该方法以d0/d3‑3‑N‑甲基‑2‑羧基罗丹明6G作为同位素标记衍生试剂，用d0/d3‑MCR6G标记衍生实际样品和标准品，以d3‑MCR6G标记的标准品作为内标，得到的轻/重标记衍生化产物混合，纯化和富集，经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。本发明专利技术设计合成的自身带有一分子正电荷的d0/d3‑3‑N‑甲基‑2‑羧基罗丹明6G（d0/d3‑MCR6G）做衍生试剂，可在液质联用多反应检测模式中提高色谱的分离能力和质谱的离子化效率，进而提高检测的灵敏度，而且衍生反应快速、产物稳定。

A method for detection and analysis of neurosteroids containing hydroxyl groups

The present invention relates to the field of analytical chemistry, in particular to a method for determination and analysis of hydroxyl-containing neurosteroids. The method uses d0/d3_3_N_methyl_2_carboxyl rhodamine 6G as isotope labeling derivative reagent, d0/d3_MCR6G as labeling derivative sample and standard product, and d3_MCR6G as internal standard. The light/heavy labeled derivatives were mixed, purified and enriched, filtered by membrane and analyzed by ultra-high performance liquid chromatography triple quadrupole tandem mass spectrometry. The d0/d3_3_N_methyl_2_carboxyl rhodamine 6G (d0/d3_MCR6G) designed and synthesized by the present invention can be used as derivative reagent to improve the chromatographic separation ability and ionization efficiency of mass spectrometry in the liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) multi-reaction detection mode, thereby improving the detection sensitivity, and the derivative reaction is fast and fast. The product is stable.

【技术实现步骤摘要】
一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法
本专利技术涉及分析化学领域，具体涉及一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法，尤其是涉及一种首次合成并使用的d0/d3-3-N-甲基-2-羧基罗丹明6G（d0/d3-MCR6G）作为稳定同位素标记衍生试剂，衍生产物经磁分散固相萃取纯化和富集后，采用超高效液相色谱三重四极杆质谱检测的分析方法。
技术介绍
帕金森病（PD）是一种多发于中老年人的神经退行性疾病，随社会老龄化的加重，引起人们的广泛关注。有报道证明神经类固醇含量的变化与PD紧密相关并具有重要的研究意义，了解神经类固醇与PD之间的关系不仅有助于人们获得更高的生活质量，而且还有助于评估其神经保护作用以开发新的治疗方法。然而由于其含量低及生物样品中复杂的基质效应，以及神经类固醇在质谱负离子模式下有较弱的离子化效率，使其定量检测面临巨大的挑战。现有技术中，采用多种不同的分析方法实现对神经类固醇的定量检测，如生物传感法、电化学检测法、液相色谱紫外检测法以及质谱检测等方法。文献《MagneticsensingfilmbasedonFe3O4@Au-GSHmolecularlyimprintedpolyme本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法，其特征在于，该方法以d0/d3‑3‑N‑甲基‑2‑羧基罗丹明6G（d0/d3‑MCR6G）作为同位素标记衍生试剂，用轻/重d0/d3‑MCR6G分别标记衍生待测实际样品和标准品，以d3‑MCR6G标记的标准品作为内标，得到的轻/重标记衍生化产物混合，使用磁分散固相萃取技术纯化和富集，经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。

【技术特征摘要】
1.一种含羟基的神经类固醇的检测分析方法，其特征在于，该方法以d0/d3-3-N-甲基-2-羧基罗丹明6G（d0/d3-MCR6G）作为同位素标记衍生试剂，用轻/重d0/d3-MCR6G分别标记衍生待测实际样品和标准品，以d3-MCR6G标记的标准品作为内标，得到的轻/重标记衍生化产物混合，使用磁分散固相萃取技术纯化和富集，经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。2.根据权利要求1所述的检测分析方法，其特征在于，具体包括以下步骤：a.稳定同位素标记衍生：将20-100μL混合标准品或待测实际样品分别置于离心管中，将d0-MCR6G乙腈溶液加入待测实际样品中，并将d3-MCR6G乙腈溶液快速注入标准品溶液中，然后分别加入50μL2-氯-1-甲基碘代吡啶（CMPI）和50μL4-二甲氨基吡啶（DMAP）乙腈溶液，密封两个离心管，超声波震荡30秒，在微波反应器中进行衍生反应，将d0-MCR6G标记的待测实际样品和d3-MCR6G标记的标准品1:1（V/V）混合，摇匀得衍生产物溶液；b.磁分散固相萃取及分析：取4-12mg四氧化三铁修饰的氧化石墨烯（Fe3O4/GO）纳米材料通过超声分散到上述衍生产物溶液中；然后涡旋振荡2-10min后，采用外加磁铁的方式实现混合物的分离；将沉淀物中加入0.2-0.8ml解吸溶液，涡旋振荡6min解吸，然后用外部磁场分离，收集上层清液经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测。3.根据权利要求2所述的检测分析方法，其特征在于，所述2-氯-1-甲基碘代吡啶乙腈溶液的浓度为4–15wt%；所述4-二甲氨基吡啶乙腈溶液的浓度为1–10wt%；所述d0/d3-MCR6G乙腈溶液的摩尔浓度均为1×10-4mol/L；所述微波反应器的功率为750W，所述衍生反应为在30-85℃条件下反应5-35min；所述衍生反应优化的温度为70℃，反应的时间为15min；所述d0-MCR6G乙腈溶液或d3-MCR6G乙腈溶液相比于或待测实际样品或混合标准品过量的倍数为10-300倍。4.根据权利要求2或3所述的检测分析方法，其特征在于，所述d0/d3-3-N-甲基-2-羧基罗丹明6G（d0/d3-MCR6G）采用以下方法制备而成...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱树芸，徐燕秋，赵先恩，汪鑫，白玉，刘虎威，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，北京大学，
类型：发明
国别省市：山东,37