本发明专利技术公开了一种抗内质网膜蛋白复合体亚单位10的单克隆抗体及其应用。本发明专利技术提供了一种单克隆抗体，该单克隆抗体由小鼠杂交瘤细胞株1F12分泌产生，小鼠杂交瘤细胞株1F12在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.15788。本发明专利技术以小鼠杂交瘤细胞株1F12分泌产生的单克隆抗体作为捕获抗体，小鼠杂交瘤细胞株6B9分泌产生的单克隆抗体作为检测抗体，制备了用于检测人血清中EMC10含量的双夹心ELISA试剂盒，已经成功在中国人群和高加索人群血清中检测到了EMC10，且检测线很低，并且这个方法已经非常稳定。
Monoclonal antibodies against endoplasmic reticulum protein complex subunit 10 and their application
The invention discloses a monoclonal antibody against endoplasmic reticulum protein complex subunit 10 and its application. The invention provides a monoclonal antibody, which is produced by the secretion of mouse hybridoma cell line 1F12. The registration number of mouse hybridoma cell line 1F12 is CGMCC No. 15788 in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation Administration Committee. A double sandwich ELISA kit for detecting the content of EMC10 in human serum was prepared by using monoclonal antibody secreted by mouse hybridoma cell line 1F12 as capture antibody and monoclonal antibody secreted by mouse hybridoma cell line 6B9 as detection antibody. The EMC10 is detected, and the detection line is very low, and this method has been very stable.
【技术实现步骤摘要】
抗内质网膜蛋白复合体亚单位10的单克隆抗体及其应用
本专利技术属于生物
，涉及一种抗内质网膜蛋白复合体亚单位10的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
内质网膜蛋白复合体亚单位10(ERmembraneproteincomplexsubunit10,EMC10)最初由王宣春等人从人胰岛素瘤组织的cDNA文库中克隆得到，当时命名为:INM02，已将INM02基因的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列投递到GenBank数据库(登录号为：AY194293)[1]。王宣春所在团队在国际上首次报导了INM02基因的克隆及初步功能研究，文章已发表在《JournalofEndocrinology》杂志上[2]。因为EMC10与任何已知的蛋白或蛋白域均没有明显的同源性，所以EMC10被认为是一个新的蛋白。王宣春所在团队一直从事EMC10的研究工作，经过近10年的努力，已经揭示了EMC10的多种生物学功能。利用课题组建立的ELISA方法，在国际上首次报导了EMC10是一个在人血清中可以被检测得到的分泌蛋白，并且发现在小鼠胰岛β细胞中Emc10(Inm02)基因的表达受葡萄糖的调控，提示它在糖代谢中可能发挥重要的作用[2]。王宣春所在团队已成功建立了Emc10基因剔除的小鼠模型，发现Emc10基因缺失小鼠的3个重要表型，包括：糖耐量改善、抵抗饮食诱导的肥胖以及雄性不育，并初步明确了导致上述表型的病因和分子机制。Emc10基因缺失小鼠胰岛β细胞重量增加，空腹和葡萄糖刺激后的血清胰岛素水平显著升高，能够显著改善普通饮食和高脂饮食小鼠的糖耐量。Emc10基因敲除会导致雄性小鼠完全不育，缺少Emc10基因的精子表现出多方面的缺陷，包括形态学的异常、精子运动力减弱、精子获能受损、顶体反应缺失，因此无法使完整的和去透明带的卵子受精，然而，胞浆内单精注射技术(ICSI)能够挽救EMC10基因敲除导致的雄性不育。从机制上说，EMC10缺失会导致钠/钾-ATP酶失活，引起精子细胞内钠离子水平增加，从而导致精子运动力减弱、形态学异常；此外，EMC10缺失导致HCO3-诱导的cAMP/PKA信号通路激活受损以及精子获能相关蛋白酪氨酸磷酸化水平的下降；王宣春所在团队的研究显示EMC10通过维持精子内Na+、HCO3-的平衡，在雄性生育中发挥着不可或缺的作用。此外，他们还发现EMC10缺失能够阻止小鼠出现饮食诱导的肥胖，改善糖耐量异常、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、高瘦素血症以及高脂血症等肥胖相关的代谢紊乱；而过表达EMC10则促进小鼠肥胖及其代谢紊乱的发生；代谢笼研究显示，通过增加棕色和皮下脂肪的耗氧量，高脂饮食的Emc10基因缺失小鼠的能量消耗显著高于野生小鼠；通过增强PKA/CREB和p38MAPK通路的活性，EMC10缺失既能促进基础状态下又能促进beta肾上腺素能激动剂刺激的脂肪细胞中UCP1和PGC1a基因的表达；上述结果提示EMC10在能量代谢调控和肥胖发生中的发挥重要的作用。除了王宣春所在团队以外，其他研究小组也对EMC10的功能进行了研究，有研究显示EMC10(HSS1)能够抑制胶质瘤细胞株的增殖、迁移、侵袭，同时也能够抑制内皮细胞的新生血管形成，因此EMC10被认为是治疗恶性胶质母细胞瘤潜在的靶点[4,5]。还有研究发现，在一个精神分裂小鼠模型中，升高的Mrita22(人EMC10的小鼠同源基因)能够抑制神经元细胞树突和脊突的发育，通过降低Mrita22的水平能够完全挽救上述小鼠模型海马椎体神经元树突和脊突发育的缺陷，提示EMC10在小鼠神经元树突和脊突形成过程中发挥重要作用[6,7]。最近来自德国的研究者发现，在一个心肌梗塞的小鼠模型，Emc10缺失导致梗塞边缘区的血管新生减少，左心室收缩和舒张功能受损，给予心肌梗塞小鼠补充EMC10能够增加梗塞边缘区的血管新生，改善心梗后受损的左室功能，提示EMC10是一个心肌梗塞后促进组织修复的具有血管新生功能的生长因子[8]。综上所述，EMC10在糖尿病、肥胖、男性生育、心肌梗塞、精神分裂症以及肿瘤等疾病的发生过程中发挥作用，EMC10氨基酸结构N端有一个明显的信号肽序列，来自不同的研究小组均证实EMC10是一个在人和小鼠血清中能够检测得到的分泌肽，因此建立一种方法，检测不同疾病患者血清中EMC10的含量，对于明确EMC10在上述不同疾病中的作用以及EMC10作为某种或某些疾病的血清标志物均具有重要的科学和实际价值。目前除了王宣春所在团队还没有文献报道能够在人血清中检测到EMC10，课题组之前采用兔抗人EMC10的多克隆抗体建立了一个ELISA方法，在人血清中检测到了EMC10的存在(定性)，由于在这个方法中EMC10多克隆抗体既做包被抗体又做检测抗体，因此对血清中EMC10的定量检测并不是十分准确，检测到人血清中EMC10的含量在1-10ng/mL。参考文献：[1]WANGXC,XUSY,WUXY,etal.Geneexpressionprofilinginhumaninsulinomatissue:genesinvolvedintheinsulinsecretionpathwayandcloningofnovelfull-lengthcDNAs[J].EndocrRelatCancer,2004,11(2):295-303.[2]WANGX,GONGW,LIUY,etal.Molecularcloningofanovelsecretedpeptide,INM02,andregulationofitsexpressionbyglucose[J].JEndocrinol,2009,202(3):355-364.[3]ZHOUYC,WUF,ZHANGM,etal.EMC10governsmalefertilityviamaintainingspermionbalance[J].JMolCellBiol,2018(Accepted).[4]JUNES-GILLKS,GALLAHERTK,GLUZMAN-POLTORAKZ,etal.hHSS1:anovelsecretedfactorandsuppressorofgliomagrowthlocatedatchromosome19q13.33[J].JNeurooncol,2011,102(2):197-211.[5]JUNES-GILLKS,LAWRENCECE,WHEELERCJ,etal.HumanHematopoieticSignalpeptide-containingSecreted1(hHSS1)modulatesgenesandpathwaysinglioma:implicationsfortheregulationoftumorigenicityandangiogenesis[J].BMCCancer,2014,14:920.[6]XUB,HSUPK,STARKKL,etal.DerepressionofaneuronalinhibitorduetomiRNAdysregulationinaschizophrenia-relatedmicrodeletion[J].Cell,2013,152(1-2):262-275.[本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.小鼠杂交瘤细胞株1F12，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCC No.15788。
【技术特征摘要】
1.小鼠杂交瘤细胞株1F12，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的登记入册编号为CGMCCNo.15788。2.单克隆抗体，由权利要求1所述的小鼠杂交瘤细胞株1F12分泌产生。3.将权利要求2所述的单克隆抗体用标记物进行标记后形成的标记抗体。4.包被有权利要求2所述的单克隆抗体的固相载体。5.试剂盒，含有权利要求2所述的单克隆抗体或权利要求3所述的标记抗体或权利要求4所述的固相载体。6.权利要求1所述的小鼠杂交瘤细胞株1F12或权利要求2所述的单克隆抗体或权利要求3所述的标记抗体或权利要求4所述的固相载体或权利要求5所述的试剂盒在如下(a1)或(a2)中的应用：(a1)检测或辅助检测人血清中内质网膜蛋白复合体亚单位10；(a2)制备用于检测或辅助检测人血清中内质网膜蛋白复合体亚单位10的产品。7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述内质网膜蛋白复合体亚单位10的氨基酸序列如SEQIDNo.1或SEQIDNo.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨志红，赵伟，
申请(专利权)人：上海伦泽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31
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