一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂的改进的分析方法，提供用于测定双脱水半乳糖醇的纯度并检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质以及鉴别任何此类杂质的方法。所述方法采用高效液相色谱HPLC，尤其采用具有ELSD检测的逆相酰胺色谱柱的HPLC；所述HPLC可以接着串联质谱。所述方法可另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法相关申请的交叉引用本申请案主张于2015年11月25日由Q.Xu提交的题为“双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析和分辨方法(MethodsforAnalysisandResolutionofPreparationsofDianhydrogalactitolandDerivativesorAnalogsThereof)”的第62/260,019号美国临时专利的权益，其内容通过全文引用并入本文中。
本专利技术涉及改进的双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂的分析方法，尤其涉及高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography，HPLC)。
技术介绍
双脱水半乳糖醇(1,2:5,6双脱水半乳糖醇或DAG)是多种己糖醇或己糖醇衍生物中的一个，具有显著药理学活性，包含化学治疗活性。特定来说，已提议双脱水半乳糖醇用于化学疗法，如在授予纳尔逊(Nielsen)等人的第7,157,079号美国专利中，所述专利通过引用并入本文中。双脱水半乳糖醇具有抗多种肿瘤的活性。然而，双脱水半乳糖醇要想成功地作为治疗剂使用，它必须要有极高的纯度且要除去杂质。杂质的存在会引起不合期望的副作用。多年前出现一个实例，当一批氨基酸色氨酸，蛋白质的正常组分，中存在杂质时，导致嗜酸粒细胞性肌痛综合症显著爆发，引起大量永久性残疾病例和至少37例死亡。如果治疗剂，如双脱水半乳糖醇，要用于具有受损免疫系统或肝或肾功能障碍的患者或用于老年患者时，这一点尤其重要。此类患者由于其对污染物的敏感，可能经历不合期望的副作用的发生率更高。在双脱水半乳糖醇制剂中发现的一种杂质是半乳糖醇。双脱水半乳糖醇制剂中还存在其它杂质，视其制备方法而定。因此，需要改进的检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物的分析方法，以提供当双脱水半乳糖醇出于治疗性目的给药时不大可能引起副作用的更高纯度的制剂。
技术实现思路
本文中描述一种改进的测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的纯度且检测符合此等需要的双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂中的杂质和降解产物的分析方法。特定来说，分析方法适用于测定双脱水半乳糖醇的纯度且检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物。一般而言，此分析方法利用高效液相色谱法(HPLC)，尤其具有蒸发光散射检测(evaporativelightscatteringdetection，ELSD)的HPLC。特定来说，根据本专利技术的分析方法能够检测双脱水半乳糖醇制剂中的杂质半乳糖醇和二溴半乳糖醇。本专利技术的一个方面是用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法，包括以下步骤：(1)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合(ethylenebridgedhybrid，BEH)技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以将双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及(2)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。通常，所述方法检测并定量以下各项中的至少一个：(1)半乳糖醇；(2)二溴半乳糖醇；(3)除半乳糖醇以外的杂质；以及(4)双脱水半乳糖醇的降解产物。通常，流速为约0.72毫升/分钟到约0.88毫升/分钟。优选地，流速为约0.80毫升/分钟。通常，洗脱流程为(1)0.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(2)3.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(3)20.00分钟，75％的100％乙腈，25％的100％水；(4)25.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(5)30.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(6)30.10分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水；以及(7)40.00分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水。通常，注射体积为约15μL到约35μL。优选地，注射体积为约25μL。通常，柱温为约28℃到约32℃。优选地，柱温为约30℃。通常，运行时间为约40分钟。在一个替代方案中，注射器温度为约5℃。在另一个替代方案中，注射器温度为约20℃到约22℃。所述方法可包含用100％乙腈清洗进样针。在根据本专利技术的方法中，通常借助蒸发光散射(ELSD)检测。通常，蒸发光散射检测包括挥发性溶剂的柱后添加，以增进所存在的任何流动相的水性级分的蒸发。挥发性溶剂可选自由以下组成的群组：甲醇、乙醇、异丙醇以及乙腈。在一个优选替代方案中，ELSD检测条件为：温度为约36℃到约44℃，气体压力为约2.0巴(bar)到约3.0巴，且增益为7。在一个更优选的替代方案中，ELSD检测条件为：温度为约38℃到约42℃，气体压力为约2.25巴到约2.75巴，且增益为7。在一个进一步更优选的替代方案中，ELSD条件为：温度为约40℃，气体压力为约2.5巴，且增益为7。蒸发光散射检测可以与电喷雾LC/MS兼容。当蒸发光散射检测与电喷雾LC/MS兼容时，可将电喷雾串联质谱仪在线安装并连接于具有ELSD的HPLC系统。当在线安装并连接电喷雾串联质谱仪时，能够采集到提供可能存在于双脱水半乳糖醇制剂中的杂质和降解产物中的每一个的化学信息的串联质谱数据。与HPLC串联的质谱能够针对观测到的杂质和降解产物中的每一个提供分子离子信息和具有与分子离子信息一致的分子量的可能化学结构。在此替代方案中，至少一种杂质或降解产物通过以下来鉴别：通过柱色谱分离，接着进行至少一个纯化程序，得到固体未知样品。固体未知样品可通过选自由以下组成的群组的至少一种标准分析程序来鉴别表征：核磁共振(nuclearmagneticresonance，NMR)、质谱(massspectroscopy，MS)、傅里叶变换红外光谱法(Fouriertransforminfraredspectroscopy，FT-IR)、元素分析、通过HPLC测定纯度以及通过卡尔费舍尔(KarlFischer)滴定方法测定含水量。在如上所述方法中，方法可另外包括进行双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰的制备型HPLC采集的步骤。双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是杂质。或者，双脱水半乳糖醇制剂中存在的至少一种特定物质峰可以是降解产物。附图说明参考以下描述、所附权利要求书和附图将能更好地理解本专利技术的这些和其它特性、方面以及优点，在附图中：图1是展示空白组、新鲜片剂样品、标准溶液、以及模拟样品溶液的重叠色谱图的图(DAG是双脱水半乳糖醇且DBD是二溴半乳糖醇)。图2是展示用来测定半乳糖醇的检测限(LOD)的0.004mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.05％)的色谱分析结果的图。图3是展示用来测定半乳糖醇的定量限(LOQ)的0.008mg/mL半乳糖醇溶液(标称浓度的0.1％)的色谱分析结果的图。图4是展示使用半乳糖醇的线性测试的结果的图。图5是展示样品溶液中的杂质的图。具体实施方式本专利技术涉及用于测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的纯度以及测定双脱水半乳糖醇和其衍生物或类似物的制剂中存在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法，其包括以下步骤：(a)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合BEH技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以使双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及(b)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.25 US 62/260,0191.一种用于分析双脱水半乳糖醇制剂中存在的杂质的存在和量的分析方法，其包括以下步骤：(a)通过将双脱水半乳糖醇制剂进行高效液相色谱来分析所述制剂，使用采用呈亲水性相互作用模式的酰胺化学物质和乙烯桥连混合BEH技术的逆相酰胺色谱柱，以第一流动相是100％乙腈且第二流动相是100％水的流动相梯度洗脱，以使双脱水半乳糖醇与半乳糖醇和制剂的其它污染物分离；以及(b)测定通过高效液相色谱分辨的代表除双脱水半乳糖醇本身以外的化合物的一或多个峰的相对浓度。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法检测并定量以下各项中的至少一个：(1)半乳糖醇；(2)二溴半乳糖醇；(3)除半乳糖醇以外的杂质；以及(4)双脱水半乳糖醇的降解产物。3.根据权利要求1所述的方法，其中流速为约0.72毫升/分钟到约0.88毫升/分钟。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述流速为约0.80毫升/分钟。5.根据权利要求1所述的方法，其中洗脱流程为(1)0.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(2)3.00分钟，90％的100％乙腈；10％的100％水；(3)20.00分钟，75％的100％乙腈，25％的100％水；(4)25.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(5)30.00分钟，50％的100％乙腈，50％的100％水；(6)30.10分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水；以及(7)40.00分钟，90％的100％乙腈，10％的100％水。6.根据权利要求1所述的方法，其中注射体积为约15μL到约35μL。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述注射体积为约25μL。8.根据权利要求1所述的方法，其中柱温为约28℃到约32℃。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述柱温为约30℃。10.根据权利要求1所述的方法，其中运行时间为约40分钟。11.根据权利要求1所述的方法，其中注射器温度为约5℃。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述注射器温度为约20℃到约22℃。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法包含用100％乙腈清洗进样针...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐强，
申请(专利权)人：德玛医药BC有限公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA
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