一种溶磷微生物菌剂的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种溶磷微生物菌剂的制备方法及其应用，属于微生物技术领域。溶磷微生物菌剂的制备方法包括：①液态溶磷微生物菌液的制备；②固态溶磷微生物菌剂的制备。固态溶磷微生物菌剂的应用包括：①建植时，采用撒施的方式施用固态溶磷微生物菌剂，每亩施用10‑20kg；②播种时，将固态溶磷微生物菌剂与种子拌种，每1kg黑麦草种子拌入5‑8kg固态溶磷微生物菌剂，进行播种。本发明专利技术溶磷微生物，即棘孢曲霉真菌与黑麦草具有亲和性，兼具分泌IAA、铁载体、ACC脱氨酶和有机酸的能力，可在溶磷的同时有效促进植物的生长，可以改善土壤肥力状况，可大幅度提高土壤中速效磷的含量；制备方便，施用方法简单，可采用撒施或拌种等方法进行接种；成本低廉，操作简便。

Preparation and application of a phosphate solubilizing microbial inoculum

The invention discloses a preparation method of phosphorus-soluble microbial agent and its application, belonging to the microbial technical field. The preparation methods of phosphorus-solubilizing microbial agents include: (1) preparation of liquid phosphorus-solubilizing microbial liquid; and (2) preparation of solid phosphorus-solubilizing microbial agents. The application of solid-state phosphorus-solubilizing microbial agents includes: 1. applying solid-state phosphorus-solubilizing microbial agents by spraying, applying 10-20 kg per mu; 2. mixing seeds with solid-state phosphorus-solubilizing microbial agents, mixing 5-8 kg solid-state phosphorus-solubilizing microbial agents per kg ryegrass seeds, and sowing. The phosphorus-solubilizing microorganism of the invention, namely, the Echinospora Aspergillus fungi, has affinity with ryegrass, and has the ability of secreting IAA, iron carrier, ACC deaminase and organic acid. It can effectively promote the growth of plants while dissolving phosphorus, improve the soil fertility condition, and greatly increase the content of available phosphorus in the soil. The method is simple, and can be inoculated by spying or seed dressing. The method is simple and inexpensive.

【技术实现步骤摘要】
一种溶磷微生物菌剂的制备方法及其应用
本专利技术属于微生物
，尤其涉及一种溶磷微生物菌剂的制备方法及其应用。
技术介绍
磷是形成细胞核蛋白、卵磷脂等不可缺少的元素。磷元素能加速细胞分裂，促使根系和地上部加快生长，促进花芽分化，提早成熟，提高果实品质。我国拥有各类可利用的盐碱地资源5.5亿亩，重度盐碱地3370万亩，是最大的后备耕地资源。氮、磷等化学肥料中凡未被植物吸收利用和未被根层土壤吸附固定的养分都会在根层以下积累或转入地下水，成为潜在的环境污染物。盐碱地PH值高，碳酸钙含量高，土壤中的磷易形成难溶性磷酸盐，从而降低了磷钙及锌锰铁铜等微量元素的有效性。采用化学方法降低难溶磷含量，会对环境造成二次破坏。农民往往使用化学肥料来增加土壤肥力，但却容易造成土壤有机质不足、土壤板结。目前通常采用施用有机肥、农家肥等来优化土壤团粒结构，同时注重补充微量元素，起到改良土壤盐碱化的效果。利用微生物来改善土壤的肥力，提高土壤的营养成分对农耕及环境有较大的好处。棘孢曲霉真菌是一种轻度嗜盐耐盐，对盐有较强的耐性，同时具有良好的促生性，促进植物的生长，增加植物对胁迫的抗性。实验证明，棘孢曲霉真菌能够溶解土壤中的难溶磷，进而促进植物对磷的吸收和利用。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种溶磷微生物菌剂的制备方法及其应用，可以高效地将土壤中无效磷溶解成可供黑麦草直接吸收利用的有效磷，在菌肥的研究方面具有广阔的市场前景和利用价值。本专利技术的技术方案如下：1、溶磷微生物菌剂溶磷微生物菌剂是指目标微生物棘孢曲霉真菌（Aspergillusaculeatus）经过工业化生产扩繁后，利用多孔的物质作为吸附剂（如草炭、蛭石），吸附菌体的发酵液加工制成的固态活菌制剂；固态溶磷微生物菌剂用于拌种或蘸根，具有直接或间接改良土壤、恢复地力、维持根际微生物区系平衡和降解有毒害物质的作用。2、溶磷微生物菌剂的制备方法①液态溶磷菌液的制备：将棘孢曲霉真菌的菌液，菌液中菌数在1×109～9×109CFU/mL范围内，以2～4%的接种量接入100mL马丁氏（Martin）液体培养基，30℃、170r/min震荡培养36～48h，即制得液态溶磷菌液；②固态溶磷微生物菌剂的制备：将20mL的上述液态溶磷菌液加入100g沙子和泥炭混合而成的固体介质中，v/v=2：1，调节pH至6，30℃培养3天，即制得固态溶磷微生物菌剂。3、溶磷微生物菌剂的应用：①建植时，采用撒施的方式施用固态溶磷微生物菌剂，每亩施用该菌剂10-20kg；②播种时，将固态溶磷微生物菌剂与种子拌种，每1kg黑麦草种子拌入5-8kg该菌剂，进行播种。4、溶磷微生物菌剂的工作机理。本专利技术的目标微生物棘孢曲霉真菌与黑麦草具有亲和性，可在黑麦草根部长期定居生活，分泌生长素、铁载体、ACC脱氨酶和有机酸的能力，可在溶磷的同时有效促进植物的生长，发挥促进黑麦草生长的作用；同时可以改善土壤肥力状况，可大幅度提高土壤中速效磷的含量。本专利技术具有以下优点和积极效果：①本专利技术的溶磷微生物菌剂由棘孢曲霉真菌制成，该真菌与黑麦草具有亲和性，可在黑麦草根部长期定居生活，发挥促进黑麦草生长的作用；②本专利技术的溶磷微生物菌剂兼具分泌IAA、铁载体、ACC脱氨酶和有机酸的能力，可在溶磷的同时有效促进植物的生长；③本专利技术的溶磷微生物菌剂可以改善土壤肥力状况，可大幅度提高土壤中速效磷的含量；④本专利技术的溶磷微生物菌剂制备方便，施用方法简单，可采用撒施或拌种等方法进行接种；⑤成本低廉，操作简便。附图说明图1是棘孢曲霉真菌在选择培养基上形成的溶磷圈；图2-1是棘孢曲霉真菌在培养液中可溶性磷的含量；图2-2是棘孢曲霉真菌在培养液中可溶性磷的pH值；图3-1是施用溶磷微生物菌剂后黑麦草草坪质量和生长速率；图3-2是施用溶磷微生物菌剂后黑麦草荧光动力学曲线。具体实施方式：下面结合附图和实施例详细说明：1、实施例1：溶磷微生物菌剂的溶磷能力采用点种法，将溶磷微生物棘孢曲霉真菌接种到含有0.5%难溶无机磷的固体培养基中，30℃倒置培养7天观察培养基菌落的变化。结果如图1所示，菌落周围出现了白色的溶菌圈，说明溶磷微生物棘孢曲霉真菌对难溶磷具有溶解的作用。将溶磷微生物棘孢曲霉真菌的菌液（菌液中菌数在1×109～9×109CFU/mL范围内），以3％的接种量接入磷酸三钙液体培养基，三角瓶培养，采用钼锑抗比色法测定发酵液中可溶性磷的浓度，结果如图2-1、图2-2所示，在加入难溶性磷酸三钙后的液体培养基中，接入真菌的培养基pH值下降，可溶性磷的含量在培养6天的时候相比于未接菌的可溶性磷含量要高出12倍，可见伴随着培养基pH值的下降真菌确实将难溶性磷酸三钙溶解为可溶性的磷，证明了真菌的溶磷特性。实施例2：溶磷微生物菌剂分泌有机酸的能力溶磷微生物棘孢曲霉真菌溶解无机磷的原理为分泌有机酸，从而达到溶解土壤中难溶态无机磷为可溶态有效磷供植物吸收利用；利用磷酸三钙液体培养基，通过高效液相色谱法测定发酵液中有机酸的种类和浓度，结果如表1所示，在加入真菌的磷酸三钙液体培养基中，随着培养时间的延长，有机酸的越来越高，主要的有机酸种类包括：酒石酸、柠檬酸和氨基乙酸，因此证明了真菌溶解磷酸三钙的机制是通过分泌有机酸来实现的。表1棘孢曲霉真菌培养液中培养3天和6天后有机酸的含量和种类例3：溶磷微生物菌剂的制备以及用于黑麦草盆栽实验将棘孢曲霉真菌的菌液（菌液中菌数在1×109～9×109CFU/mL范围内），以3%的接种量接入100mL马丁氏（Martin）液体培养基，30℃、170r/min震荡培养48h，即制得液态溶磷菌液；将20mL上述液态溶磷菌液加入100g沙子和泥炭混合而成的固体介质中（v/v=2：1），调节pH至6，30℃培养3天，制成固态溶磷微生物菌剂。黑麦草盆栽实验设处理组和对照组，处理组施上述固体微生物菌剂5g/盆（每盆装500g缺磷，且含有难溶磷的土壤），对照组施经121℃，60min灭活处理的固态溶磷菌剂；选取籽粒饱满的黑麦草种子，用2%次氯酸钠消毒3min并去除干瘪种子，再用无菌水冲洗5次进行播种；日常管理水肥，于60天后取样，测定黑麦草的草坪质量和生长速率，叶绿素荧光动力学曲线，土壤中可溶性磷的含量，结果如图3-1和图3-2所示：外源施加溶磷菌剂后，黑麦草的生长速率高于未施用的黑麦草，草坪质量也好于未施用菌剂的黑麦草，叶绿素荧光动力学曲线也明显增加。实施例4：黑麦草大田栽培实验实验在试验田水泥池（长×宽×高=2m×2m×0.5m）中进行；实验设处理组和对照组，处理组施上述固体微生物菌剂35g，对照组施相同量的经121℃，60min灭活处理的固态溶磷微生物菌剂，培养基质为缺磷，且含有难溶磷的土壤；黑麦草种子侵泡消毒后条播，保证种子播种深度不深于5mm；播种后，充分浇水并覆盖无纺布以保持湿度，定期进行浇水，两个月后进行相关指标测定；结果显示，施用溶磷微生物菌剂显著提高了黑麦草的地上和地下部生物量，提高黑麦草叶片中磷含量，并提高黑麦草饲用品质。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种溶磷微生物菌剂的制备方法，其特征在于：①液态溶磷菌液的制备：将棘孢曲霉真菌的菌液，菌液中菌数在1×109～9×109CFU/mL范围内，以2～4%的接种量接入100mL马丁氏液体培养基，30℃、170r/min震荡培养36～48h，即制得液态溶磷菌液；②固态溶磷微生物菌剂的制备：将20mL的上述液态溶磷菌液加入100g沙子和泥炭混合而成的固体介质中，v/v=2：1，调节pH至6，30℃培养3天，即制得固态溶磷微生物菌剂。

【技术特征摘要】
1.一种溶磷微生物菌剂的制备方法，其特征在于：①液态溶磷菌液的制备：将棘孢曲霉真菌的菌液，菌液中菌数在1×109～9×109CFU/mL范围内，以2～4%的接种量接入100mL马丁氏液体培养基，30℃、170r/min震荡培养36～48h，即制得液态溶磷菌液；②固态溶磷微生物菌剂的制备：将20mL的上述液态溶磷菌液加入100g沙...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅金民，李晓宁，谢燕，范树高，王伟，王广阳，张寅坤，李佳南，孙志超，王誉璠，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：山东,37