一株昆虫病原真菌及其应用制造技术

一株昆虫病原真菌及其应用，本发明专利技术涉及一株昆虫病原真菌及其应用。本发明专利技术提供了一株昆虫病原真菌及其应用。本发明专利技术一株昆虫病原真菌为球孢白僵菌HUBB.No:08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年6月11日，保藏编号是CGMCC No.15866。本发明专利技术应用在马铃薯病害防治上。本发明专利技术菌株具有较强的抑制马铃薯早疫病菌菌丝生长的能力，随着体积浓度的增加而增大，持效期长，抑菌效果显著，抑菌效率可达81.73％，从而说明菌株HUBB.No:08对马铃薯早疫病有很好的拮抗作用。本发明专利技术应用于环境微生物技术领域。

An entomopathogenic fungus and its application

The invention relates to an entomopathogenic fungus and its application, and relates to an entomopathogenic fungus and its application. The invention provides an entomopathogenic fungus and its application. The invention relates to an insect pathogenic fungus, Beauveria bassiana HUBB. No: 08, which is preserved in the General Microbial Center of China Microbial Species Conservation Management Committee. The preservation address is No. 3 of No. 1 Hospital of Beichen West Road, Chaoyang District, Beijing, and the preservation date is June 11, 2018. The preservation number is CGMCC No. 15866. The invention is applied to potato disease prevention and control. The strain of the invention has a strong ability to inhibit the growth of the hypha of Potato Early Phytophthora infestans, increases with the increase of the volume concentration, has a long duration, has a remarkable bacteriostatic effect, and the bacteriostatic efficiency can reach 81.73%. Thus, the strain HUBB.No:08 has a good antagonistic effect on Potato Early Phytophthora infestans. The invention is applied to the field of environmental microbiology technology.

【技术实现步骤摘要】
一株昆虫病原真菌及其应用
本专利技术涉及一株昆虫病原真菌及其应用。
技术介绍
马铃薯早疫病(PotatoEarlyBlight)是一种由茄链格孢菌(Alternariasolani(Ell.etMart.)JonesetGrout)引起的对马铃薯危害比较严重的病害，在世界范围内普遍发生，在发展中国家被认为是仅次于马铃薯晚疫病的第二大马铃薯病害。早疫病造成马铃薯大面积减产，带来了很严重的经济损失。该病在我国马铃薯产区均有不同程度发生，且近年来呈上升趋势，局部地区的危害程度已经不亚于马铃薯晚疫病。马铃薯早疫病的病原菌不仅危害马铃薯，也侵染番茄、茄子、辣椒、甜菜以及芥属等多种作物引起早疫病。马铃薯早疫病在世界马铃薯种植区广泛发生，是世界范围内的一种重要马铃薯病害。近年来早疫病在许多马铃薯产区频繁发生并有上升趋势，可造成马铃薯减产，病害严重年份减产可达50％以上。
技术实现思路
本专利技术提供了一株昆虫病原真菌及其应用。本专利技术一株昆虫病原真菌为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年6月11日，保藏编号是CGMCCNo.15866。本专利技术一株昆虫病原真菌的应用是指在马铃薯病害防治上的应用。本专利技术是按照以下方式获取球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08的：利用黄粉虫诱集法从哈尔滨市的土样中分离出昆虫病原真菌初生型真菌：用分离得到的昆虫病原真菌感染黄粉虫(5龄幼虫)，虫体死亡后，用体积百分含量为75％的酒精浸泡5s后，无菌条件下从虫体上刮取少量白色孢子于PDA固体培养基上，至于28℃生化培养箱中培养2-3天，挑取白色菌落为出生型菌落并接种于改良马丁氏培养液中(过滤后马铃薯蒸煮液1000mL、葡萄糖20g、KH2PO43g、MgSO4·7H2O1.5g、维生素B18mg)，于28℃下180r/min振荡培养24h后，按体积比1％转入发酵培养液中振荡培养发酵36-48h后，离心管中冷冻离心，取上清液，以获得无菌发酵液。分离筛选得到的昆虫病原真菌在营养培养基上光学显微镜下观察菌落色泽为乳白色。菌落质地为粉状，菌落薄、中间褶皱、呈放射状生长。菌落底部无色或淡黄色。菌株产孢细胞轮生或单生，分生孢子梗反复向顶部轴式产孢，结果形成膝状弯曲的具有小齿突的产孢轴。分生孢子梗光滑呈穗状，分生孢子透明，壁薄且为球形，表面光滑。对分离筛选得到的昆虫病原真菌进行分子鉴定，按以下步骤进行，提取菌株的总DNA，根据真菌通用引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。然后利用胶回收试剂盒回收纯化PCR产物，之后进行克隆、转化、测序。测序结果与Genbank中16SrDNA序列进行同源性对比，HUBB.No:08菌株同源性与白僵菌属的同源性最高，99％以上。通过结合菌体形态特征、分子鉴定结果确定HUBB.No:08菌株为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，最终命名为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08。球孢白僵菌(B.bassiana)是国内外广泛用于害虫生物防治的杀虫真菌之一，能有效地控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，本专利技术平板抑菌实验表明，在固体培养条件下，本专利技术球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08还具有较强的抑制马铃薯早疫病菌菌丝生长的能力，随着体积浓度的增加而增大，持效期长，抑菌效果显著，抑菌效率可达81.73％，从而说明菌株HUBB.No:08对马铃薯早疫病有很好的拮抗作用。本专利技术利用生物防治的手段对马铃薯早疫病进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，无农药残留，不产生抗药性。附图说明图1为球孢白僵菌HUBB.No:08无菌体发酵液在改良马丁氏培养基上对马铃薯早疫病菌产生抑菌带3天时的照片；图2为球孢白僵菌HUBB.No:08无菌体发酵液在改良马丁氏培养基上对马铃薯早疫病菌产生抑菌带7天时的照片。具体实施方式具体实施方式一：本实施方式一株昆虫病原真菌为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年6月11日，保藏编号是CGMCCNo.15866。本实施方式是按照以下方式获取球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08的：利用黄粉虫诱集法从哈尔滨市的土样中分离出昆虫病原真菌初生型真菌：用分离得到的昆虫病原真菌感染黄粉虫(5龄幼虫)，虫体死亡后，用体积百分含量为75％的酒精浸泡5s后，无菌条件下从虫体上刮取少量白色孢子于PDA固体培养基上，至于28℃生化培养箱中培养2-3天，挑取白色菌落为出生型菌落并接种于改良马丁氏培养液中(过滤后马铃薯蒸煮液1000mL、葡萄糖20g、KH2PO43g、MgSO4·7H2O1.5g、维生素B18mg)，于28℃下180r/min振荡培养24h后，按体积比1％转入发酵培养液中振荡培养发酵36-48h后，离心管中冷冻离心，取上清液，以获得无菌发酵液。分离筛选得到的昆虫病原真菌在营养培养基上光学显微镜下观察菌落色泽为乳白色。菌落质地为粉状，菌落薄、中间褶皱、呈放射状生长。菌落底部无色或淡黄色。菌株产孢细胞轮生或单生，分生孢子梗反复向顶部轴式产孢，结果形成膝状弯曲的具有小齿突的产孢轴。分生孢子梗光滑呈穗状，分生孢子透明，壁薄且为球形，表面光滑。对分离筛选得到的昆虫病原真菌进行分子鉴定，按以下步骤进行，提取菌株的总DNA，根据真菌通用引物，以基因组DNA为模板进行PCR扩增。然后利用胶回收试剂盒回收纯化PCR产物，之后进行克隆、转化、测序。测序结果与Genbank中16SrDNA序列进行同源性对比，HUBB.No:08菌株同源性与白僵菌属的同源性最高，99％以上。通过结合菌体形态特征、分子鉴定结果确定HUBB.No:08菌株为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)，最终命名为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08。球孢白僵菌(B.bassiana)是国内外广泛用于害虫生物防治的杀虫真菌之一，能有效地控制虫口数量，同时不伤害其他天敌昆虫和有益生物，本实施方式平板抑菌实验表明，在固体培养条件下，球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08还具有较强的抑制马铃薯早疫病菌菌丝生长的能力，随着体积浓度的增加而增大，持效期长，抑菌效果显著，抑菌效率可达81.73％，从而说明菌株HUBB.No:08对马铃薯早疫病有很好的拮抗作用。具体实施方式二：本实施方式一株昆虫病原真菌的应用是指在马铃薯病害防治上的应用。本实施方式利用生物防治的手段对马铃薯早疫病进行有效防治，相比其他传统的的化学防治更加环保，无农药残留，不产生抗药性。具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式二不同的是：昆虫病原真菌应用在抑制马铃薯早疫病菌上。其他与具体实施方式二相同。具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式二或三不同的是：采用具有抑制马铃薯早疫病的球孢白僵菌的菌液防治马铃薯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株昆虫病原真菌，其特征在于它为球孢白僵菌(Beauveria bassiana)HUBB.No:08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年6月11日，保藏编号是CGMCC No.15866。

【技术特征摘要】
1.一株昆虫病原真菌，其特征在于它为球孢白僵菌(Beauveriabassiana)HUBB.No:08，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址是北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期是2018年6月11日，保藏编号是CGMCCNo.15866。2.如权利要求1所述的一株昆虫病原真菌的应用，其特征在于昆虫病原真菌在马铃薯病害防治上的应用。3.根据权利要求2所述的一株昆虫病原真菌的应用，其特征在于昆虫病原真菌应用在抑制马铃薯早疫病菌上。4.根据权利要求2所述的一株昆虫病原真菌的应用，其特征在于采用具有抑制马铃薯早疫病的球孢白僵菌的菌液防治马铃...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁俊男，于少鹏，胡宝忠，来永才，
申请(专利权)人：哈尔滨学院，
类型：发明
国别省市：黑龙江,23