一种意大利牛舌草总黄酮的纯化方法技术

本发明专利技术提供了一种意大利牛舌草总黄酮纯化方法，采用聚酰胺柱层析法对意大利牛舌草总黄酮进行纯化富集，所得纯化物中总黄酮含量可达75％，显著提高了意大利牛舌草总黄酮有效部位中总黄酮含量；而且，本发明专利技术从意大利牛舌草总黄酮有效部位中分离得到1‑咖啡酸、2‑芦丁、3‑山奈酚‑3‑O‑芸香糖苷、4‑水仙苷和5‑迷迭香酸五种有效成分，说明采用本发明专利技术提供的方法在对意大利牛舌草总黄酮进行纯化富集的同时，还保留了其有效成分，为进一步开展意大利牛舌草总黄酮有效部位的开发研究奠定了试验基础。

A purification method of total flavonoids from Italy's tongue grass

The invention provides a method for purifying total flavonoids of Italian hyacinth grass. The polyamide column chromatography method is used to purify and enrich total flavonoids of Italian hyacinth grass. The total flavonoids content in the purified product can reach 75%, and the total flavonoids content in the effective part of total flavonoids of Italian hyacinth grass can be significantly increased. Five active ingredients, caffeic acid, 2 rutin, 3 kaempferol 3 O rutin, 4 Narcissus glycoside and 5 rosmarinic acid, were isolated from the effective fraction of total flavonoids of Herba Glossae. The method provided by the present invention not only purifies and enriches the total flavonoids of Herba Glossae Italiana, but also retains their active ingredients for entering. The experimental basis for the development of effective fraction of total flavonoids from Italy has been developed.

【技术实现步骤摘要】
一种意大利牛舌草总黄酮的纯化方法
本专利技术涉及分离纯化
，尤其涉及一种意大利牛舌草总黄酮的纯化方法。
技术介绍
黄酮类化合物是植物次生代谢产物，因其结构类型复杂多样的特点而具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤以及增强免疫能力等多种药理作用。且大量文献资料表明，口服黄酮类化合物对心肌缺血再灌注损伤具有一定的治疗作用。意大利牛舌草(AnchusaitalicaRetz.)为紫草科(Boraginaceae)草木植物，分布在地中海和热带地区，维文名为高孜万，是一种重要的维吾尔民族药用植物，在民间具有悠久的历史，是维吾尔医常用的心脑血管疾病首选药材之一。维吾尔医学理论认为意大利牛舌草具有生湿生热、调节异常黑胆质、生湿补脑、祛寒补心、爽心悦志、润燥消炎、止咳平喘等功效，主要用于干寒性或黑胆质性疾病，如平性脑虚、心悸、抑郁症、干性脑膜炎、高血压、肺炎及结核疾病、寒性咳嗽、感冒、气喘等疾病的治疗。在维吾尔医的许多经典复方制剂中(如艾菲提蒙汤等)，牛舌草均是必不可少的主药之一。目前对意大利牛舌草总黄酮纯化工艺的研究较少，中国专利CN101584752B公开了一种牛舌草总黄酮提取纯化工艺，该专利技术是以大孔吸附树脂作为纯化介质进行黄酮类物质的富集，得到的纯化物中牛舌草总黄酮含量>55％，总黄酮产物含量有待提高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种意大利牛舌草总黄酮纯化方法，提高纯化物中意大利牛舌草总黄酮的含量。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种意大利牛舌草总黄酮纯化方法，包括以下步骤：将意大利牛舌草总黄酮粗提液上样于聚酰胺柱，然后进行静态吸附，得到吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱；对所述吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱依次进行除杂和洗脱，得到牛舌草总黄酮纯化物。优选的，所述牛舌草总黄酮粗提液的固形物质量浓度为5～30mg·mL﹣1。优选的，所述牛舌草总黄酮粗提液的制备方法，包括以下步骤：采用体积分数为70～80％的乙醇溶液对意大利牛舌草进行提取，得到牛舌草总黄酮粗提液。优选的，所述上样的速度为1～3BV/h，上样量为1BV。。优选的，所述静态吸附的时间为0.5～2h。优选的，所述除杂所采用的试剂为蒸馏水。优选的，所述蒸馏水的体积为0.8～1.2BV。优选的，所述洗脱所采用的洗脱剂为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数为10～70％。优选的，所述洗脱剂的体积为1～22BV；所述洗脱的速度为2～5BV/h。优选的，所述洗脱后还包括：将得到的洗脱液依次进行减压浓缩和干燥。本专利技术提供了一种意大利牛舌草总黄酮纯化方法，基于聚酰胺色谱柱的吸附特性及预实验结果确定采用聚酰胺柱层析法对意大利牛舌草总黄酮进行纯化富集，所得纯化物中总黄酮含量>70％，为意大利牛舌草总黄酮有效部位的开发研究奠定试验基础；本专利技术的纯化工艺简便、合理、可行；本专利技术从意大利牛舌草总黄酮有效部位中分离得到1-咖啡酸、2-芦丁、3-山奈酚-3-O-芸香糖苷4-水仙苷和5-迷迭香酸五种有效成分，说明采用本专利技术提供的方法在对意大利牛舌草总黄酮进行纯化富集的同时，还保留了其有效成分，为进一步阐明意大利牛舌草总黄酮有效部位的开发研究奠定了试验基础。附图说明图1为本专利技术中芦丁和意大利牛舌草总黄酮有效部位光谱扫描图(A：意大利牛舌草总黄酮有效部位，B：芦丁)；图2为本专利技术实施例1中芦丁对照品和意大利牛舌草总黄酮有效部位待测液的高效液相色谱图(A混合对照品溶液；B待测液)。具体实施方式本专利技术提供了一种意大利牛舌草总黄酮纯化方法，包括以下步骤：将意大利牛舌草总黄酮粗提液上样于聚酰胺柱，然后进行静态吸附，得到吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱；对所述吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱依次进行除杂和洗脱，得到牛舌草总黄酮纯化物。本专利技术将牛舌草总黄酮粗提液上样于聚酰胺柱，然后进行静态吸附，得到吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱。在本专利技术中，所述牛舌草总黄酮粗提液的固形物质量浓度优选为5～30mg·mL﹣1，更优选为20mg·mL﹣1。在本专利技术中，所述牛舌草总黄酮粗提液中总黄酮的质量浓度优选为1.0～6.5mg·mL﹣1，更优选为4.3mg·mL﹣1。在本专利技术中，所述牛舌草总黄酮粗提液的制备方法，优选包括以下步骤：采用体积分数为70～80％的乙醇溶液对意大利牛舌草进行提取，得到牛舌草总黄酮粗提液。本专利技术具体是取意大利牛舌草干燥地上部分，去除沙石等杂质，粉碎过20目筛，将得到的牛舌草粉末加入到体积分数为70～80％的乙醇溶液中，在料液比为1：15～25、温度为90～100℃条件下进行回流提取1.5～2.5h，并将提取产物依次进行过滤和减压浓缩，过40目筛，得到意大利牛舌草总黄酮粗提物粉末；将所述意大利牛舌草总黄酮粗提物粉末与蒸馏水混合，并超声溶解，于5000r/min离心10min，取上清液，得到牛舌草总黄酮粗提物溶液。本专利技术优选采用湿法装柱制备聚酰胺柱。在进行所述湿法装柱前，本专利技术优选将聚酰胺采用体积分数为95％的乙醇浸泡24h。本专利技术对于所述湿法装柱的具体操作步骤没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的湿法装柱的技术方案即可。完成所述湿法装柱后，本专利技术优选将所得聚酰胺柱用体积分数为95％的乙醇洗脱至所得洗脱液与蒸馏水的混合液(体积比为1:5)不呈白色浑浊，然后将洗脱后的聚酰胺柱用蒸馏水洗涤至无醇味，先用质量浓度为5％的NaOH溶液浸泡4h，水洗至中性，再用质量浓度为3％的HCl溶液浸泡4h，水洗至中性；最后，用5BV蒸馏水洗，抽滤至干，得到聚酰胺柱。在本专利技术中，所述上样的速度优选为1～3BV/h，更优选为2.0BV/h；所述静态吸附的时间优选为0.5～2h，更优选为0.5h，得到吸附有牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱。得到吸附有牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱后，本专利技术对所述吸附有牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱依次进行除杂和洗脱，得到牛舌草总黄酮纯化物。在本专利技术中，所述除杂所采用的试剂优选为蒸馏水；所述蒸馏水的体积优选为0.8～1.2BV，更优选为1.0BV。在本专利技术中，所述洗脱所采用的洗脱剂优选为乙醇溶液，所述乙醇溶液的体积分数优选为10～70％，更优选为70％。在本专利技术中，进行所述洗脱所使用的洗脱剂的体积优选为1～22BV，更优选为20BV；所述洗脱的速度优选为2～5BV/h，更优选为5.0BV/h。在本专利技术中，所述洗脱后优选还包括对得到的洗脱液依次进行的减压浓缩和干燥。本专利技术对所述减压浓缩和干燥的方式没有特殊的限定，选用本领域技术人员熟知的方式进行减压浓缩和干燥即可。本专利技术优选采用紫外-可见分光光度计测定意大利牛舌草纯化物(意大利牛舌草总黄酮有效部位)中的总黄酮含量，具体方法为：1)对照品溶液的制备取芦丁对照品适量，精密称定，加入体积分数为60％的乙醇溶液制成含芦丁0.39mg/mL的对照品溶液；2)建立标准曲线方程以芦丁为对照品，采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠显色反应，在500nm波长处测定吸光度(A)，以吸光度(A)为纵坐标，芦丁对照品浓度(C)为横坐标进行线性回归，得标准曲线方程为A＝12.758C-0.0312，r＝0.9992(图1)，表明芦丁对照品溶液在1.17×10-2mg·mL-1～7本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种意大利牛舌草总黄酮的纯化方法，包括以下步骤：将意大利牛舌草总黄酮粗提液上样于聚酰胺柱，然后进行静态吸附，得到吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱；对所述吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱依次进行除杂和洗脱，得到牛舌草总黄酮纯化物。

【技术特征摘要】
1.一种意大利牛舌草总黄酮的纯化方法，包括以下步骤：将意大利牛舌草总黄酮粗提液上样于聚酰胺柱，然后进行静态吸附，得到吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱；对所述吸附有意大利牛舌草总黄酮粗提物的聚酰胺柱依次进行除杂和洗脱，得到牛舌草总黄酮纯化物。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述牛舌草总黄酮粗提液的固形物质量浓度为5～30mg·mL﹣1。3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述牛舌草总黄酮粗提液的制备方法，包括以下步骤：采用体积分数为70～80％的乙醇溶液对意大利牛舌草进行提取，得到牛舌草总黄酮粗提液。4.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述上样的速度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：马桂芝，滕亮，路文杰，郭伟，
申请(专利权)人：新疆医科大学，
类型：发明
国别省市：新疆,65