The present invention relates to a susceptibility prediction kit for rectal adenocarcinoma, which comprises the following components: STR_1 primer, STR_2 primer, STR_3 primer, STR_4 primer, STR_5 primer, STR_6 primer; furthermore, it can include PCR amplification reaction solution, LIZ_500 molecular weight internal standard and deionized formamide. The susceptibility prediction kit for rectal adenocarcinoma can be used for the diagnosis and susceptibility prediction of rectal adenocarcinoma. The invention also provides a prediction system for rectal adenocarcinoma susceptibility.
【技术实现步骤摘要】
一种直肠腺癌易感性预测试剂盒及系统
本专利技术涉及生物医学领域。具体而言，涉及直肠腺癌易感性预测试剂盒及直肠腺癌易感性预测系统。更具体地，本专利技术涉及一种通过短串联重复序列(Shorttandemrepeats，简称STR)位点片段分析方法检测直肠腺癌易感性相关基因的STR的试剂盒，并通过结合判别分析统计方法，以此对受检对象的直肠腺癌易感性进行早期预警。
技术介绍
肿瘤是一种与遗传基因密切相关的疾病，研究肿瘤的分子遗传学基础，进而提出肿瘤特异性遗传学标志物，是希望它能给平常检测、临床诊断、个性化针对治疗、愈后病情追踪等方面提供简便可行的方法。但病人个体的差异性、不同发展阶段相关生物分子事件发生的交叉性等，都给这项工作带来极大的困难。直肠腺癌属于直肠癌的一种，是指齿状线以上至乙状直肠与直肠移行部之间的腺癌，占结直肠癌的75％～85％，是消化道常见的恶性肿瘤。我国直肠癌的发病率占大肠癌总发病率的60％～70％，但是病因至今仍不甚清楚。我国直肠腺癌位置较低，直肠指检易触及。对于早期癌，可以行根治性手术切除。对其受检人群的直肠腺癌易感性进行预测，有利于提高患病风险意识，...
【技术保护点】
1.一种直肠腺癌易感性预测试剂盒，其包括以下组分：STR‑1引物、STR‑2引物、STR‑3引物、STR‑4引物、STR‑5引物、STR‑6引物，所述STR‑1引物、STR‑2引物、STR‑3引物、STR‑4引物、STR‑5引物、STR‑6引物分别用于扩增包含下列短串联序列的目的片段，以确定下列短串联序列的重复次数：
【技术特征摘要】
1.一种直肠腺癌易感性预测试剂盒，其包括以下组分：STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物，所述STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物分别用于扩增包含下列短串联序列的目的片段，以确定下列短串联序列的重复次数：2.一种直肠腺癌易感性预测试剂盒，其特征在于，包括以下组分：STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物；所述STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物的序列如下所示：优选地，所述STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物的使用浓度均为10μM。3.如权利要求2所述的直肠腺癌易感性预测试剂盒，其特征在于，还包括：PCR扩增反应液、LIZ-500分子量内标、去离子甲酰胺。4.如权利要求3所述的直肠腺癌易感性预测试剂盒，其特征在于：所述PCR扩增反应液为以下试剂的混合液：TaqDNA聚合酶5U/μL、Tris-HCl100mM、KCl500mM、乙基苯基聚乙二醇0.8％(v/v)、MgCl225mM、dNTP10mM、去离子水；其中，Tris-HCl在25℃时pH为8.8。5.如权利要求4所述的直肠腺癌易感性预测试剂盒，其特征在于：还包括使用说明书；所述使用说明书记载了所述一种直肠腺癌易感性预测试剂盒的使用方法，其包括如下步骤：(1)提取样本DNA；(2)PCR反应(2-1)从冰箱中取出STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物、PCR扩增反应液，平衡至室温，各组分充分溶解后，分别快速离心10秒；(2-2)取30-300ng样本DNA，加入PCR扩增反应液60μL，加入去离子水补充至115.2μL，充分混匀，快速离心10秒，然后将混合液按照19.6μL/孔分装至6个PCR反应管中；(2-3)将STR-1引物、STR-2引物、STR-3引物、STR-4引物、STR-5引物、STR-6引物按照0.8μL/孔分别加入到步骤(2-2)的6个PCR反应管中；盖好PCR反应管盖，记录样本加样情况，快速离心10秒，然后将PCR反应管转移至PCR扩增仪样本槽相应位置，并记录放置顺序，开始PCR扩增反应；扩增反应条件为：95℃3分钟；95℃30秒、60℃30秒、72℃30秒，10个循环；95℃30秒、55℃30秒、72℃30秒，20个循环；72℃6分钟，得到6组PCR扩增产物；(3)STR片段分析(3-1)取990μL去离子甲酰胺，加入10μL的LIZ-500分子量内标，充分混匀，快速离心10秒，按照10μL/孔分别加入到测序反应管中，快速离心10秒；(3-2)将上述6组PCR扩增产物按照1μL/孔分别加入到6个测序反应管中，快速离心10秒；然后将测序反应管转移至PCR扩增仪样本槽相应位置，98℃加热5分钟，程序结束后立即将测序反应管置于冰水混合物上急速冷却至0℃，快速离心10秒；然后将测序反应管转移至STR位点片段分析仪样本槽相应位置，并记录放置顺序，进行片段分析检测；(4)结果分析与判定(4-1)根据片段分析结果，分别记录STR-1、STR-2、STR-3、STR-4、STR-5、STR-6各位点两个等位基因的片段长度：STR-1两个等位基因中较小的片段长度值记为L1，STR-1两个等位基因中较大的片段长度值记为L2；STR-2两个等位基因中较小的片段长度值记为L3，STR-2两个等位基因中较大的片段长度值记为L4；STR-3两个等位基因中较小的片段长度值记为L5，STR-3两个等位基因中较大的片段长度值记为L6；STR-4两个等位基因中较小的片段长度值记为L7，STR-4两个等位基因中较大的片段长度值记为L8；STR-5两个等位基因中较小的片段长度值记为L9，STR-5两个等位基因中较大的片段长度值记为L10；STR-6两个等位基因中较小的片段长度值记为L11，STR-6两个等位基因中较大的片段长度值记为L12；(4-2)短串联序列的重复次数根据片段长度和如下公式计算得到，记作X1-X12，其中round代表四舍五入取整数：X1＝round[(L1-191)/3]；X2＝round[(L2-191)/3]；X3＝round(L3-379)；X4＝round(L4-379)；X5＝round[(L5-202)/2]；X6＝round[(L6-202)/2]；X7＝round[(L7-359)/2]；X8＝round[(L8-359)/2]；X9＝round[(L9-278)/2]；X10＝round[(L10-278)/2]；X11＝round[(L11-200)/4]；X12＝round[(L12-200)/4]；(4-3)将上述短串联序列重复次数代入预先设置的判别函数：FRC＝9.246X1+5.351X2+12.883X3+122.038X4+3.427X5-1.866X6-5.381X7+9.156X8+0.257X9-3.594X10-...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨麒巍，任明，郝书弘，王晓峰，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。