The invention discloses a method for separating highly active oomyxoid protein, belonging to the technical field of protein separation. The steps are: 1), preparation of egg white treatment solution, 2), chromatography separation, 3), protein purity detection, 4), protein concentration. The invention adopts CM_Sepharose FF to efficiently separate oomyxoid protein. Sample processing does not use organic solvents, the separation process is simple and the separation time is short, so as to obtain pure oomyxoid protein with high immunological activity. After protein purity testing and evaluation of immune activity, it has a high similarity with sigma oomyxoid protein purity, indicating that it has a high immune activity.
【技术实现步骤摘要】
一种高活性卵类粘蛋白的分离方法
本专利技术涉及蛋白质分离
，具体为一种高活性卵类粘蛋白的分离方法。
技术介绍
鸡蛋中的过敏原主要存在于蛋清中，目前公认卵类粘蛋白是蛋清中致敏性最强的过敏原。因此，卵类黏蛋白致敏性的控制是低致敏或者无致敏鸡蛋产品研发的关键点。然而，已报道的卵类粘蛋白分离方法仅有以下几种：有机溶剂沉淀法[1,2]，离子交换层析法[3,4]，以及双水相萃取法[5]。[1]AbeyrathneED,LeeHY,AhnDU.Separationofovotransferrinandovomucoidfromchickeneggwhite.PoultSci,2014,93(4):1010-7.[2]王帅,吴子健,王素英,刘建福,张伟帖,航荣强.三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白.食品科学,2014,35(24):74-80.[3]TankrathokA,DaduangS,PatramanonR,ArakaiT,ThammasirirakS.Purificationprocessforthepreparationandcharacterizationofheneg...
【技术保护点】
1.一种高活性卵类粘蛋白的分离方法，其特征步骤为：1)、鸡蛋清处理液的制备：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，加入等体积蒸馏水后置于冰浴中，用玻璃棒缓慢搅拌直到胶状部分消失；用2M HCl调pH到6.0，冰浴中搅拌3h后,离心除去球蛋白等干扰蛋白；上清液继续滴加2M HCl调至pH3.8,冰浴中搅拌3h，再次离心，将上清液分装成5ml每管冻存备用；2)、层析分离：用醋酸‑醋酸钠pH4.7平衡CM‑sepharose FF层析柱1.5×20cm，至紫外监测仪读数稳定；上样5ml鸡蛋清处理液，控制流速在1.5ml/min，继续用pH4.7的醋酸盐缓冲液进行洗脱，同时连通记录仪，洗脱结束...
【技术特征摘要】
1.一种高活性卵类粘蛋白的分离方法，其特征步骤为：1)、鸡蛋清处理液的制备：新鲜鸡蛋去壳并分离出蛋清，加入等体积蒸馏水后置于冰浴中，用玻璃棒缓慢搅拌直到胶状部分消失；用2MHCl调pH到6.0，冰浴中搅拌3h后,离心除去球蛋白等干扰蛋白；上清液继续滴加2MHCl调至pH3.8,冰浴中搅拌3h，再次离心，将上清液分装成5ml每管冻存备用；2)、层析分离：用醋酸-醋酸钠pH4.7平衡CM-sepharoseFF层析柱1.5×20cm，至紫外监测仪读数稳定；上样5ml鸡蛋清处理液，控制流速在1.5ml/min，继续用pH4.7的醋酸盐缓冲液进行洗脱，同时连通记录仪，洗脱结束后收集蛋白样品；3)、蛋白纯度检测：将分离所得蛋白收集，取样10μl与10μl上样缓冲液混合后，取15μl加入聚丙烯酰胺凝胶SDS-PAGE胶孔内，电泳后，凝胶经考马斯亮蓝显色...
【专利技术属性】
技术研发人员：麻小娟，梁汭，黄厚今，胡斌丽，李岩，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52
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