一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法技术

本发明专利技术提供了一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，分别克隆来源于黄杆菌属(Flavobacterium phragmitis)的褐藻多糖裂解酶Flph(GenBank:WP_091498571.1)和褐藻寡糖酶Flphalx(GenBank:WP_091498561.1)的基因，构建表达载体并分别在大肠杆菌宿主中表达，纯化蛋白得到Flph和Flphalx两种重组酶，将两种重组酶按一定比例复配，以褐藻酸钠为底物转化生成褐藻寡糖和DEH(4‑deoxy‑L‑erythro‑5‑hexoseulose uronic acid)，DEH转化率可以达到85％以上。

【技术实现步骤摘要】
一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法
本专利技术属于基因工程和酶工程
，具体涉及一种利用基因工程菌降解褐藻多糖生产褐藻寡糖及DEH的方法。
技术介绍
褐藻多糖主要是从海带、马尾藻、巨藻等褐藻中提取的多糖聚合物，故又称褐藻胶。褐藻多糖的聚合方式有三种：由β-D-甘露糖醛酸构成的均聚物(PloyM)、α-L-古罗醛酸构成的均聚物(PloyG)和由β-D-甘露糖醛酸与α-L-古罗醛酸组成的MG随机交替片段(PloyMG)。基于褐藻酸的化学稳定性、高粘度和易于形成凝胶的特性，褐藻酸盐被广泛用于食品添加剂、稳定剂和凝胶材料。褐藻多糖降解后产生的褐藻寡糖有诸多生物学功能，如抗肿瘤、抗凝血、降血糖血脂、抗自由基氧化、抗炎症、调节免疫以及促进生长作用，广泛应用于医药领域、食品领域、日用化工、饲料领域和农业领域。褐藻寡糖有多重方法制备，如酸降解法、氧化降解法、超声降解法和酶降解法，用酶降解法取代传统的物理、化学法获取褐藻寡糖，是先从海藻中提取褐藻多糖，再利用褐藻多糖裂解酶通过降解反应制备褐藻寡糖，酶降解法具有降解条件温和，过程可控，得率高等优点，已经成为生产褐藻寡糖的主要方式。褐藻多糖裂解酶的作本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，包括步骤如下：a、分别克隆来源于黄杆菌属(Flavobacterium phragmitis)的褐藻多糖裂解酶Flph和褐藻寡糖酶Flphalx的基因；b、分别构建Flph和Flphalx的表达载体；c、分别在大肠杆菌宿主细胞中化转和表达含有Flph和Flphalx基因的表达载体，并纯化重组蛋白；d、将重组菌表达的Flph和Flphalx两种重组酶按一定比例复配，以褐藻酸钠为底物转化生成褐藻寡糖和DEH。

【技术特征摘要】
1.一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，包括步骤如下：a、分别克隆来源于黄杆菌属(Flavobacteriumphragmitis)的褐藻多糖裂解酶Flph和褐藻寡糖酶Flphalx的基因；b、分别构建Flph和Flphalx的表达载体；c、分别在大肠杆菌宿主细胞中化转和表达含有Flph和Flphalx基因的表达载体，并纯化重组蛋白；d、将重组菌表达的Flph和Flphalx两种重组酶按一定比例复配，以褐藻酸钠为底物转化生成褐藻寡糖和DEH。2.如权利要求1所述的一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，其特征在于，所述褐藻多糖裂解酶Flph和褐藻寡糖酶Flphalx的基因的碱基序列分别如SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示。3.如权利要求1所述的一种酶法降解褐藻多糖生成DEH的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦慧民，毛淑红，李玉，路福平，朱张亮，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津,12