过表达靶蛋白的系统和方法技术方案

本发明专利技术提供一种过表达靶蛋白的系统，所述系统包含二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞、叶酸拮抗剂、靶蛋白表达载体和CRISPRi表达载体，其中靶蛋白表达载体包含靶蛋白表达盒和DHFR表达盒，CRISPRi表达载体包含gRNA盒和dCas9表达盒。所述过表达靶蛋白的系统可以显著提高靶蛋白的产量，并缩短进行基因扩增的时间。

【技术实现步骤摘要】
过表达靶蛋白的系统和方法
本专利技术涉及一种DNA重组技术，特别是一种使用载体引入外来遗传材料的DNA重组技术。
技术介绍
由于生物体内各种蛋白质控制了生理状态，因此许多疾病与缺乏某些蛋白质有关。蛋白质药物属于大分子药物，可定义为治疗人类疾病而由体外给予的配制蛋白质。蛋白质药物原料以天然的生物材料为主，包括人体、动物、植物和微生物等，因其低毒性以及与人体兼容的优点，为目前新药发展趋势和为我国生物制剂产业发展重要项目之一。过去蛋白质药物主要来源为从人(血液或尿液)或动物器官(如胰脏)中萃取。这种方法产率和产量都很低，来源不易取得，因此成本非常高。同时由于各种传染病(如艾滋病与狂牛病)盛行，很难保证这些药物不被病原体污染。以基因工程生产的药物，利用生物细胞为工厂制造，可在实验室中筛检确保不受病原体污染，同时在转染蛋白质基因时，可利用强启动子(strongpromoter)使蛋白质表达量增强以提升产量。早期的宿主细胞常选用大肠杆菌或酵母菌，因为此类细胞较易培养，容易利用生化反应器放大生产规模，产量较大且培养基较便宜。但大肠杆菌或酵母菌为较简单的生物，有些蛋白质生产出来会无法适当地折叠成正确本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种过表达靶蛋白的系统，其特征在于，包含：二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)缺陷型CHO细胞；叶酸拮抗剂；靶蛋白表达载体，所述靶蛋白表达载体包含：靶蛋白表达盒，所述靶蛋白表达盒包含第一启动子和靶蛋白的基因；和DHFR表达盒，所述DHFR表达盒包含第二启动子和DHRF基因；以及CRISPRi表达载体，所述CRISPRi表达载体包含：gRNA盒，所述gRNA盒包含第三启动子、gRNA序列和终止子；和dCas9表达盒，所述dCas9表达盒包含第四启动子、dCas9‑KRAB基因和抗生素耐受基因。

【技术特征摘要】
1.一种过表达靶蛋白的系统，其特征在于，包含：二氢叶酸还原酶(dihydrofolatereductase,DHFR)缺陷型CHO细胞；叶酸拮抗剂；靶蛋白表达载体，所述靶蛋白表达载体包含：靶蛋白表达盒，所述靶蛋白表达盒包含第一启动子和靶蛋白的基因；和DHFR表达盒，所述DHFR表达盒包含第二启动子和DHRF基因；以及CRISPRi表达载体，所述CRISPRi表达载体包含：gRNA盒，所述gRNA盒包含第三启动子、gRNA序列和终止子；和dCas9表达盒，所述dCas9表达盒包含第四启动子、dCas9-KRAB基因和抗生素耐受基因。2.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞为DUXB11细胞株或DG44细胞株。3.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述叶酸拮抗剂为甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)或甲硫胺酸磺酰亚胺(Methioninesulfoximine,MSX)。4.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述第一启动子为CMV启动子或SV40启动子。5.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述第二启动子为CMV启动子或SV40启动子，且所述第二启动子和所述第一启动子不相同。6.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述第三启动子为U6启动子。7.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述第四启动子为CMV启动子或SV40启动子。8.如权利要求1所述的过表达靶蛋白的系统，其中所述dCas9表达盒还包含2A肽序列，所述2A肽序列连接所述dCas9-KRAB基因和所述抗生素耐受基因。9.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡育诚，沈志哲，
申请(专利权)人：胡育诚，
类型：发明
国别省市：中国台湾,71