一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolaris peregianensis及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株m5‑2佩立金平脐蠕孢Bipolaris peregianensis及其应用。所述菌株于2016年7月11日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号：GDMCC.NO:60057。本发明专利技术提供的从狗牙根病株获得的m5‑2佩立金平脐蠕孢Bipolaris peregianensis可有效防除禾本科杂草，由其制成的除草剂对环境友好，可抑制杂草的耐药和抗药性发展，有利于绿色食品和有机农业的推广，并且成本低、无污染、对农作物安全。

A m5-2 Bipolaris peregianensis and its application

The invention relates to M5 Bipolaris 2 peregianensis and its application. The strain was preserved in Guangdong Provincial Microbial Species Preservation Center on July 11, 2016, with the preservation number GDMCC.NO:60057. The m5_2 Peregianensis obtained from the bermudagrass disease strain Bipolaris peregianensis can effectively control grasses weeds. The herbicides made from the herbicides are environmentally friendly, can inhibit the development of weed resistance and drug resistance, and are beneficial to the promotion of green food and organic agriculture, and have the advantages of low cost, no pollution and good resistance to weeds. Crop safety.

【技术实现步骤摘要】
一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis及其应用
本专利技术属于生物防治领域，具体涉及一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis及其应用。
技术介绍
化学除草剂因其作用迅速、使用简便等特性，在我国得到了迅速发展，然而，随着化学药剂的广泛使用使得环境巨大污染和农药残留问题严重影响了农业生态的可持续发展。因此，生物农药的开发与利用在环保农业及杂草综合治理(IPM)中扮演了重要的角色。微生物除草剂是一类以微生物活体及其代谢产物为原料研制而成的除草剂，因其对环境危害小而成为除草剂领域一个重要的研究方向。近来研究发现，植物病原真菌活体及其分泌的次生代谢产物具有除草活性。利用杂草病原真菌活体及其次生代谢产物开发微生物除草剂，一般具有作用位点和作用方式多样性的特点，杂草不易产生抗药性、开发成本低、对环境无害，显示出良好的开发应用前景。狗牙根(Cynodondactylon(Linn.)Pers.)又名百慕大草，其广泛分布于世界各地区。为多年生草本植物，是良好的固堤保土植物，常用以铺建草坪或球场；但当生长于果园或农田时，则为难除灭的有害杂草。狗牙根繁殖能力强、生长速度快、生长期长、适应性强，在各种土壤环境中均可生长。农田的狗牙根还常与农作物竞争水份和养份，严重影响作物生长发育和品质产量，严重时甚至可形成优势种群密被田间，造成作物严重减产。对狗牙根杂草的防除办法目前主要还是依靠人工或化学方法，人工除草费工费时，而化学除草又造成环境污染并导致杂草种群抗性的产生，所以寻求除以上两种方法以外的防除狗牙根的方法已经变得愈加迫切。目前生物除草剂的研究和开发日益受到重视，利用微生物控制杂草危害正在成为一条有效的新途径，也具有巨大的市场前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中狗牙根杂草的防除费工费时，易造成环境污染并导致杂草种群抗性的产生的缺陷，提供一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis。本专利技术提供的m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis可有效防除禾本科杂草。本专利技术的另一目的在于提供该m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis在除杂草中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种除草剂。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis，所述菌株于2016年7月11日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号：GDMCC.NO:60057。本专利技术的新菌株m5-2（Bipolarisperegianensis）已于2016年7月11日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号：GDMCC.NO:60057。该菌株经形态学和分子生物学鉴定为佩立金平脐蠕孢，隶属于旋孢腔菌属(CochliobolusDrechsler)[无性阶段:平脐蠕孢属(BipolarisShoemarker)]，格孢腔菌科(PleosporaceaeNitschke)，格孢腔菌目(PleosporalesLuttrellBarr)，格孢腔菌亚纲(Pleosporomycetidae)，座囊菌纲(Dothideoetes)，囊菌门(Ascomycota)，真菌界(Fungi)。专利技术人是通过以下途径获得该菌株并进行鉴定的，对我国多个地区禾本科病害进行调查，发现狗牙根病害后，详细记录病害症状并拍摄田间为害症状，采集发病的杂草叶片和茎秆，带回实验室后进行镜检。病原菌的分离与纯化过程如下：发病狗牙根染病叶片上出现褐色至暗紫色的椭圆形、梭形的斑点，随着斑点扩大，叶鞘、茎、根部也受到感染。潮湿的条件下叶片表面生成黑色霉状物，即为分生孢子梗，当发病较为严重时，多数植株枯萎死亡，并形成黑褐色的枯草斑。选择病斑典型的发病杂草叶片冲洗干净后，从发病部位的病健交界处切取3mm×3mm的小块组织，样本剪取完成后置于2.5%的次氯酸钠溶液中消毒1min，之后再用无菌水换洗3次，移入马铃薯葡萄糖琼脂［PDA，添加庆大霉素(1mL/L)以抑制细菌生长］培养基上，25℃恒温培养。病原菌经纯化后保存于PDA斜面培养基上，置于4℃冰箱贮存备用。优选地，所述菌株的rDNA-ITS序列如SEQIDNO：1所示。优选地，所述菌株为在PDA培养基上培养5d后形成的菌落直径为70mm，黑色，毡状，菌落背面灰褐色；所述菌株的菌丝黄褐色，有分枝，多隔膜，分生孢子梗单生，少数集生，圆筒状或屈膝状，褐色，长达94.5~147μm，宽4~9μm；分生孢子弯曲，纺锤形，宽椭圆形，暗褐色，具6~10个假隔膜，大小58.5~84.5×13.5~18.5μm。该病原菌的形态学鉴定如下：对分离获得的真菌进行单孢纯化和培养，将菌株接种在PDA培养基上，25℃恒温培养5d之后观察记录各菌落形态。持续观察病原菌菌落分生孢子的产生情况，并在光学显微镜下观察其形态及产孢结构特征，测量50个病原菌孢子和孢子梗大小等，查阅相关专著文献进行鉴定。在PDA培养基上25℃下生长5d后，培养的菌落直径达70mm，黑色，毡状，菌落背面灰褐色。菌落在PDA培养基上不易产孢，菌丝黄褐色，有分枝，多隔膜，分生孢子梗单生，少数集生，圆筒状或屈膝状，褐色，长达94.5~147μm，宽4~9μm。分生孢子弯曲，纺锤形，宽椭圆形，暗褐色，具6~10个假隔膜，多数9个，大小58.5~84.5×13.5~18.5μm。通过形态学和培养性状观测，并查考文献[Manamgoda,D.S.,Rossman,A.Y.,Castlebury,L.A.,Crous,P.W.,Madrid,H.,Chukeatirote,E.,&Hyde,K.D.(2014).Thegenusbipolaris.Studiesinmycology,79,221-288.]。初步确定了病原菌为佩利金平脐蠕孢(Bipolarisperegianensis)。该病原菌的分子生物鉴定如下：将供试菌株转移至新鲜的PDA培养基上培养10天，用灭菌的接种针将菌丝刮下，参照DNAsecure新型植物基因组DNA提取试剂盒说明书（Takara,大连）对病原菌基因组进行提取。利用White等设计rDNA-ITS区通用引物ITS-1（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和ITS-4（5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）（上海生工生物有限公司合成），以分离自狗牙根病原菌基因组为模板进行PCR扩增，预期产物约580bp。PCR扩增体系：2×TaqPCRMasterMix25μL（Takara,大连），20μmol/Ｌ引物各1μL，模板DNA1μL，加灭菌双蒸水至50μL。PCR反应条件：94℃预热4min；94℃40s，62℃45s，72℃1min，共32个循环；72℃延伸10min。将所有PCR产物分别加入0.1%的琼脂糖凝胶中进行电泳，经溴化乙锭染色后，于凝胶成像仪检测，将PCR产物上海生工有限公司（生工,上海）进行DNA测序。将分离所得病原菌的ITS序列与Gen-Bank核酸数据库进行比对，根据病菌的形态特征、培养性状和致病性，结合序列分析，对病原菌进行鉴定。并用MEGA5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株m5‑2 佩立金平脐蠕孢Bipolaris peregianensis，其特征在于，所述菌株于2016年7月11日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号：GDMCC.NO:60057。

【技术特征摘要】
1.一株m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis，其特征在于，所述菌株于2016年7月11日，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏号：GDMCC.NO:60057。2.根据权利要求1所述m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis，其特征在于，所述菌株rDNA-ITS序列如SEQIDNO：1所示。3.根据权利要求1所述m5-2佩立金平脐蠕孢Bipolarisperegianensis，其特征在于，所述菌株为在PDA培养基上培养5d后形成的菌落直径为70mm，黑色，毡状，菌落背面灰褐色；所述菌株的菌丝黄褐色，有分枝，多隔膜，分生孢子梗单生，少数集生，圆筒状或屈膝状，褐色，长达94.5~147μm，宽4~9μm；分生孢子弯曲，纺锤形，宽椭圆形，暗褐色，具6~10个假隔膜，大小58.5~84.5×13.5~18.5μm。4.权利要求1所述佩立金平脐蠕孢m5-2佩立金平脐...

【专利技术属性】
技术研发人员：章武，刘金祥，霍平慧，
申请(专利权)人：岭南师范学院，
类型：发明
国别省市：广东,44