一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌制造技术

本发明专利技术涉及一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌，属于微生物技术领域。本发明专利技术的该株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌#4‑IPPNEMATODE，保藏编号为CGMCC15661；其培养液、分泌物及分生孢子液均能使大豆幼苗致病萎蔫。这株分生孢子对大豆具有致病作用的茄病镰孢菌是用于镰孢菌致病新机制研究的独特生化与遗传实验材料，为挖掘致病基因及抗性作物品种选育具有重要指导意义。

Fusarium solani, a pathogenic fungus with conidia

The present invention relates to a pathogenic fungus of Fusarium solanacearum, belonging to the field of microbial technology. The Fusarium solanacearum # 4 IPPNEMATODE with pathogenic effect of the conidia of the present invention is preserved as CGMCC15661, and its culture medium, secretion and conidia liquid can cause pathogenic wilting of soybean seedlings. The conidia of Fusarium solanacearum is a unique biochemical and genetic experimental material used to study the new pathogenic mechanism of Fusarium solanacearum. It has important guiding significance for exploring pathogenic genes and breeding resistant crop varieties.

【技术实现步骤摘要】
一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌
本专利技术属于微生物
，涉及一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌。
技术介绍
大豆根腐病(Soybeanrootrot)是一种严重威胁大豆生产的病害，在大豆整个生长发育期都能发生。作为一种世界性土传病害，它的病原菌主要是大豆疫霉菌(Phytophthorasojae)、镰孢菌(Fusariumspp.)、腐霉菌(Pythiumspp.)及立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)。目前，在许多国家，镰孢菌是引起该病害的主要病原菌，在美国是镰孢菌和腐霉菌，而在加拿大是尖孢镰孢菌和禾谷镰孢菌。在中国，开展了许多关于该病原镰孢菌的研究工作。在中国大豆生产区，黑龙江省主要以尖孢镰孢菌为主，福建省、山东省等地区主要以茄病镰孢菌为主，陕西省一些地区则以茄病镰孢菌、尖孢镰孢菌及木贼镰孢菌为主要致病菌。在大豆生产区该病害每年均造成巨大的产量损失，并且该病害严重影响大豆品质。近年来，大豆重茬和迎茬情况严重，根腐病病情越来越难控制，加上多种病原菌引起这个病害，增加了该病害的防治难度。了解这些病原菌的毒力性质，并鉴定和利用大豆抗性遗传资源来有效控制该类病原菌至关重要。镰孢菌对大豆的致病作用被认为是由其分泌的毒素(BritoN,EspinoJJ,GonzálezC.Theendo-beta-1,4-xylanasexyn11AisrequiredforvirulenceinBotrytiscinerea.MolecularPlant-MicrobeInteractions,2006,19,25-32；BrarHK,SwaminathanS,BhattacharyyaMK.TheFusariumvirguliformetoxinFvTox1causesfoliarsuddendeathsyndrome-likesymptomsinsoybean.MolecularPlant-MicrobeInteractions,2011,24,1179-1188)和蛋白酶(CooperRM,LongmanD,CampbellA,HenryM,LeesPE.Enzymicadaptationofcerealpathogenstothemonocotyledonousprimarywall.PhysiologicalandMolecularPlantPathology,1998,32,33-47；JayasingheCK,WijayaratneSC,FernandoTH.CharacterizationofcellwalldegradingenzymesofThanatephoruscucumeris.Mycopathologia,2004,157,73-79；PaccanaroMC,SellaL,CastiglioniC,GiacomelloF,Martínez-RochaAL,D’OvidioR,W,FavaronF.Synergisticeffectofdifferentplantcellwall-degradingenzymesisimportantforvirulenceofFusariumgraminearum.MolecularPlant-MicrobeInteractions,2017,30,886-895)引起的，其分生孢子对大豆并没有致病作用。目前，为长期有效防治该病害，除鉴定大豆抗性基因，进行抗性育种和栽培抗性大豆品种外，鉴定镰孢菌致病基因、解析其致病机制及明确镰孢菌与大豆的相互作用机制同样至关重要。为此，迫切需要挖掘独特的生化与遗传实验材料。
技术实现思路
本专利技术提供一株其分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌，为镰孢菌致病新机制的研究提供思路和方向及实验材料，对抗病大豆的选育有良好的指导意义。本专利技术的目的是提供一株其分生孢子对大豆具有致病作用的茄病镰孢菌。一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌(Fusariumsolani)#4-IPPNEMATODE，其保藏编号为CGMCC15661。上述茄病镰孢菌在研究镰孢菌的致病新机制、挖掘致病基因及选育抗性作物品种中的应用。所述作物品种为大豆品种。上述目的通过以下技术方案实现：(1)采集大豆种植地里萎蔫大豆植株。采集到了大豆萎蔫植株11株。(2)用PDA真菌培养基分离萎蔫植株病健组织交界处的真菌。分离到了18个单菌落克隆，每个单菌落作为一个分离菌。(3)每个分离菌对大豆幼苗的致病性测定将18个分离菌进行液体PDA培养基培养，然后用每个分离菌的培养液、分泌物(过滤掉菌丝的培养液离心分离后的上清液)及分生孢子液(过滤掉菌丝的培养液离心分离后的沉淀物的灭菌水悬浮液)侵染2种大豆(PI437654及中黄13)的幼苗，观察大豆幼苗的表型变化约5d。(4)分生孢子具有致病作用的真菌的鉴定在上述18个分离菌中，在5d内，一个分离菌的培养液及分泌物能使中黄13幼苗萎蔫，但不能使PI437654幼苗萎蔫；另外的17个分离菌的培养液及分泌物都能使2种大豆的幼苗萎蔫。在上述18个分离菌中，有17个分离菌的分生孢子液都不能使2种大豆的幼苗在5d内萎蔫，但另有一个分离菌的分生孢子液单独能使2种大豆的幼苗在5d内萎蔫。这个分离菌就是本专利技术筛选、鉴定的分生孢子对大豆具有致病作用的真菌分离菌#4-IPPNEMATODE，保藏编号CGMCC15661。(5)分生孢子具有致病作用的真菌的形态学特征在显微镜下观察该分生孢子对大豆具有致病作用的分离菌的菌丝、分生孢子梗及分生孢子等的形态、颜色、大小、比例及发生部位等，并观察是否有厚垣孢子。从形态学特征鉴定该真菌为一种镰孢菌。(6)分生孢子具有致病作用的真菌的分子鉴定用镰孢菌的特异性引物扩增该分生孢子具有致病作用的真菌分离菌的ITS序列，并测序获得该真菌的ITS序列。然后进行序列检索(Blast)。分子鉴定出该镰孢菌为一种茄病镰孢菌。本专利技术通过致病性测定筛选到了一株其分生孢子对大豆具有致病作用的真菌。使用PDA液体培养基培养分离菌得到一定浓度的培养液，通过过滤、离心等操作设置三个处理：培养液、分泌物及分生孢子液对大豆幼苗进行接菌侵染实验，然后观察表型。从中筛选到了一株分离菌，不但其培养液和分泌物对大豆幼苗有致病作用，而且其分生孢子也能使大豆幼苗致病萎蔫。本专利技术涉及真菌的形态学鉴定。将分生孢子对大豆具有致病作用的真菌在PDA固体培养基上培养8d后，观察其形态特征：出现白色棉絮状气生菌丝，菌丝较短(图3-A)；显微镜下观察，分生孢子着生于分生孢子梗上(图3-B)，多数为小型分生孢子，椭圆形或肾形，有的无隔或一隔，大型分生孢子近镰刀型，近直或微弯，两端稍窄细、较钝，2-5隔，多为3隔(图3-C)。从形态学特征鉴定该真菌为镰孢菌。本专利技术进行了茄病镰孢菌的分子鉴定。真菌的ITS序列具有高度保守性，因此广泛用于快速鉴定真菌。用镰孢菌ITS通用引物扩增分生孢子对大豆具有致病作用的真菌的ITS序列，然后通过克隆转化后测序(见SEQIDNO.1)，经序列比对与检索鉴定其为一种茄病镰孢菌。本专利技术筛选到的这株分生孢子具有致病作用的真菌为茄病镰孢菌。到目前为止，没有镰孢菌的分生孢子能单独对大豆起致病作用的相关报道。栽培抗性大豆品种是一种有效、经济本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌(Fusarium solani)#4‑IPPNEMATODE，其保藏编号为CGMCC15661。

【技术特征摘要】
2018.04.17 CN 20181034297271.一株分生孢子具有致病作用的茄病镰孢菌(Fusariumsolani)#4-IPPNEM...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘世名，张刘萍，郑娜，彭德良，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11