一种煅烧牙粉的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种煅烧牙粉的制备方法，包括如下步骤：1）经过患者知情同意后，收集口腔医院外科门诊拔除的天然离体牙，去除牙齿表面附着的软组织、牙结石及龋坏组织，清洗干净后生理盐水中保存备用；2）将牙齿进行煅烧；3）煅烧后的牙齿在研钵中研磨成粉末状，用滤器过滤，直至所有牙粉均能通过滤器；4）收集成品牙粉置入密闭容器中备用。本发明专利技术具有如下有益结果：1）通过标准化制备方法获得天然牙粉，获得的天然牙粉成分性能稳定可靠，可以提高组织工程学领域相关研究的重复性和科学性。2）天然牙粉制备取材方便，制作程序简便易行，符合集约化的原则。3）通过标准化制备方法取得的天然牙粉生物形容性好。4）天然牙粉后续可经开发在临床上牙槽骨缺损等方面实现应用。

Preparation method of calcined tooth powder

The invention provides a preparation method of calcined tooth powder, which comprises the following steps: 1) after informed consent of the patient, collecting the natural extracted teeth from the surgical outpatient clinic of the stomatological hospital, removing the soft tissue, calculus and decayed tissue attached to the tooth surface, and storing the teeth in the normal saline after cleaning; 2) calcining the teeth; 3) The calcined teeth are ground into powder in a mortar and filtered by a filter until all the powder can be filtered; 4) The finished tooth powder is collected and placed in an airtight container for use. The invention has the following beneficial results: 1) The natural tooth powder obtained by standardized preparation method has stable and reliable composition, and can improve the repeatability and scientificity of relevant research in the field of tissue engineering. 2) the preparation of natural tooth powder is convenient and the production procedure is simple and feasible, which is in line with the principle of intensification. 3) the natural dentifrice obtained by standardized preparation method has good biological description. 4) natural tooth powder can be further applied in the development of alveolar bone defects in clinic.

【技术实现步骤摘要】
一种煅烧牙粉的制备方法
本专利技术涉及一种组织工程学材料的制备方法，尤其是牙髓再生相关组织工程，具体的说是一种煅烧天然牙粉的制备方法。
技术介绍
随着时间的推移及材料学的发展，牙髓再生及活髓保存治疗已然成为口腔治疗的热门，因为牙髓组织具有诱导和形成牙本质，供应牙齿营养，防御和感觉功能。是否具有活髓的存在对于牙齿本身具有重要意义。牙髓，为牙齿提供一种生物性屏障，阻止细菌再次入侵，降低牙折的风险，延长牙齿的寿命。活髓保存已经成为牙髓疾病治疗的最理想方法，它是利用生物制剂诱导牙髓中的牙髓干细胞向成牙本质细胞分化，形成修复性牙本质，以隔绝外界刺激，保存牙髓活力。但是对于牙髓已经坏死或者感染的患牙，用重建的牙髓系统代替感染坏死的牙髓组织又为牙髓根尖周病提供一种新的治疗方案。牙髓再生被认为是根尖周疾病治疗的一个新的方向，主要采用引导组织再生的原理，通过组织工程学技术促进根管内的牙髓再生，在很大程度上是作为活髓保存术的补充治疗手段，或者更为前瞻性的治疗方法。在组织工程学中，由于各种生物材料的出现及利用，使活髓保存治疗成功率大大提升，使牙髓再生治疗成为可能。最常用的材料有氢氧化钙、MTA、iROOTBP-PLUS等，有研究表明氢氧化钙可以促进牙本质钙化桥的形成，MTA，iROOTBP-PLUS可以诱导牙髓干细胞的成牙成骨向分化。我们通过实验初步验证煅烧的牙粉也可以促进牙髓干细胞成牙成骨向分化，对于细胞增殖无明显影响，并且通过X射线衍射（XRD）分析得出煅烧出的天然牙粉的主要成分为羟基磷灰石和磷酸三钙，羟基磷灰石和磷酸三钙是组织学常用的支架材料。牙粉作为一种近乎纯天然的物质，不仅同MTA、IROOTBPPlus一样，可以诱导人牙髓干细胞的成牙成骨向分化，而且又不同于氢氧化钙，煅烧牙粉对于牙髓干细胞的增殖无抑制作用。牙粉是通过对废用牙二次加工，容易获得，成本较低。综上所述，煅烧牙粉未来可作为组织工程牙髓再生的天然材料，并可与其他材料联合使用相互促进，为牙髓再生治疗提供更好的天然或者半加工材料。因此，构建一个标准化的煅烧牙粉的制备程序，将有利于促进牙髓再生相关组织工程的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是利用本专利技术团队前期研究结果构建一个标准化的天然牙粉制备方法，从而为后续牙髓再生的研究及治疗提供一个技术手段或创新平台。本专利技术的技术方案如下：一种煅烧牙粉的制备方法，包括如下步骤：1）经过患者知情同意后，收集口腔医院外科门诊拔除的天然离体牙，去除牙齿表面附着的软组织、牙结石及龋坏组织，清洗干净后生理盐水中保存备用；2）将牙齿进行煅烧；3）煅烧后的牙齿在研钵中研磨成粉末状，用滤器过滤，直至所有牙粉均能通过滤器；4）收集成品牙粉置入密闭容器中备用。所述的步骤2）中，煅烧温度为300℃，煅烧时间为30min。所述的步骤3）中，用45μm的滤器过滤。合理控制颗粒的大小，增大材料与组织液的接触面积。本专利技术的创新点在于以天然离体牙为基础材料，通过特定工艺的煅烧方式获得天然牙粉，此方法此前国内外文献未有报道，并通过将煅烧牙粉与细胞进行体外培养，证实了煅烧牙粉对细胞的诱导作用。本专利技术通过煅烧的方式，去除牙齿中有机物，研磨成分备用。该方法操作简单，牙粉末容易获得。本专利技术具有如下有益结果：1）通过标准化制备方法获得天然牙粉，获得的天然牙粉成分性能稳定可靠，可以提高组织工程学领域相关研究的重复性和科学性。2）天然牙粉制备取材方便，制作程序简便易行，符合集约化的原则。3）通过标准化制备方法取得的天然牙粉生物形容性好，并经本专利技术团队实验证实对于不同干细胞有显著分化诱导能力，将对于牙髓再生领域的研究发挥重大促进作用。4）天然牙粉后续可经开发在临床上实现应用，可用于骨缺损、牙槽骨缺损的修复、拔牙后现场制备成粉回填牙槽窝有利于牙槽骨再生愈合等。附图说明图1A是hDPSCs与牙粉浸提液共培养一周后通过Westernblot实验检测细胞内DSPP蛋白表达水平结果。图1B是hDPSCs与牙粉浸提液共培养一周后通过Westernblot实验检测细胞内ALP蛋白表达水平结果。图2是hDPSCs与牙粉浸提液共培养一周后通过realtimeRT-PCR实验检测细胞内DSPP、ALP基因表达水平结果。具体实施方式实施例1本实施例的煅烧牙粉的制备方法，包括如下步骤：1）经过患者知情同意后，收集口腔医院外科门诊拔除的天然离体牙，如智齿、正畸牙、松动牙、残根残冠等，去除牙齿表面附着的软组织，牙结石及龋坏组织，清洗干净后生理盐水中保存备用；2）牙齿在300摄氏度条件下煅烧30分钟；3）煅烧后的牙齿在研钵中研磨成粉末状，用45μm的滤器过滤，直至所有牙粉均能通过滤器；4）收集成品牙粉置入密闭容器中备用。实施例2检测煅烧牙粉对细胞的诱导作用，煅烧牙粉可以通过浸提液与牙髓干细胞进行共培养，以检测煅烧牙粉对于牙髓干细胞的分化诱导能力。具体检测方式如下：1）牙粉按100mg/mL的浓度加入培养液α-MEM（从英国Gibco公司购买），在37℃孵箱内放置一周，在超净台内用0.22μm的滤器过滤，去除细菌，制作牙粉浸提液，模拟材料在人体中发挥作用的环境；2）取生长稳定的第2~4代中任意一代的牙髓细胞hDPSCs，接种于中皿培养，与步骤1）的牙粉浸提液共培养，加牙粉浸提液的组别为牙粉组，不加牙粉浸提液的组别为对照组；（细胞通过原代法获得，具体方法参考本课题组文献：WangYZY,WangZ,LiJ,WangZ,ZhangG,YuJ.10(-7)M17b-oestradiolenhancesodonto/osteogenicpotencyofhumandentalpulpstemcellsbyactivationoftheNF-κBpathway.CellProlif2013;46(6):677–684.）3）培养一周后提取蛋白质、RNA，通过Westernblot，RT-PCR检测DSPP、ALP的表达。检测结果如图1A、图1B和图2所示。图1A、图1B是hDPSCs与牙粉浸提液共培养一周后通过Westernblot实验检测细胞内DSPP、ALP蛋白表达水平结果，显示牙粉浸提液促进hDPSCs成牙成骨向分化。图2是hDPSCs与牙粉浸提液共培养一周后通过realtimeRT-PCR实验检测细胞内DSPP、ALP基因表达水平结果，验证了牙粉浸提液可以促进hDPSCs成牙成骨向分化。以上所述仅为本专利技术的实施例，并非因此限制本专利技术的专利范围，凡是利用本专利技术说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的
，均同理包括在本专利技术的专利保护范围内。本专利技术未涉及部分均与现有技术相同或可采用现有技术加以实现。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种煅烧牙粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）经过患者知情同意后，收集口腔医院外科门诊拔除的天然离体牙，去除牙齿表面附着的软组织、牙结石及龋坏组织，清洗干净后生理盐水中保存备用；2）将牙齿进行煅烧；3）煅烧后的牙齿在研钵中研磨成粉末状，用滤器过滤，直至所有牙粉均能通过滤器；4）收集成品牙粉置入密闭容器中备用。

【技术特征摘要】
1.一种煅烧牙粉的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）经过患者知情同意后，收集口腔医院外科门诊拔除的天然离体牙，去除牙齿表面附着的软组织、牙结石及龋坏组织，清洗干净后生理盐水中保存备用；2）将牙齿进行煅烧；3）煅烧后的牙齿在研钵中研磨成粉末状，用滤器过滤，直...

【专利技术属性】
技术研发人员：于金华，李娜，周洲，吴锦涛，李泽汉，
申请(专利权)人：南京医科大学附属口腔医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32