用于测定凝集反应结果的方法和用于测定凝集反应产物的微孔板技术

本发明专利技术涉及用于测定凝集反应结果的方法和在这样的方法中使用的微孔板。在离心步骤中通过分离材料例如凝胶材料或珠基体分离凝集的和非凝集的样品材料。通过比较各反应孔的顶侧和底侧的图像的颜色强度和/或灰度级确定是否发生凝集反应。比较两个图像的颜色强度和/或灰度级使自动测定可靠和稳定。此外，所述反应孔以二维陈列排列，这提供了高通量。

Method for determining the result of agglutination reaction and microplate for measuring agglutination product

The invention relates to a method for determining the result of agglutination reaction and a microplate used in such a method. The agglutinated and non agglutinated sample materials are separated in the centrifugation step by separating materials such as gel or beads. The agglutination reaction is determined by comparing the color intensity and/or gray level of the top and bottom images of each reaction hole. The color intensity and / or gray level of the two images are compared to make the automatic determination reliable and stable. In addition, the reaction holes are arranged in two dimensions, which provides high throughput.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于测定凝集反应结果的方法和用于测定凝集反应产物的微孔板
本专利技术涉及一种用于测定凝集反应结果的方法和用于测定凝集反应产物的微孔板(microplate)。
技术介绍
利用测试元件例如凝胶卡或珠盒(beadcassettes)用于血型鉴定、抗原或抗体检测，或其他相关免疫血液学应用或用途是已知的。这些测试元件通常包括支撑多个光学透明并垂直布置的柱或反应孔的平面基底。各反应孔保留一些惰性材料，如玻璃珠或凝胶材料，其混合在具有抗原或抗体的悬浮液中或与此结合。在使用中，患者样品被放置在惰性材料顶部上的反应中。然后将样品孵育并离心以加速凝集反应。红血细胞凝结成块并通过惰性材料基体进行过滤。惰性材料用作过滤材料。所述卡或盒通常包括一排柱或反应孔，并由透明材料制成。由于凝胶材料或珠基体的过滤功能，成块的血细胞与无阻尼血细胞彼此分离，并且被保留在过滤材料的顶部或正在渗透过滤材料并到达对应反应孔的底部截面。在其中所述成块血细胞与无阻尼血细胞分离的一排反应孔可用摄影机扫描，其中摄影机的取景方向指向那排柱或反应孔的外侧面。因此，可以使用一张图片同时检测所有反应孔。US8,076,126B2公开了适用于这种临床测试装置的单柱测试元件。每个测试元件包括具有惰性材料的单个反应孔，以及含有抗原或抗体或结合载体的抗原或抗体的悬浮液和覆盖所述反应孔的外包层或密封物。所述密封物是可穿透的以允许进入反应孔的内容物。提供了一种盒，其包含保持多个测试元件的框架，其中所述测试元件排成一排。WO95/31731公开了一种用于检测血型抗原和抗体的方法和装置。由此使用免疫反应性亲和层析技术检测这些抗原和抗体。所述方法包括将被检测的红细胞添加至含具有免疫球蛋白结合配体像例如蛋白质A、蛋白质G等的多个颗粒的反应管中。此步骤之后是离心和检测步骤，由此由侧视透视图分析管内容物。D.Harmening等人，“ModernBloodBankingandTransfusionPractices”，第五版，第15章：“AlternativeTechnologiesandAutomationinRoutineBloodBankTesting”2005年1月1日，MODERNBLOODBANKINGANDTRANSFUSIONPRACTICES5THEDITION，F:A:DAVISCOMPANY，USA，第293–302页，ISBN:0-8036-1248-6是常规血库测试技术的综述，讨论了使已知方法自动化的需要和益处。US2012/0288887A1公开了一种用于血细胞凝集图像测定的另一种方法和对应的装置。在该方法中，使用具有以二维阵列排布的多个反应孔的微孔板。所述反应孔包含具有基本上圆锥形的底壁。底壁的内表面形成为包含以同心圆形成的多级台阶的分层部分。在反应孔中，凝集反应进行，并且或多或少的台阶部分覆盖有反应产物，取决于凝集反应的结果。通过摄影机光学检测反应产物的直径。基于所测得的直径，可自动地测定凝集反应的结果。所述方法包括离心步骤和倾斜步骤，用于加速凝集反应和迫使反应产物向下进入锥形底壁。AshrafAgaylan等人，“AhighlysensitiveparticleagglutinationassayforthedetectionofP53autoantibodiesinpatientswithlungcancer”，CANCER，第110卷，11号，2007年1月1日，第2502-2506页，ISSN：0008-543X，DOI：10.1002/cncr.23057公开了一种用于来自大体积的血清样品的p53自身抗体、p53蛋白质和p53蛋白质-抗体复合物的使用超顺磁颗粒的高灵敏度和简单的颗粒凝集免疫试验。EP0797097A1涉及通过凝集检测样品液体中的分析物的方法，其中所述样品液体与凝集试剂接触且其中测定分析物和凝集试剂间的反应。此外，公开了用于实施所述方法的反应容器和试剂。对于分离，使用具有定义直径的通道的紧凑基体。EP1450159A2涉及凝集试验且特别地涉及用于实施这些试验的装置。由此，该装置包括分离段以分离凝集物。该分离段不使用头状(head-like)颗粒或凝胶，而是使用固定在基底的元件(参见0028])。此外，EP1450159A2公开了能够实施具有增加的速度和精确度的凝集试验的自动化系统。WO2009/120516A1涉及一种免疫诊断测试，包括：支撑构件，包含测试材料的至少一个测试柱，和外包层，其覆盖至少一个测试元件的顶部。在WO2009/120516A1中使用的管排列在卡中。US2004/002415A1涉及用于自动离心含生物材料的液体的自动化离心系统(参见摘要)。EP2124054A1公开了具有至少一个成像器的免疫诊断测试装置以在离心循环中提供预先凝集评估(参见题目)。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种用于测定凝集反应的结果的方法，其可自动地进行，其是可靠的，并提供高通量。本专利技术的另一个目的是提供一种微孔板，其允许实施具有高可靠性和高通量的测定凝集反应结果的方法。本专利技术的目的是通过如在独立权利要求中所限定的方法和的微孔板解决。本专利技术的有利实施方案在对应的从属权利要求中限定。一种用于测定凝集反应的结果的方法，包括以下步骤：-反应步骤，其允许样品在孔中与试剂反应，其中使用具有以二维阵列排布的多个孔的微孔板；-离心步骤，其使所述微孔板旋转，以使所述孔的底壁将相对于旋转轴向外排列，其中在离心步骤中，凝集的样品材料与非凝集的样品材料通过分离材料例如凝胶材料或珠基体分离；-成像步骤，其获取所述微孔板的顶侧的至少一幅图像和所述微孔板的底侧的至少一幅图像；-测定步骤，其测定所述孔中的样品对于凝集反应是阳性的还是阴性的，其中比较所述微孔板的顶侧图像和底侧图像中所述孔的颜色强度和/或灰度级。使用该方法，测定孔的顶侧和底侧处的某些孔的颜色强度和/或的灰度级的差异。这种差异可以以高精度检测。干扰条件，如背景光，通常对孔的顶侧和底侧的图片具有相同的影响以使它们通过比较对应反应孔的顶侧和底侧的颜色强度和/或灰度级而被消除。这使得该方法非常稳健和可靠。这种方法适用于用于自动测试成千上万样品而无需任何人为干涉的工业应用。此外，二维阵列的供应允许同时进行多个凝集反应和多个凝集反应的测定。由于从底侧以及从顶侧检测孔，仅使用一维排列的反应孔是没有必要的，正如从例如US8,076,126B2中已知的。优选地，在离心步骤中，微孔板围绕水平轴旋转。这便于离心步骤在自动系统中的集成。WO2013/117606A1和EP13179437.2中公开了被实施具有水平旋转轴的离心的样品。EP13179437.2还未被公开。文献WO2013/117606A1和EP13179437.2通过引入并入。根据一个优选的实施方案，孵育步骤可以在离心步骤前进行用于加速凝集反应。在离心步骤中通过分离材料，例如凝胶材料或珠基体，将反应产物，即凝集的探针样品部分，与反应离析物，即未凝集的探针样品部分，分离。所述珠基体作为过滤材料起作用，其使凝集样品部分特别地成块的血细胞保留在珠基体的顶部，其中非凝集的样品部分渗透所述珠基体并在对应孔的底部被收集。使用凝胶基体，非凝集的样品部分与凝集的样品部分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于测定凝集反应结果的方法，包括‑反应步骤，其允许样品在孔(2)中与试剂反应，其中使用具有以二维阵列排列的多个孔(2)的微孔板(1)；‑离心步骤，其使所述微孔板(1)旋转，以使所述孔(2)的底壁(4)将相对于旋转轴线(24)向外排列，其中在离心步骤中，凝集的样品材料与非凝集的样品材料通过分离材料分离；‑成像步骤，其获取所述微孔板(1)的顶侧的至少一张图像和所述微孔板(1)的底侧的至少一张图像；‑测定步骤，其测定所述孔(2)中的样品对于凝集反应是阳性的还是阴性的，其中比较所述微孔板的顶侧图像和底侧图像中所述孔的颜色强度和/或灰度级。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.09 EP 13187975.11.用于测定凝集反应结果的方法，包括-反应步骤，其允许样品在孔(2)中与试剂反应，其中使用具有以二维阵列排列的多个孔(2)的微孔板(1)；-离心步骤，其使所述微孔板(1)旋转，以使所述孔(2)的底壁(4)将相对于旋转轴线(24)向外排列，其中在离心步骤中，凝集的样品材料与非凝集的样品材料通过分离材料分离；-成像步骤，其获取所述微孔板(1)的顶侧的至少一张图像和所述微孔板(1)的底侧的至少一张图像；-测定步骤，其测定所述孔(2)中的样品对于凝集反应是阳性的还是阴性的，其中比较所述微孔板的顶侧图像和底侧图像中所述孔的颜色强度和/或灰度级。2.根据权利要求1所述的方法，其中在离心步骤中，微孔板(1)围绕水平轴线旋转。3.根据权利要求1所述的方法，其在离心步骤之前还包括孵育步骤。4.根据权利要求2所述的方法，其在离心步骤之前还包括孵育步骤。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述分离材料混合在含试剂的悬浮液中。6.根据权利要求4所述的方法，其中所述分离材料混合在含试剂的悬浮液中。7.根据权利要求1所述的方法，其中在所述分离材料的顶部提供所述试剂。8.根据权利要求6所述的方法，其中在所述分离材料的顶部提供所述试剂。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品包括血细胞样品。10.根据权利要求8所述的方法，其中所述样品包括血细胞样品。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述试剂包括预定的抗体和/或抗原。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述试剂包括预定的抗体和/或抗原。13.根据权利要求1所述的方法，其中所述微孔板在该方法开始时包含空的孔且在反应步骤之前用分离材料、所述试剂和所述样品材料填充至少一些所述孔。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述微孔板在该方法开始时包含空的孔且在反应步骤之前用分离材料、所述试剂和所述样品材料填充至少一些所述孔。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述分离材...

【专利技术属性】
技术研发人员：沃尔夫冈·曼，王兆强，
申请(专利权)人：烟台澳斯邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37