本发明专利技术属于药物新用途技术领域，具体涉及阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用。本发明专利技术通过应用LPS诱导氧化应激构建椎间盘退变模型，观察阿司匹林对椎间盘退变的治疗作用，通过观察氧化应激和椎间盘退变的各项指标来评估Aspirin对于椎间盘退变的治疗作用。并且通过Western blot来证明Aspirin减少氧化应激，缓解椎间盘退变的简要机制。椎间盘髓核组织发生氧化应激引起椎间盘退变，Aspirin通过抑制髓核组织的氧化应激进而减少细胞基质和二型胶原的分解来延缓椎间盘退变，从而为椎间盘退变的防治提供了新的途径。
Application of aspirin in the treatment of intervertebral disc degeneration
The invention belongs to the technical field of new drug use, in particular to the application of aspirin in the preparation of medicines for treating intervertebral disc degeneration. The present invention constructs a model of intervertebral disc degeneration by LPS-induced oxidative stress, observes the therapeutic effect of aspirin on intervertebral disc degeneration, and evaluates the therapeutic effect of Aspirin on intervertebral disc degeneration by observing the indexes of oxidative stress and intervertebral disc degeneration. Western blot was used to demonstrate the brief mechanism of Aspirin in reducing oxidative stress and relieving intervertebral disc degeneration. The oxidative stress in the nucleus pulposus of the intervertebral disc causes the degeneration of the intervertebral disc. Aspirin delays the degeneration of the intervertebral disc by inhibiting the oxidative stress in the nucleus pulposus and thereby reducing the decomposition of cell matrix and collagen type II, thus providing a new way to prevent and treat the degeneration of the intervertebral disc.
【技术实现步骤摘要】
阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用
本专利技术属于药物新用途
，具体涉及阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用。
技术介绍
椎间盘退变(intervertebraldiscdegeneration，IVDD)是现代社会引起人们腰背痛(Lowbackpain，LBP)的主要原因之一，并且给人的生理、心理和经济带来严重的负担，目前对于IVDD发生的具体机制仍不明确，此前研究主要集中于生物力学方向和炎症病理等方向，而近来学者开始关注髓核能量代谢与退变发生的联系。目前临床上非手术治疗的疗效并不明确，大多数患者后期仍需行髓核摘除手术，手术不可避免的具有一定创伤性，因此如何有效地防治IVDD已成为脊柱外科领域的一个重要课题。阿司匹林(Aspirin)是最常见的非甾体类抗炎药物，临床应用已百年余，是世界上应用最广泛的解热、镇痛和抗炎药，也是作为比较和评价其他药物的标准制剂。在体内具有抗血栓的作用，它能抑制血小板的释放反应，抑制血小板的聚集，临床上用于预防短暂脑缺血发作、心肌梗死、人工心脏瓣膜和静脉瘘或其他手术后血栓的形成。同时广泛应用于缓解轻度或中度疼痛，如牙痛、头痛、神经痛、肌肉酸痛及痛经，亦用于感冒、流感等发热疾病的退热，治疗风湿痛等。然而，Aspirin是否可以抑制椎间盘退变，目前尚未见相关报道，本专利技术由此而来。
技术实现思路
为了解决以上现有技术存在的问题，本专利技术的目的在于提供阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用，从而为预防和治疗椎间盘退变提供了一种新途径。本专利技术采用以下技术方案：阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用。一种治疗椎间盘退变的药物制剂，包括治疗有效量的阿司匹林和药学上可接受的辅料。优选的，所述的治疗椎间盘退变的药物制剂中阿司匹林的含量质量计为1～99％。优选的，所述的治疗椎间盘退变的药物制剂中阿司匹林的含量质量计为10～90％。优选的，所述的治疗椎间盘退变的药物制剂为冻干剂、片剂、颗粒剂或胶囊剂。本专利技术技术方案首先采取脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导大鼠髓核细胞产生氧化应激，应用Aspirin干预来观察是否其能延缓髓核细胞的退变，应用流式细胞技术、细胞免疫荧光、RT-PCR、Westernblot等技术测定：活性氧簇(ROS)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、II型胶原(CollagenII，ColII)、蛋白聚糖(Aggrecan)等的水平，评估Aspirin对椎间盘退变的影响及其作用机制。体外部分：本专利技术人通过使用动物手术显微镜，在无菌条件下，提取5只SD大鼠的第7-8尾椎(Co7-8)、第8-9尾椎(Co8-9)和第9-10尾椎(Co9-10)的髓核组织，进行髓核细胞原代培养，并建立细胞模型。细胞实验分组：1.空白组：1mLF12-DMEM培养基。2.对照组(Vehicle组)：1mLF12-DMEM培养基+LPS(1μg/mL)。3.实验组：Aspirin(25μg/mL或5μg/mL)预处理3h，后更换1mLF12-DMEM培养基+LPS(1μg/mL)+Aspirin(25μg/mL或5μg/mL)，培养12h。应用流式细胞、荧光探针检测各组ROS的表达量，应用RT-PCR检测iNOS、ColII、Aggrecan基因表达量，应用Westernblot检测iNOS、ColII蛋白表达量，应用细胞免疫荧光检测MMP-3、ColII在细胞内的分布情况。体内部分：为排除实验动物个体差异，本专利技术人通过使用20G针头对20只SD大鼠的尾椎进行针扎穿刺来建立椎间盘退变模型。分组如下：第7-8尾椎(Co7-8)对照组；第8-9尾椎(Co8-9)，阳性对照；第9-10尾椎(Co9-10)阴性对照，并将这20只大鼠随机均分为Aspirin高剂量组(100μg/mL，n＝10)，Aspirin低剂量组(10μg/mL，n＝10)。动物实验过程中，实验组成员在穿刺后低1d、3d、5d进行局部注射操作。于术后7d、14d每组随机选取5只大鼠(n＝5)进行X-ray和MRI检查，测量椎间盘高度并分析MRI信号强度。随后处死并收集标本进行组织学检查，观察椎间盘的形态学变化，以及通过免疫组化染色测量髓核内ColII和MMP-3含量来分析椎间盘退变程度。有益效果：本专利技术提供了一种阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用，本专利技术体外结果表明，LPS能够明显增加氧化应激产物ROS的表达。与Control组相比，Aspirin(25μg/mL)能够显著降低ROS的表达(p<0.05)。RT-PCR证实LPS能够显著增加iNOS的基因表达，同时降低ColII和Aggrecan基因的表达。而Aspirin能够逆转LPS的上述作用，并且在高剂量治疗组效果更明显，与低剂量组相比，差异有统计学意义(p<0.05)。另外，相比Control组，Aspirin治疗还有效改善了细胞形态学测量结果：MMP3在细胞质中表达相比对照组明显减少，同时缓解了ColII在细胞质中的丢失，且高剂量组较低剂量组改善更为明显，差异有统计学意义(p<0.05)。Westernblot证实，与Control组相比Aspirin能够激活AMPK通路，明显改变p-AMPK/AMPK比例(p<0.05)，同时减低iNOS的蛋白表达量(p<0.05)，缓解LPS导致的ColII的蛋白丢失(p<0.05)。本专利技术体内结果表明，Vehicle组与Control组相比，椎间盘高度于7d开始出现明显下降(p<0.05)。MRI检查同X-ray检查相似，也在7d就开始出现信号强度的减弱(p<0.05)。Aspirin治疗有效的延缓了椎间盘高度的下降(p<0.05)，并且相比于Vehicle组来说，MRI信号强度更强(p<0.05)。在高剂量治疗组作用更明显，与低剂量组相比，差异有统计学意义(p<0.05)。另外，相比于Vehicle组，组织学染色发现，Vehicle组和Control组相比，髓核容积变小，髓核细胞明显丢失，纤维环呈现皱褶压缩。Aspirin治疗有效的保证了髓核细胞的含量，纤维环较Vehicle组来说更加规则。通过免疫组化染色发现Aspirin治疗组比Vehicle组含有更多的ColII和更少的MMP3。进一步证明了Aspirin治疗对椎间盘退变过程中细胞外基质丢失的保护作用。该专利技术证实阿司匹林对椎间盘退变有一定的防治作用，可减轻髓核细胞的氧化应激。可作为治疗椎间盘退变的一种新手段。相比采用本领域常规的方法制备成适用于细胞实验的药物制剂，本专利技术优选通过人工合成的方式制备成Aspirin颗粒，用无水乙醇溶解，无菌过滤后，完全培养基稀释进行细胞培养，这样可以避免诸如DMSO、丙醇、氯仿等溶剂对细胞带来的潜在毒理作用或对实验的干扰作用，在本专利技术中Aspirin药物组合物的药物制剂中，根据不同的制剂形式或制剂规格，所述组合物在制剂中的含量可以为质量计为1％～99％，优选为10％～90％；本专利技术所述的药学上可接受的载体为组合物中制剂使用本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.阿司匹林在制备治疗椎间盘退变药物中的应用。2.一种治疗椎间盘退变的药物制剂，其特征在于，包括治疗有效量的阿司匹林和药学上可接受的辅料。3.根据权利要求2所述的一种治疗椎间盘退变的药物制剂，其特征在于，所述阿司匹林的含量质量计为1～...
【专利技术属性】
技术研发人员：耿德春，毛海青，刘禹，郭晓斌，林佳益，柏家祥，郁彬清，沈冀宁，杨惠林，
申请(专利权)人：苏州大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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