一种具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法及应用，具体的红豆杉多糖的制备方法包括以下步骤：A)预处理；B)水提醇沉；C)洗涤；D)去蛋白；E)透析；F)冷冻干燥。并且公开了使用该方法制备得到的红豆杉多糖在降尿酸的应用，以及公开了使用该方法制备得到的红豆杉多糖而制备得到的降尿酸的药剂。本发明专利技术提取红豆杉多糖成本低，提取率以及纯度高，得到的红豆杉多糖具有降低高尿酸的功效，对肾脏有保护作用。

【技术实现步骤摘要】
一种具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法及其应用
本专利技术属于医药
，尤其涉及一种具有降尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法及应用。
技术介绍
高尿酸血症是指血液中的尿酸浓度超出正常范围的一种机体状态，一般认为男性血液中的尿酸浓度大于400μmol/L时，女性血液中的尿酸浓度大于360μmol/L时应考虑为高尿酸血症。近年的研究表明，高尿酸血症不仅是痛风最重要的生化基础，而且也是引起高血压、高脂血症、动脉粥样硬化、肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征心血管疾病发生和死亡的重要因素，已成为威胁人类健康的主要代谢性疾病之一。目前临床上治疗高尿酸血症的化学药物，主要以抑制尿酸生成的别嘌醇和促尿酸排泄药丙磺舒、苯溴马隆等药物为主。这些药物不良反应多，患者耐受性差，极大影响了高尿酸血症的治疗。近些年，中医药在降低血尿酸水平方面取得了很大成效。中国专利公开号为CN101879264A的专利技术专利公开了“一种用于降尿酸的中药组合物”，以土茯苓、泽泻为原料提取各种成分，制备成口服制剂、注射剂，用于降尿酸；肖福洲“降低痛风患者尿酸的药茶”，以金钱草、车前草、当归和苦丁茶为原料，粉碎成粉，制成药茶，患者每日饮茶，可降尿酸；伊莲“预防和治疗高尿酸血症的中药制剂和组合物及其制备方法”，以“黄柏、苍术、土茯苓、忍冬藤”配比而成或者提取其中的生物碱、挥发油和黄酮等配比而成，发现具有显著降尿酸活性；从其中我们可以看出，土茯苓、泽泻为利水消肿药；车前草为利尿通淋药；金钱草为利湿退黄药；这些均可归类为利水渗湿药。可见在中药方面治疗高尿酸是以利水渗湿为主。红豆杉作为药材，具有利水渗湿的作用，而中药治疗高尿酸又以水煎为主，经研究发现红豆杉除可以提取抗癌药物紫杉醇外，其水煎剂的主要成分为红豆杉多糖，故本专利技术正好立足于这一点，有效利用在工业上已经提取完紫杉醇和10-DABIII后的红豆杉枝叶为原料，提取红豆杉多糖，并做纯化处理，不仅节约资源，而且进一步挖掘红豆杉多糖的药用价值，以期实现珍稀红豆杉植物资源的合理以及最大化的有效应用，为人类医药健康领域资源的开发提供更多可能性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种红豆杉多糖及其制备方法，实现其在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。本专利技术提供的一种红豆杉多糖的制备方法，其包括以下步骤：A)预处理取已经提取完紫杉醇和10-DABIII之后的红豆杉干废料，粉碎，加乙醇，进行索氏提取，过滤收集药渣备用。B)水提醇沉步骤A)中所述药渣加入适量纯化水，搅拌至药渣被水浸透，索氏提取，滤过，减压浓缩；浓缩液加入乙醇，低温静置，滤过得到提取物。C)洗涤步骤B)中所得提取物依次缓慢滴加无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯，干燥后得粗品。D)去蛋白步骤C)中所得粗品溶解于适量热水中，以Sevage法加入1倍体积的正丁醇/石油醚混合液，搅拌，离心，取下层水液，得到去除蛋白后的多糖溶液。E)透析步骤D)中所得多糖溶液，采用流水透析法去除溶液中小分子物质。F)冷冻干燥步骤E)中透析后的溶液减压浓缩，预冷冻后冷冻干燥，得到红豆杉粗多糖。优选的，所述步骤A)中加入80％乙醇索氏提取的料液比为1:5-15。本案在水提醇沉前先用80％乙醇预处理红豆杉粉末，目的是为了去除药材中残存的脂溶性化合物以及部分单糖，这样可以提高步骤B药材多糖提取效率，增加收得率并且提高红豆多糖的纯度。乙醇索氏提取的料液比会影响到除杂的程度，本专利技术经过多次尝试，确定80％乙醇索氏提取的料液比为1:5-15时具有好的除杂效率，并且成本最低，进一步优选的80％乙醇索氏提取的料液比为1:8-12，进一步优选1:10。步骤B)进行两次水提取，第一次加入纯化水料液比为1:8-12，第二次加入纯化水料液比为1:5-10，步骤B)中减压浓缩至生药浓度为0.8-15g/mL；浓缩液加入3-6倍体积乙醇，乙醇浓度85-97％，低温静置的温度为2-8℃，静置时间15-36h。水提醇沉是目前药材多糖提取最常用的方法，方法大同小异，但是对提取工艺缺存在较大差异，在保持提取率的情况下提高生产效率、降低成本，本专利技术进行两次水提取，第一次加入纯化水料液比为1:8-12，第二次加入纯化水料液比为1:5-10，进一步优选的第一次料液比为1:10，第二次为1:8。为了保证洗涤步骤能有效去除杂质减少洗涤时多糖损失，专利技术人通过观察洗涤过程洗涤液颜色变化以及洗涤液中多糖含量测试的方法，来考察最佳洗涤方法，确认洗涤工艺。最终确定的洗涤方法为以此加入无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯，并且保证的体积都是南方红豆杉投料质量的0.05-0.2倍，优选为0.1倍。步骤E)中透析法使用的透析袋截留分子量8000-14000。本专利技术还提供了一种红豆杉多糖在制备治疗高尿酸血症药物中的应用。红豆杉多糖作为主要活性成分在制备高尿酸血症药物中，其可以制成被药学上接受的各种制剂，制剂的剂型包括但不限于：灌肠剂；片剂；胶囊剂，例如硬胶囊剂；口服液；口含剂；颗粒剂；冲剂；丸剂；滴丸剂；散剂；膏剂；丹剂；混悬剂；粉剂；溶液剂；栓剂；搽剂；霜剂；喷雾剂；粉雾剂；气雾剂；滴剂；锭剂以及贴剂。制备各种剂型的辅料为药学领域常规的药物辅料，辅料包括但不限于：粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、湿润剂和表面活性剂等。上述的应用中，对本领域技术人员来说，可按药学领域的常规生产方法生产，红豆杉多糖的活性成分含量在1％-99.5％。本专利技术的使用量可以根据给药途径，患者的体重、高尿酸血症的严重程度等变化，其服用量可以是0.01-2g/kg,可以一次或多次给药。本专利技术利用已经提取完紫杉醇和10-DABIII之后的红豆杉干废料作为提取红豆杉多糖的原料，降低成本，同时增加了红豆杉的利用率，并且通过工艺的设置提高了红豆杉多糖的提取率以及纯度，同时验证了提取得到的红豆杉多糖无毒性。本专利技术发现了红豆杉多糖对降低高尿酸的功效，并制备出了相应的制剂，并验证了用红豆杉多糖为活性成分制成的药物在高尿酸小鼠动物试验中，显示出红豆杉多糖优异的降尿酸及其降肌酐的效果，并对肾脏有保护作用；用红豆杉多糖为活性成分制成药物在临床实验中表现红豆杉多糖有明显的降尿酸效果。具体实施方式为更好地了解本专利技术，下面通过以下实施例对本专利技术作进一步具体的阐述，但不可理解为对本专利技术的限定。实施例1南方红豆杉总多糖制备工艺预处理方法探索专利技术人在水提醇沉前先用80％乙醇预处理红豆杉粉末，目的是为了去除药材中残存的脂溶性化合物以及部分单糖，这样可以提高步骤B药材多糖提取效率，增加收得率。专利技术人分别对比四种料液比1:5、1:10、1:15、1:20，发现料液比为1:5时，除杂不完全，而料液比为1:15和1:20虽然效果非常好，但是会提高生产成本，所以优选料液比为1:10。实施例2南方红豆杉总多糖制备工艺水提醇沉方法探索水提醇沉是目前药材多糖提取最常用的方法，方法大同小异，但是对提取工艺却需要试验验证，在保持提取率的情况下提高生产效率、降低成本。专利技术人采用料液比1：5、1:8、1:10、1:15以及提取1、2、3次，以提取物提取率为参考标准，对提取工艺进行探索，确认最佳提取工艺：提取两次，第一次料液比为1:10，第二次为1:8。实施例3南方红豆杉总多糖制备工艺洗涤方法探索为了保证洗涤步骤能有效去除杂质减少本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)预处理取已经提取完紫杉醇和10‑DABIII之后的红豆杉干废料，粉碎，加乙醇进行索氏提取，过滤收集药渣备用；B)水提醇沉步骤A)中所述药渣加入适量纯化水，搅拌至药渣被水浸透，索氏提取，滤过，减压浓缩；浓缩液加入乙醇，低温静置，滤过得到提取物；C)洗涤步骤B)中所得提取物依次缓慢滴加无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯，干燥后得粗品；D)去蛋白步骤C)中所得粗品溶解于适量热水中，以Sevage法加入正丁醇/石油醚混合液，搅拌，离心，取下层水液，重复上述操作2‑4次，得到去除蛋白后的多糖溶液；E)透析步骤D)中所得多糖溶液，采用流水透析法去除溶液中小分子物质；F)冷冻干燥步骤E)中透析后的溶液减压浓缩，预冷冻后冷冻干燥，得到红豆杉粗多糖；步骤A)中加乙醇进行索氏提取料液比为1:8‑12。

【技术特征摘要】
1.一种具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A)预处理取已经提取完紫杉醇和10-DABIII之后的红豆杉干废料，粉碎，加乙醇进行索氏提取，过滤收集药渣备用；B)水提醇沉步骤A)中所述药渣加入适量纯化水，搅拌至药渣被水浸透，索氏提取，滤过，减压浓缩；浓缩液加入乙醇，低温静置，滤过得到提取物；C)洗涤步骤B)中所得提取物依次缓慢滴加无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯，干燥后得粗品；D)去蛋白步骤C)中所得粗品溶解于适量热水中，以Sevage法加入正丁醇/石油醚混合液，搅拌，离心，取下层水液，重复上述操作2-4次，得到去除蛋白后的多糖溶液；E)透析步骤D)中所得多糖溶液，采用流水透析法去除溶液中小分子物质；F)冷冻干燥步骤E)中透析后的溶液减压浓缩，预冷冻后冷冻干燥，得到红豆杉粗多糖；步骤A)中加乙醇进行索氏提取料液比为1:8-12。2.一种如权利要求1所述的具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法，其特征在于，步骤A)中粉粹红豆杉干废料的目数为50-100目，乙醇浓度为75-90％，加乙醇进行索氏提取料液比为1:10，提取时间为1-5h；步骤B)进行两次水提取，第一次加入纯化水料液比为1:8-12，第二次加入纯化水料液比为1:5-10，步骤B)中减压浓缩至生药浓度为0.8-1.5g/mL；浓缩液加入3-6倍体积乙醇，乙醇浓度85-97％，低温静置的温度为2-8℃，静置时间15-36h。3.一种如权利要求1所述的具有降高尿酸作用的红豆杉多糖的制备方法，其特征在于，步骤C)中加入无水乙醇、丙酮、乙酸乙酯的体积是南方红豆杉投料质量的0.05-0.2倍；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓，王赞，
申请(专利权)人：武汉紫杉红技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42