杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法技术

本发明专利技术公开了杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，杞菊地黄口服液多成分定量方法的建立包括以下步骤：步骤1、杞菊地黄口服液供试品溶液的制备；步骤2、混合对照品溶液的制备：步骤3、分别精密吸取供试品溶液和混合对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图；步骤4，将步骤3中获得的混合对照品和杞菊地黄口服液色相色谱图，根据保留时间、峰面积，计算样品中各个成分的含量。本发明专利技术所提供的杞菊地黄口服液多成分定量分析方法，能全面，客观地表征杞菊地黄口服液的质量。本发明专利技术提供的多成分定量的检测方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点。

Quantitative determination of Qi and Rehmannia oral liquid by multi-component method

The invention discloses a multi-component quantitative detection method of Qiju Dihuang oral liquid, and the establishment of the multi-component quantitative method of Qiju Dihuang oral liquid comprises the following steps: step 1, preparation of the test solution of Qiju Dihuang oral liquid; step 2, preparation of the mixed reference solution; step 3, precise absorption of the test solution and mixing of the test solution respectively The reference solution was injected into the liquid chromatograph to record the chromatogram. Step 4, the chromatogram of the mixed reference substance and Qiju Dihuang oral liquid obtained in step 3 was calculated according to the retention time and peak area. The multi-component quantitative analysis method of Qiju Dihuang oral liquid provided by the invention can comprehensively and objectively characterize the quality of Qiju Dihuang oral liquid. The multi-component quantitative detection method provided by the invention has the advantages of simplicity, stability, high precision and good reproducibility.

【技术实现步骤摘要】
杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法
本专利技术涉及一种中药的检测方法，具体涉及杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法。
技术介绍
杞菊地黄丸对应治疗阴虚火旺外加清肝明目杞菊地黄丸偏于养肝明目，适用于肝肾阴虚、两目昏花、视物模糊之证。阴虚火旺是指阴阳失调、阴虚则阳亢并生热化(成)火，出游阴虚内热现象外，尚有面红，目赤、咽干、喉痛、出血、心烦、苔少、舌质红瘦、脉细数等证。阴虚火旺是指脏腑阴分亏虚，失于滋养，虚热内生的表现。心、肝、肺、脾、肾均可出现此种情况。临床以肾阴虚较为常见，症状包括潮热盗汗、心烦、失眠，或男子早泄、遗精，女子经少或经闭，或骨蒸发热、腰膝酸软、耳鸣等。肝开窍于目，肝血上注于目则能视。枸杞子补肾益精，养肝明目；菊花善清利头目，宣散肝经之热。八种药物配伍组合共同发挥滋阴、养肝、明目的作用滋肾养肝。用于肝肾阴亏，眩晕耳鸣，羞明畏光，迎风流泪，视物昏花。目前关于杞菊地黄口服液的质量鉴定方法仅仅测定单个或几个有效成分的含量，不能全面客观的评价杞菊地黄口服液的质量。本专利技术采用高效液相色谱法建立杞菊地黄口服液中的13个成分的定量检测方法，为杞菊地黄口服液的药材鉴别、质量评价以及质量标准的制定具有重要的意义。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种杞菊地黄口服液的多成分定量检测方法，该检测方法可以客观、全面、准确的评价杞菊地黄口服液的质量，对控制杞菊地黄口服液的质量和保证临床疗效具有重要意义。技术方案：为了实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、杞菊地黄口服液供试品溶液的制备：取杞菊地黄口服液，精密量取，置蒸发皿中，水浴挥干，加入甲醇超声处理(功率150W，频率20kHz)30分钟，放冷，过滤得清液，定容，过0.45μm微孔滤膜，即得。步骤2、酸类混合对照品溶液的制备：取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹酚酸B、丹皮酚适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液，摇匀，即可。步骤3、皂苷类混合对照品溶液制备取5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、木樨草苷适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含5-HMF80ug、莫诺苷120ug、马钱苷10ug、芍药苷300ug、毛蕊花糖苷10ug、木樨草苷30ug的混合对照品溶液，摇匀，即可；步骤4、分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤5，将步骤4中获得的混合对照品和杞菊地黄口服液色相色谱图，根据保留时间、峰面积，计算样品中各个成分的含量。作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，步骤1杞菊地黄口服液供试品溶液制备方法为：取3批次的取杞菊地黄口服液10mL，精密量取，置蒸发皿中，水浴挥干，加入5ml甲醇超声处理(功率150W，频率20kHz)30分钟，放冷，过滤得清液，定容至10mL，过0.45μm微孔滤膜，即得供试品溶液。作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，步骤2酸类混合对照品溶液的制备：取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹酚酸B、丹皮酚适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含绿原酸90ug、隐绿原酸60ug、异绿原酸B10ug、异绿原酸A50ug、异绿原酸C50ug、丹酚酸B40ug、丹皮酚50ug的混合对照品溶液，摇匀，即可。作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，步骤3皂苷类混合对照品溶液制备取5-HMF、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、木樨草苷适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含5-HMF80ug、莫诺苷120ug、马钱苷10ug、芍药苷300ug、毛蕊花糖苷10ug、木樨草苷30ug的混合对照品溶液，摇匀，即可。作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，步骤4中，液相色谱条件为：液相色谱条件为：色谱柱：YMC-PackODS-A(250×4.6mm，5um，12nm)；流动相为0.1％甲酸-乙腈溶液，梯度洗脱(如表1)，二极管阵列检测器(DAD)210-800nm全波长扫面，检测波长：254nm和325nm，柱温35℃，流速1mL/min，进样体积：10uL。表1梯度洗脱程序程序时间(min)乙腈(％)0.1％甲酸水溶液(％)105952105953201090490307071055545作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，同时检测酚酸类和皂苷类等13个成分的含量。作为优选方案，以上所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，步骤5，精密吸取酚酸类混合对照品溶液和皂苷类混合标准品溶液各1、2、4、8、10、15、20μL进样，测定峰面积，以对照品进样量x(μg)为横坐标，峰面积y为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程:标准曲线多成分定量检测条件的优化：1、在样品溶液的制备优化方面本专利技术通过对样品蒸干、稀释、萃取等处理后使用不同提取溶剂(甲醇、水、70％乙醇水溶液、85％乙醇水溶液、95％乙醇、无水乙醇)复溶、进行实验比较，结果发现蒸干后复溶所得的谱图差异响应值较高，极限平稳，故采用蒸干后复溶的方法；对复溶溶剂的考察中发现甲醇提取物色谱图信息量最多，成分含量最高；所以选用水浴挥干，加甲醇超声处理。2、在色谱条件进行优化方面本专利技术采用二极管阵列检测器对检测波长进行考察，提取254nm、280nm、284nm、300nm、325nm处的色谱图，结果发现检测波长为254nm时，皂苷类成分色谱图所包含的信息量最全面且基线平稳，故选254nm为皂苷类成分检测波长；发现检测波长为325nm时，酚酸类成分色谱图所包含的信息量最全面且基线平稳，故选325nm为酚酸类成分检测波长；本专利技术对流速(1ml/min、0.8ml/min、0.7ml/min、0.6ml/min、0.5ml/min)进行筛选，因杞菊地黄口服液中的成分中多存在同分异构体及其它极性极为相似的成分，故高流速下无法将其分开，故在低流速下分离效果较好，最终在流速为1ml/min多次等梯度条件下将极性相似的物质分开。本专利技术比较了甲醇-水，乙腈-水，乙腈-0.1％甲酸，乙腈和0.05％磷酸水，乙腈-0.1％磷酸水5个不同洗脱系统在不同梯度下的洗脱效果。结果发现以乙腈和0.1％甲酸水，为流动相时，杞菊地黄口服液中各成分能达到很好的分离效果，故最终选定以乙腈和0.1％甲酸水，为流动相。有益效果：1、本专利技术根据杞菊地黄口服液中所含的活性成分的结构性质特点，通过大量实验筛选出最佳的流动相组成，梯度洗脱程序、流速，检测波长、色谱柱，柱温等分析条件，经多次实验验证表明，本专利技术提供的杞菊地黄口服液多成分定量检测方法，可以全面、客观、准确的检测和评价杞菊地黄口服液的质量，为保证临床杞菊地黄口服液疗效具有重要意义。2、用本专利技术所提供的方法所建立的杞菊地黄口服液多成分定量，能有效地表征杞菊地黄口服液的质量，能客观体现各个构成指纹特征峰的前后顺序和相互关系，注重整体面貌特征，既可避免因测定个别化学成分而判定杞菊地黄口服液质量的片面性，又可减少为质量达标而人为处理的可能性。3、本专利技术提供的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、杞菊地黄口服液供试品溶液的制备：取杞菊地黄口服液，精密量取，置蒸发皿中，水浴挥干，加入甲醇超声处理，放冷，过滤得清液，定容，过0.45μm微孔滤膜，即得；步骤2、酸类混合对照品溶液的制备：取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹酚酸B和丹皮酚适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液，摇匀，即可；步骤3、皂苷类混合对照品溶液制备：取5‑羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷和木樨草苷适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液，摇匀，即可；步骤4、分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤5，将步骤4中获得的混合对照品和杞菊地黄口服液供试品的液相色谱图，根据保留时间、峰面积，计算杞菊地黄口服液供试品中各个成分的含量。

【技术特征摘要】
1.一种杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、杞菊地黄口服液供试品溶液的制备：取杞菊地黄口服液，精密量取，置蒸发皿中，水浴挥干，加入甲醇超声处理，放冷，过滤得清液，定容，过0.45μm微孔滤膜，即得；步骤2、酸类混合对照品溶液的制备：取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹酚酸B和丹皮酚适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液，摇匀，即可；步骤3、皂苷类混合对照品溶液制备：取5-羟甲基糠醛、莫诺苷、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷和木樨草苷适量，精密称定，加甲醇制成混合对照品溶液，摇匀，即可；步骤4、分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图；步骤5，将步骤4中获得的混合对照品和杞菊地黄口服液供试品的液相色谱图，根据保留时间、峰面积，计算杞菊地黄口服液供试品中各个成分的含量。2.根据权利要求1所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，步骤1杞菊地黄口服液供试品溶液制备方法为：取3个不同批次杞菊地黄口服液10mL，精密量取，置蒸发皿中，水浴挥干，加入5ml甲醇超声处理30分钟，超声功率150W，频率20kHz，放冷，过滤得清液，定容至10mL，过0.45μm微孔滤膜，即得。3.根据权利要求1所述的杞菊地黄口服液多成分定量的检测方法，其特征在于，步骤2酚酸类混合对照品溶液的制备：取绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑艳萍，蔡宝昌，王欣玲，金俊杰，秦昆明，杨冰，孙戡平，彭思颖，
申请(专利权)人：江苏海昇药业有限公司，南京海昌中药集团有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32