二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法技术

本发明专利技术公开了一种复方南星止痛膏双酯型生物碱的检测方法。该方法包括：步骤一，供试品溶液的制备，取复方南星止痛膏样品经提取、除杂，制得供试品溶液；步骤二，吸取供试品溶液，采用二维液相色谱方法进行双酯型生物碱的测定。本发明专利技术提出的方法准确度和稳定性均较好，有效改善了复方南星止痛膏中待测组分的分离度，极大提高了检测灵敏度，对制剂中的三种双酯型生物碱进行准确定量分析，提高产品的质量控制水平，并为临床用药提供理论支持。

Two dimensional liquid chromatography for the determination of compound Nan Xing Zhi Tong ointment

The invention discloses a detection method for compound nano star pain relieving paste diester type alkaloid. The method comprises the following steps: the preparation of the sample solution, the extraction and impurity removal of the sample of Compound Nanxing Analgesic Ointment, the preparation of the sample solution; the second step, the absorption of the sample solution, using two-dimensional liquid chromatography method for the determination of diester alkaloids. The method has good accuracy and stability, effectively improves the separation degree of the components to be tested in the compound Nanxing Zhitong ointment, greatly improves the detection sensitivity, carries on the accurate quantitative analysis to the three kinds of diester alkaloids in the preparation, improves the quality control level of the product, and provides the theoretical support for clinical medication.

【技术实现步骤摘要】
二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法
本专利技术涉及中药
，具体涉及一种二维液相色谱检测复方南星止痛膏的方法。
技术介绍
近年来，随着商品化二维液相色谱仪器技术的逐渐成熟，出现了中心切割、多中心切割和全二维液相色谱等结合多种分离模式的二维液相色谱，其可分为在线和离线两种方式，其中在线二维液相色谱可以选择性的将一维馏分转移至第二维色谱柱中进行分析，能很好地解决常规色谱分离能力有限的问题。复方南星止痛膏由生天南星、生川乌、丁香、肉桂、白芷、细辛、川芎、徐长卿、乳香、没药、樟脑、冰片12味药组成，是传承祖国多部医学经典而成的止痛组方，具有散寒除湿、活血止痛之功效。生川乌作为组方中的君药，具有祛风除湿、温经止痛之功效，其中双酯型生物碱作为其特征活性成分，具有镇痛作用的同时还具有较强的毒性。由于复方南星止痛膏的成分极其复杂，且含有凡士林、液体石蜡等辅料，样品的前处理方法较为繁琐，该制剂的现行质量标准仅采用HPLC法对其中的次乌头碱进行含量测定。因此，建立同时测定制剂中多个双酯型生物碱的检测方法非常必要。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术旨提出一种复方南星止痛膏双酯型生物碱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，供试品溶液的制备，取复方南星止痛膏样品经提取、除杂，制得供试品溶液；步骤二，吸取供试品溶液，采用二维液相色谱方法进行双酯型生物碱的测定。具体地，所述二维液相色谱方法采用以下方法进行：一维色谱方法：C18色谱柱一，流动相A为甲醇，流动相B为0.001～0.02％的二乙胺或三乙胺，流速0.05～0.2mL·min-1，柱温15～20℃，用40～70％的流动相A梯度洗脱40min，检测波长230～240nm，进样量1～3μL，样品盘温度为8～20℃；阀切换方法：阀切换时间为所述双酯型生物碱起始出峰时间至结束；二维色谱方法：C18色谱柱二，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为0.005～0.02％的磷酸或二乙胺，流速0.5～0.8mL·min-1，柱温35～45℃，用30～90％的流动相A梯度洗脱4min，检测波长230～240nm。优选地，所述二维液相色谱方法采用以下方法进行：一维色谱方法：所述C18色谱柱一规格为1×50mm，1.7μm，流动相A为甲醇，流动相B为0.008％DEA，流速为0.1mL·min-1，柱温18℃；梯度洗脱，0～12min，40～58％A，12～25min，58％～58％A，25～35min，58％～65％A，35～40min，65％～70％A，40～42min，70％～70％A，42～45min，70％～100％A，45～48min，100％～40％A；检测波长235nm，进样量1μL，样品盘温度为10℃；阀切换方法：阀切换时间为所述双酯型生物碱起始出峰时间至结束；二维色谱方法：所述C18色谱柱二规格为3.0×100mm，1.7μm，流动相A为乙腈，流动相B为0.01％磷酸，流速为0.7mL·min-1，柱温40℃；梯度洗脱，0～1min，30％～38％A，1～3min，38％～48％A，3～4min，48％～90％A，4～4.2min，90％～30％A；检测波长235nm。具体地，所述C18色谱柱一和所述C18色谱柱二选自WatersXBridgeBEHC18色谱柱，进一步地：所述步骤一中的提取、除杂为：取本品加甲醇适量，研匀，定量转移至量瓶，超声处理，加甲醇稀释至刻度，摇匀滤过，弃去初滤液，取续滤液，减压回收至干；加入盐酸溶液，微热使残渣溶解，摇匀，置冰箱中冷藏，滤过，取续滤液，置分液漏斗中，用氯仿分次提取，合并氯仿提取液，用无水碳酸钠脱水，滤液减压回收至干，残渣用甲醇溶解并定容，摇匀，离心，即得。具体地，所述提取、除杂方法为，取本品10片，除去衬布，刮取药膏，取相当于2片量约8g，精密称定，置研钵中，加甲醇适量，研匀，定量转移至100mL量瓶中，超声处理1h，放置1h，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液50mL，减压回收至干。精密加入2％的盐酸溶液100mL，微热使残渣溶解，摇匀，放冷，置冰箱中冷藏1h，滤过，精密量取续滤液50mL，置分液漏斗中，用氯仿分次提取(40、40、40、30mL)，合并氯仿提取液，用无水碳酸钠脱水，滤液减压回收至干，残渣用甲醇溶解并定容至2mL，摇匀，14000r·min-1离心10min，即得。进一步地，所述双酯型生物碱包括但不限于新乌头碱、乌头碱和次乌头碱。本专利技术提出了一种复方南星止痛膏的检测方法，其特征在于，所述方法采用二维液相色谱方法对双酯型生物碱进行定性或定量检测。具体地，所述二维液相色谱方法包括一维色谱分析和二维色谱分析；其中，所述一维色谱分析选择甲醇-0.001～0.02％的二乙胺或三乙胺作为其流动相体系。进一步地，所述二维色谱分析选择甲醇或乙腈-0.005～0.02％的磷酸或二乙胺作为其流动相体系。优选地，以甲醇-0.008％DEA为所述一维色谱分析的流动相体系，以乙腈-0.01％磷酸为所述二维色谱分析的流动相体系。本专利技术的提取分离方法具有如下优点：(1)在线二维液相色谱可以选择性地将一维馏分转移至第二维色谱柱中进行分析，能很好地解决常规色谱分离能力有限的问题，使常规检测方法中难以检测的新乌头碱、乌头碱也能检测出来。(2)由于本专利技术提出的方法对样品前处理中的除杂要求不高，因而可以简化样品前处理方法。(3)在本专利技术提出的检测条件下，可检测到明显的新乌头碱和乌头碱，极大地排除了杂质成分的干扰、改善分离效果并提高检测灵敏度。(4)本专利技术对复方南星止痛膏的检测方法重复性良好，能够有效分离待测组分，测定结果稳定、准确，可应用于制剂中多个双酯型生物碱类成分的同时定量。本专利技术提出的方法有效改善了复方南星止痛膏中待测组分的分离度，极大提高了检测灵敏度，提高产品的质量控制水平，并为临床用药提供理论支持。(5)在样品溶液制备过程，对复方南星止痛膏的提取、除杂过程，能够使杂质降到最低，提高后续的分离效果。(6)本专利技术的检测方法对传统液相色谱的优化，提高系统的峰容量，增强色谱系统的分离能力，对制剂的复杂组分进行快速分离。由于其在线分析模式的建立，消除了人为操作的误差，加快了样品的分析效率，保证了样品分析结果的准确性和稳定性，有效解决了复方南星止痛膏组分中微量成分定量难的问题。附图说明图1为超高效二维液相色谱系统的配置及连接示意图；图2为新乌头碱(A)、乌头碱(B)及次乌头碱(C)对照品全波长扫描谱图；图3为甲醇-0.008％DEA/乙腈-0.02％DEA二维UHPLC分离谱图；图4为甲醇-0.008％DEA/乙腈-0.01％磷酸二维UHPLC分离谱图；图5为混合对照品超高效二维液相分离谱图(A：一维UHPLC分离谱图；B：二维UHPLC分离谱图)；图6为复方南星止痛膏超高效二维液相分离谱图(A：一维UHPLC分离谱图；B：二维UHPLC分离谱图)；图7为缺生川乌阴性制剂超高效二维液相分离谱图(A：一维UHPLC分离谱图；B：二维UHPLC分离谱图)；图8为复方南星止痛膏一维检测图谱(保留时间为40.308处的色谱峰为次乌头碱)；图9为图8同一检测条件下的混合对照品溶液图谱(由左至右三个峰分别为新乌头碱，乌头碱，次乌头碱)。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种复方南星止痛膏双酯型生物碱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，供试品溶液的制备，取复方南星止痛膏样品经提取、除杂，制得供试品溶液；步骤二，吸取供试品溶液，采用二维液相色谱方法进行双酯型生物碱的测定。

【技术特征摘要】
1.一种复方南星止痛膏双酯型生物碱的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，供试品溶液的制备，取复方南星止痛膏样品经提取、除杂，制得供试品溶液；步骤二，吸取供试品溶液，采用二维液相色谱方法进行双酯型生物碱的测定。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述二维液相色谱方法采用以下方法进行：一维色谱方法：C18色谱柱一，流动相A为甲醇，流动相B为0.001～0.02％的二乙胺或三乙胺，流速0.05～0.2mL·min-1，柱温15～20℃，用40～70％的流动相A梯度洗脱40min，检测波长230～240nm，进样量1～3μL，样品盘温度为8～20℃；阀切换方法：阀切换时间为所述双酯型生物碱起始出峰时间至结束；二维色谱方法：C18色谱柱二，流动相A为甲醇或乙腈，流动相B为0.005～0.02％的磷酸或二乙胺，流速0.5～0.8mL·min-1，柱温35～45℃，用30～90％的流动相A梯度洗脱4min，检测波长230～240nm。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述二维液相色谱方法采用以下方法进行：一维色谱方法：所述C18色谱柱一规格为1×50mm，1.7μm，流动相A为甲醇，流动相B为0.008％DEA，流速为0.1mL·min-1，柱温18℃；梯度洗脱，0～12min，40～58％A，12～25min，58％～58％A，25～35min，58％～65％A，35～40min，65％～70％A，40～42min，70％～70％A，42～45min，70％～100％A，45～48min，100％～40％A；检测波长235nm，进样量1μL，样品盘温度为10℃；阀切换方法：阀切换时间为所述双酯型生物碱起始出峰时间至结束；二维色谱方法：所述C18色谱柱二规格为3.0×100...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖伟，马阳，李郭帅，耿婷，黄文哲，王振中，曹亮，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32