一种DNA编码技术与纳米孔技术联用的癌症标志物检测方法技术

本发明专利技术公开了一种DNA编码技术与纳米孔技术联用的癌症标志物检测方法。本发明专利技术首先合成了DNA编码分子，通过对改变DNA碱基的化学修饰，修饰基团及DNA长度，当其穿越纳米孔时产生区分度较高的特征电流信号。结合免疫分析技术，癌症标志物加入后，与磁珠、纳米金形成夹心结构，然后释放纳米金表面编码DNA，实现癌症标志物单独及同时检测。基于纳米孔单分子技术的高通量多组分检测平台以不同的DNA编码分子输出对应的特征电流信号，不仅没有背景干扰，而且DNA编码分子之间也不存在信号干扰，即可以克服传统方法中荧光编码的荧光漂白，荧光寿命短，背景干扰，编码微球之间的荧光干扰等等缺点。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA编码技术与纳米孔技术联用的癌症标志物检测方法
本专利技术涉及一种DNA编码技术与纳米孔技术联用的癌症标志物检测方法。
技术介绍
近年来，肿瘤标志物快速灵敏的检测，在肿瘤的早期临床诊断具有非常重要的意义。对肿瘤标志物的实时检测，可以为临床中的肿瘤的发生、监测、在治疗中对药物的反应、以及预估肿瘤复发概率提供帮助。然而对单一标志物的检测不足以确定某一癌症的发生，癌症的发生常常伴随着多种癌症标志物含量的升高，实现癌症标志物的同时检测可以提高临床上癌症诊断的效率。因此开发高通量核酸和蛋白质检测技术变得愈发迫切。高通量检测技术是指一次可检测多个样品或对同一样品进行多种检测的技术，目前高通量检测技术包括酶联免疫吸附技术，多重PCR技术，生物芯片检测技术，而无论哪种高通量检测技术都要依赖于编码技术，其DNA编码技术是众多编码技术的一种，主要是利用DNA的多样性和互补配对的特性构建编码。2003年，Mirkin等人最早提出生物编码分子的概念，并结合金标银染法对前列腺抗原PSA进行检测。随后的几年，生物编码技术在金属离子，DNA，microRNA，蛋白，氨基酸的检测中得到应用。2006年，Mi本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.探针组合甲，由探针I、探针Ⅱ、探针Ⅲ、探针Ⅳ和探针Ⅴ组成；所述探针I是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子自5’端第11位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；所述探针Ⅱ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子自5’端第11位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、酰胺键和二茂铁组成；所述探针Ⅲ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列2所示的单链DNA分子自5’端第6位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；所述探针Ⅳ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子5’末端得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；...

【技术特征摘要】
1.探针组合甲，由探针I、探针Ⅱ、探针Ⅲ、探针Ⅳ和探针Ⅴ组成；所述探针I是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子自5’端第11位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；所述探针Ⅱ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子自5’端第11位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、酰胺键和二茂铁组成；所述探针Ⅲ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列2所示的单链DNA分子自5’端第6位碱基得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；所述探针Ⅳ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子5’末端得到的；所述连接臂由磷酸基团、三氮唑和二茂铁组成；所述探针Ⅴ是将瓜环借助连接臂修饰于序列表的序列1所示的单链DNA分子5’末端得到的；所述连接臂由磷酸基团、spacer18官能团、三氮唑和二茂铁组成。2.权利要求1所述探针组合甲的应用，为如下(a1)-(a4)中的任一种：(a1)检测单一抗原；(a2)同时检测两种或三种或四种或五种抗原；(a3)制备检测单一抗原的试剂盒；(a4)制备同时检测两种或三种或四种或五种抗原的试剂盒。3.含有权利要求1所述探针组合甲的试剂盒，所述试剂盒的用途为如下(b1)或(b2)：(b1)检测单一抗原；(b2)同时检测两种或三种或四种或五种抗原。4.用于检测一种抗原的组合物甲，包括组件A、组件B和组件C；所述组件A为权利要求1中任一所述探针；所述组件B为偶联有捕获抗体的磁珠；所述组件C为偶联有检测抗体和特异DNA的纳米金颗粒；所述捕获抗体和检测抗体能够与待测抗原分子形成捕获抗体-待测抗原-检测抗体夹心复合物；所述特异DNA能够与所述探针结合。5.用于同时检测n种抗原的组合物乙，包括n种组合物；每种组合物包括权利要求4中所述的组件A、组件B和组件C；n种组成物检测的抗原不同；n种组成物中的探针不同；n为2-5之间的任意自然数。6.系统甲或系统乙或系统丙；所述系统甲包括权利要求1所述的探针组合甲和样品池系统；所述系统乙包括权利要求3所述的试剂盒和样品池系统；所述系统丙包括权利要求5所述的组合物乙和样品池系统；所述样品池系统包括两个隔室，两个隔室被聚四氟乙烯膜分隔；所述聚四氟乙烯膜中间具有一个直径为100-150μM的孔，所述通孔被磷脂双分子层充满，在所述磷脂双分子层中存在一个由α-溶血素七聚体蛋白形成的纳米孔；样品池系统中应用Ag/AgCl电极组成闭合回路。7.权利要求6所述系统的应用，为如下(c1)或(c2)：(cb1)检测单一抗原；(c2)同时检测两种或三...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海臣，刘蕾，李婷，
申请(专利权)人：中国科学院化学研究所，中国科学院高能物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11