本发明专利技术涉及医学生物检测技术领域，本发明专利技术提供了ZFPM2‑AS1的新用途，具体是在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用，本发明专利技术进一步提供了一种利用针对ZFPM2‑AS1的定量PCR检测来进行胰腺相关疾病诊断的试剂盒和检测方法。本发明专利技术的试剂盒和检测方法简便，可靠，周期短，特异性高，易于临床推广。
Application of ZFPM2-AS1 in the preparation of diagnostic kit for pancreatic related diseases
The invention relates to the technical field of medical biology detection. The invention provides a new use of ZFPM2_AS1, in particular the application of preparing a diagnostic kit for pancreas-related diseases. The invention further provides a reagent kit and a detection method for pancreas-related diseases using quantitative PCR detection for ZFPM2_AS1. The kit and the detection method are simple, reliable, short cycle, high specificity and easy to be popularized in clinical practice.
【技术实现步骤摘要】
ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用
本专利技术涉及医学生物检测
，涉及一种lncRNA在胰腺癌诊断中的应用，尤其涉及lncRNA中的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
胰腺癌是世界范围内恶性程度最高的肿瘤之一。由于其起病隐匿，早期诊断十分困难，约80％-90％的患者就诊时已发生远处转移，手术切除率仅为15％，且术后生存率难以令人满意。尽管医学技术不断进步，但近十年来其死亡率和生存率并未发生明显改观。此外，胰腺癌发病率在国内外近年来呈现上升趋势。因此，尽早明确诊断是提高胰腺癌患者切除率和生存率的关键。目前临床常用的胰腺癌诊断实验室指标包括糖链抗原19-9(carbohydrateantigen19-9，CA19-9)、糖链抗原50(carbohydrateantigen50，CA50)和糖链抗原242(carbohydrateantigen242，CA242)。CA19-9对中晚期胰腺癌的诊断和预后有较高的参考价值，但对早期的胰腺癌诊断敏感性较低，有文献报道其对<2CM的肿瘤阳性率仅为37.5％。CA50和CA242等对胰腺癌早期诊断价值亦不大。在影像学诊断中，常用的检查有B超、CT、内镜下胰胆管造影、血管造影、磁共振成像(Magneticresonancecholangiopancreatography,MRCP)和磁共振血管成像(Magneticresonanceangiography，MRA)等。B超诊断胰腺癌患者血管受侵袭敏感性、特异性核准确性分别约为80％、91％和85％；电子束CT诊断胰腺癌准确率约为94％，可切除的准确率约为71％；MRCP和MRA联合检查可代替CT，但诊断费用相对较高。基因诊断是目前研究的热点之一。胰腺癌中约有50-70％的病理存在K-RAS第12位密码子的点突变，是胰腺癌发生的早期事件。有文献报道细针穿刺和胰液标本的检测中，Kras基因突变的阳性率分别为77.3％、91.4％和94.1％，且此突变与肿瘤部位、大小和TNM分期无关，可能有助于胰腺癌的早期发现。此外，有研究发现，胰腺癌患者胰液中端粒酶活性远高于慢性胰腺炎和良性肿瘤患者，胰液脱落细胞端粒酶活性检测有望成为早期诊断胰腺癌的有效手段；P16基因的甲基化是胰腺癌的发生过程中的另一个早期事件；有研究发现92％的胰腺癌患者存在18q染色体的缺失。上述发现均提示基因变化可能为胰腺癌的早期诊断提供新的分子标志物。人类基因组研究发现，约65％的基因组DNA转录形成的RNA分子不具备编码蛋白的功能。其中，长度大于200个合谷氨酸且缺乏完整特异开放阅读框而无编码能力的RNA分子称为长链非编码RNA(longnoncodingRNA,lncRNA)。LncRNA由RNA聚合酶II转录并经可变剪切而成，其表达具有组织特异性。LncRNA最初被认为是基因组转录的“噪声”，是RNA聚合酶作用的副产物，但随后的证据显示lncRNA参与了基因组印迹、染色质修饰、X染色体沉默、核浆运输、转录调控等多种重要的生理机能。近年来，科学家发现lncRNA在肿瘤组织中特异性异常表达，包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌等等。鉴于lncRNA在肿瘤组织中表达的高度特异性和重要的生物学功能，lncRNA可能成为重要的胰腺癌早期诊断分子标志物。ZFPM2-AS1，位于基因组GRCh38.p7，GENEID为102723356，经验证为不具有编码蛋白能力的长链RNA。目前有关ZFPM2-AS1的研究极少。既往全转录组测序发现正常组织中ZFPM2-AS1在子宫内膜、膀胱等组织中相对高表达，在胰腺、胃等多种组织中相对低表达(PMID24309898)。目前尚无ZFPM2-AS1应用于胰腺相关疾病，特别是胰腺癌诊断的文献报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供胰腺相关疾病的诊断标志物，本专利技术的目的也在于提供LncRNA中的ZFPM2-AS1的新用途，即在制备胰腺相关疾病诊断试剂盒中的应用。本专利技术的第一方面，提供了ZFPM2-AS1作为胰腺相关疾病诊断标志物的应用。本专利技术的第二方面，提供了ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。本专利技术所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，所述的诊断试剂，为检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂。所述的诊断试剂盒，包含了检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂。所述的检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂，选自：对ZFPM2-AS1具有检测特异性的PCR引物、以及对参照物U6具有检测特异性的PCR引物。所述的对ZFPM2-AS1具有检测特异性的PCR引物如下：所述的生物样品选自：获自对象的外周血。所述的胰腺相关疾病为慢性胰腺炎或胰腺癌。本专利技术的第三方面，提供了一种胰腺相关疾病的诊断试剂盒，该试剂盒包含了检测生物样品中ZFPM2-AS1标准表达丰度的试剂。本专利技术所述的胰腺相关疾病的诊断试剂盒，逆转录系统、引物系统和扩增系统组成，所述的引物系统包括如SEQIDNO:1～4所示的PCR引物。本专利技术的第四方面，提供了一种利用上述诊断试剂盒进行胰腺相关疾病的检测方法，整体检测思路如下：(1)建立ZFPM2-AS1的表达量标准图谱通过大样本检测，制作胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人血浆中ZFPM2-AS1的表达量标准图谱。取胰腺癌患者、慢性胰腺炎和正常人的血液样本若干例，将各例血液样本分别进行离心，取血浆。使用TAKARA的逆转录试剂盒(No.RR037A)以及荧光实时定量PCR技术分别检测胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人血浆中ZFPM2-AS1的表达丰度值(Ct值)，用Ctlnc表示。同时采用相同方法检测参照物U6表达丰度值Ct6作为参照。(2)制作胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人血浆中ZFPM2-AS1的表达量标准图谱将各例所得Ct6值减去Ctlnc值，即得到标准化后的表达丰度值(ΔCt)。用胰腺癌、慢性胰腺炎和正常人血浆中得到的ΔCt制作胰腺癌、慢性胰腺炎及正常人的ZFPM2-AS1表达量标准图谱。(3)鉴别胰腺癌、慢性胰腺炎和正常胰腺的方法按照上述方法检测未知血浆标本中的ZFPM2-AS1的标准化表达丰度ΔCt，对照上述ZFPM2-AS1表达标准图谱，如果落入胰腺癌组ZFPM2-AS1范围内，则将其归为胰腺癌，否则基本排除胰腺癌。具体检测ZFPM2-AS1或U6表达丰度值的方法为：A.将待检血液样本常温离心，获取血浆，并提取血浆中的总RNA；B.对步骤A中的总RNA进行逆转录，得到cDNA；C.采用荧光实时定量PCR技术分别对ZFPM2-AS1的表达丰度以及参照物U6的表达丰度进行定量检测，分别得到ZFPM2-AS1的表达丰度值Ctlnc以及ZFPM2-AS1的表达丰度值Ct6，检测过程中所用引物如SEQIDNO:1～4所示。通过荧光实时定量PCR获得所有样本的ZFPM2-AS1的ΔCt值，见表4。将上述三组数据进行方差分析得到组间差异显著(P<0.001)，然后使用LSD法进行组间两两比较后发现胰腺癌分别与慢性胰腺炎和正常人lncRNA表达差异显著(P＝0本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.ZFPM2‑AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂为检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂。3.根据权利要求1所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂盒包含了检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂。4.根据权利要求2或3所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述的检测生物样品中ZFPM2-AS1的标准化表达丰度的试剂，选自：对ZFPM2-AS1具有检测特异性的PCR引物、以及对参照物U6具有检测特异性的PCR引物。5.根据权利要求4所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，其特征在于所述的对ZFPM2-AS1具有检测特异性的PCR引物如SEQIDNO:1和2所示，所述的参照物U6具有检测特异性的PCR引物如SEQIDNO:3和4所示。6.根据权利要求2或3所述的ZFPM2-AS1在制备胰腺相关疾病诊断试剂或诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述的生物样品获自对象的外周血。7.根据权利要求1所...
【专利技术属性】
技术研发人员：孔凡扬，邓萱，孔祥毓，李兆申，杜奕奇，朱建伟，鲍一，朱惠云，王宇欣，
申请(专利权)人：上海长海医院，
类型：发明
国别省市：上海,31
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