一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用。本发明专利技术所提供的肠杆菌具体为肠杆菌(Enterobacter cowanii)10DI2‑2，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13535。该菌株为桃树内生细菌，而且生长迅速，可在植物组织内快速大量定殖，具有生态位优势；且菌株10DI2‑2能产生抗生素，可对抵抗根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)的侵入产生一定作用；另外，该菌株可强烈抑制根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)侵染易感植物向日葵形成根癌瘤，该菌株能够替代或减少农药的使用，保护植物减少来自环境和病害的压力，具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用
本专利技术属于农、林和园艺作物保护
，涉及一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用。
技术介绍
根癌病是由根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)引起的一种常见细菌性病害。根癌土壤杆菌的寄主范围很广，能侵染93科、331属643种的植物。在欧洲、北美、南非及亚洲等一些国家普遍发生。在我国桃树栽培区均有不同程度发生，发病率在20％～90％(马德钦,王慧敏.果树根癌病及其生物防治[J].中国果树,1995年02期)。较为严重的根癌病发生区域为河北、山东、辽宁、河南、湖北、江苏等省区。桃树幼苗受害后早衰，植株矮化，甚至死亡；成龄树感染此病后会生长不良、树势变弱、果实小、产量低、树龄缩短，造成了重大的经济损失。我国果树根癌病的发生相当普遍，但此病的明显危害发生在根部，因此很多果农对该病缺乏认识，对及时防治及苗木外调和引进时的检疫措施未予重视，造成病菌的传播和病情逐年加重，防治工作任务艰巨。目前对根癌病最有效的防治措施是轮作和生物防治。但许多果园或苗圃无法实行常年轮作。采用生物防治的方法，提前使用生物菌剂是降低病原菌进入植物体内并干扰其代谢的有效措施。本技术投入低、效率高，是一项农民认可的、可操作强的农产品生产技术。关于根癌病的生物防治，虽然国内外曾经报道菌根真菌、放线菌、土壤杆菌、假单孢菌、产碱杆菌、芽孢杆菌提取物对根癌病菌有一定的拮抗作用，但除K84及其遗传工程菌株K1026(商品名为Nogall)外，均没有商业化。针对在果树和其他植物上发生普遍的由A.tumefaciens引起的根癌病，目前我国未见登记注册的生防菌制剂。获得适合我国土壤类型且具有我国自主知识产权的生防菌及其无细胞制剂对根癌病的防控具有重要的实际意义。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一株防治植物根癌病的肠杆菌及其应用。本专利技术所提供的肠杆菌具体为肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2，该菌株已于2017年1月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.13535。本专利技术还保护活性成分为所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的菌剂。在所述菌剂中，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的活菌数可为5～200亿/g(如10亿/g)所述菌剂。所述菌剂中还可包括吸附载体；所述吸附载体可为硅藻土、草炭、蛭石、珍珠岩和碳酸钙中的至少一种。更加具体的，在本专利技术的一个实施例中，所述吸附载体由草炭和蛭石按照体积比1:1的配比混和而成。进一步，所述菌剂由所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液和所述吸附载体按照1L:2Kg至1L:4Kg(如1L：2Kg)的配比混和而成。在本专利技术的一个实施例中，制备所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液时采用营养肉汤，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液中，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的活菌数为50～80亿/ml(如50亿/ml)所述发酵液。相应的，在制备得到的所述菌剂中，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的活菌数为5～15亿/g(如10亿/g)所述菌剂：所述菌剂的含水量在3％以内。所述菌剂的制备方法也属于本专利技术的保护范围。所述菌剂的制备方法，具体可包括如下步骤：(1)培养所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2，得到所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液；(2)将步骤(1)所得发酵液和所述吸附载体按照1L:2Kg至1L:4Kg(如1L：2Kg)的配比混和，得到所述菌剂。在步骤(1)的所述发酵液中，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的活菌数可为50～80亿/ml(如50亿/ml)。在步骤(1)中，培养所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的培养基可为营养肉汤。所述营养肉汤的组成如下：葡萄糖10g：蛋白胨10g：牛肉膏3g：酵母膏1g：蒸馏水1000ml；所述营养肉汤的pH为7.0～7.2。在步骤(1)中，培养所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的培养条件可为：将所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的种子液接种到所述营养肉汤中，接种量为0.5～5％(如0.8％)(体积比)，培养温度28～30℃，转速180rpm，初始pH6.0～7.0，培养时间24h。所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液也属于本专利技术的保护范围。所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2或所述菌剂或所述发酵液在如下任一中的应用也属于本专利技术的保护范围：1)抑制根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)；2)制备用于抑制根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)的产品；3)预防和/或治疗植物根癌病；4)制备用于预防和/或治疗植物根癌病的产品。所述预防和/或治疗植物根癌病的方法包括且不限于：直接施用如拌种、蘸根、浇灌、涂抹等，与化学肥料、有机肥料以及有机无机复混肥料的混和使用，与抗生素、化学杀菌剂、无机盐或铜离子制剂以及熏蒸剂使用的配合使用。其中，所述根癌病具体为由根癌土壤杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)引起的根癌病。所述植物具体可为因A.tumefaciens感染引起根癌病的果树、林木、园艺作物或作物，如：向日葵、桃、番茄、樱桃、杨树、牡丹、玫瑰等。本专利技术所提供的肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2CGMCCNo.13535具有如下优势：1、分离于富营养培养基TSA，其生长迅速，可在植物根际快速大量定殖，具有生态位优势。2、产生抗生素，可对根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)有一定的抑制作用，该菌株是一株有潜力的拮抗菌。3、可强烈抑制根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)侵染易感植物向日葵而形成根癌瘤，防效可达到89.89％。本专利技术所提供的肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2CGMCCNo.13535是从郑州具有根癌病获得抗性(SAR)的桃单株“西北13-1”枝条中分离到的一株内生细菌。该菌株的特点是：在营养培养基平板上培养时，菌落圆形中凸，有粘液，菌落扩展速度很快，这是生防菌可大规模生产和应用的前提条件之一。用其菌悬液与根癌土壤杆菌菌悬液混合接种向日葵，可明显控制癌瘤的形成，经鉴定为肠杆菌(Enterobactercowanii)，定名为10DI2-2。内生细菌10DI2-2能够在长期定殖生存于寄主植物，由于该菌株能产生抗生素，还可对抵抗根癌土壤杆菌(A.tumefaciens)的侵入产生一定作用。10DI2-2菌株能够替代或减少农药的使用，保护植物减少来自环境和病害的压力，因此10DI2-2本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肠杆菌(Enterobacter cowanii)10DI2‑2，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.13535。

【技术特征摘要】
1.肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2，它在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCCNo.13535。2.一种菌剂，它的活性成分为权利要求1所述的肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2。3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于：在所述菌剂中，所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的活菌数为5～200亿/g所述菌剂。4.根据权利要求2或3所述的菌剂，其特征在于：所述菌剂由所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液和吸附载体按照1L：2Kg至1L：4Kg的配比混和而成。5.权利要求4所述菌剂的制备方法，包括如下步骤：(1)培养权利要求1所述的肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2，得到所述肠杆菌(Enterobactercowanii)10DI2-2的发酵液；(2)将步骤(1)所得发酵液和权利要求4中所述的吸附载体按照1L：2Kg至1L：4Kg的配比混和，得到所述菌剂。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，培养所述肠杆菌(Enterob...

【专利技术属性】
技术研发人员：李世访，李昱佳，李茜，张志想，
申请(专利权)人：中国农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11