抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术涉及诊断试剂盒领域，具体是抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用。本发明专利技术优点在于：本发明专利技术为诊断早期强直性脊柱炎提供了一条全新的途径，对于早期诊断和治疗强直性脊柱炎，评估强直性脊柱炎病情具有重要作用；本发明专利技术提供Kaiso自身抗体检测的MSD检测试剂盒和检测方法，提供了MSD检测高信号值、低背景的实验条件，对于早期强直性脊柱炎具有较高的诊断价值。

Application of anti Kaiso protein antibody in the preparation of diagnostic kit for early ankylosing spondylitis

The invention relates to the field of diagnostic kits, in particular to the application of anti-Kaiso protein antibodies in the preparation of diagnostic kits or kits for early ankylosing spondylitis. The invention has the advantages that: the invention provides a new way for the diagnosis of early ankylosing spondylitis, plays an important role in the early diagnosis and treatment of ankylosing spondylitis, and evaluates the condition of ankylosing spondylitis; the invention provides an MSD detection kit and a detection method for Kaiso autoantibody detection, and provides high reliability for MSD detection. The experimental condition of low value and low background is of high diagnostic value for early ankylosing spondylitis.

【技术实现步骤摘要】
抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂盒中的应用
本专利技术涉及诊断试剂盒领域，具体地说，是抗Kaiso蛋白自身抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂盒中的应用。
技术介绍
强直性脊柱炎(ankylosingspondylitis，AS)是一种慢性炎症性自身免疫性疾病，以渐进发展的脊柱关节强直、骶髂关节炎、葡萄膜炎和起止点炎为疾病特征。主要症状包括脊柱僵硬、活动受限以及下腰部疼痛等。该病早期侵犯骶髂关节，并逐渐向上累及，最终导致脊柱的骨性强直。强直性脊柱炎好发于16-40岁青壮年男性，男女发病比例约为2:1。相关研究显示强直性脊柱炎全球的发病率在0.1％到1.4％之间，在我国发病率约为0.2-0.6％。由于缺乏典型的早期症状和明确的早期生物标记物，通常在第一次临床症状出现后的8-10年时间后，才有可能得到明确的诊断。目前，强直性脊柱炎的诊断标准主要是临床症状结合影像学表现。血清学指标HLA-B27主要作为辅助诊断指标，血沉、C反应蛋白可作为反映疾病活动度的指标。HLA-B27抗原的表达与AS具有较高的相关性，在AS患者中80-95％为HLA-B27抗原阳性，但正常人群中也有5-10％的阳性率。并且HLA-B27在其他几种风湿免疫性疾病(如银屑病关节炎、反应性关节炎、炎性肠病性关节炎、未分化脊柱关节病和幼年发病的脊柱关节炎等)中也有阳性表达。血沉、C反应蛋白作为炎症活动度指标特异性较差，在炎症性疾病及细菌感染性疾病中均有升高。故强直性脊柱炎无特异性较高的血清学诊断指标。由于缺乏类风湿因子，一般认为AS是一种血清阴性疾病。然而近年来人们发现B细胞和抗体在AS致病过程中发挥重要作用。微生物、炎症目标和骨骼/结缔组织等抗原都可作为抗体的来源。这些抗原及相应的抗体在AS疾病的发生发展过程中起着重要作用。故对于AS患者血清中自身抗体的筛查有利于寻找新的诊断及治疗标记物。本专利技术通过蛋白芯片筛选出抗Kaiso蛋白抗体在强直性脊柱炎病人血清里显著升高。本专利技术的研究对象Kaiso蛋白是锌指蛋白超家族(POZ/ZF)中BTB/POZ转录因子亚家族的成员。其基因ZBTB33位于Xq23，编码蛋白分子量是97Kd，整个肽链共有672个氨基酸。BTB/POZ蛋白，总体上来说，是一种转录抑制因子，氨基端含有POZ结构域，功能为可形成同二聚体、异二聚体和辅助转录抑制因子。作为转录因子Kaiso可与目的基因启动子上保守的Kaiso结合位点结合并通过募集组蛋白脱乙酰酶来影响染色体重构从而抑制其转录。相关研究显示Kaiso蛋白在调节炎症过程中发挥重要作用(ChristinaC.Pierre，KaisooverexpressionpromotesintestinalinflammationandpotentiatesintestinaltumorigenesisinApcMin/+mice.BiochimicaetBiophysicaActa.2015,1846–1855)。并且Kaiso能够调控细胞分化并影响肿瘤的发生(RoopaliChaudhary，ThePOZ-ZFTranscriptionFactorKaiso(ZBTB33)InducesInflammationandProgenitorCellDifferentiationintheMurineIntestine.PLOSONE.8(9):e74160)。另外，Wnt通路与AS发病中的成骨过程密切相关，相关研究表明Kaiso可能通过与转录因子TCF家族成员之间的相互作用，抑制Wnt靶基因，负向调控Wnt/β-catenin信号通路(ParkJI,Kaiso/p120-cateninandTCF/beta-catenincomplexescoordinatelyregulatecanonicalWntgenetargets.DevCell,2005,8(6):843-854)。综上，Kaiso蛋白可能在AS炎症及骨化进程中起到重要作用。目前，国内外尚无文献报道抗Kaiso蛋白抗体在AS患者中的诊断及鉴别诊断价值，也尚无文献报道抗Kaiso蛋白抗体检测试剂盒以及该类试剂盒在AS血清学诊断中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种抗Kaiso蛋白自身抗体在早期强直性脊柱炎患者诊断中的应用；本专利技术的第二个目的是提供Kaiso自身抗体检测的MSD检测试剂盒；本专利技术的第三个目的是提供MesoScaleDiscovery(MSD)技术检测自身抗体的检测方法。为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的第一方面，提供抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用。优选的，所述的诊断试剂或试剂盒是抗Kaiso蛋白抗体MesoScaleDiscovery(MSD)技术检测试剂或试剂盒。优选的，所述的诊断试剂或试剂盒检测血清中抗Kaiso蛋白抗体的浓度。优选的，所述的诊断试剂或试剂盒的cut-off值为4065.49ng/ml，即当MSD方法检测血清抗Kaiso蛋白抗体浓度≥4482.33ng/ml，诊断为早期强直性脊柱炎。本专利技术所述的早期强直性脊柱炎，是指符合1984年纽约诊断标准的强直性脊柱炎病人，并且影像学显示只有骶髂关节受累而不伴有脊柱关节的累及。(参考文献1.vanderLindenS,ValkenburgH,CatsA.Evaluationofdiagnosticcriteriaforankylosingspondylitis.AproposalformodificationoftheNewYorkcriteria.ArthritisRheum1984；27:361-368.2.BraunJ,vanderHeijdeD,DougadosM,EmeryP,KhanM,SieperJ,etal.Stagingofpatientswithankylosingspondylitis:apreliminaryproposal.AnnRheumDis2002；61Suppl3:iii9-23.)本专利技术所涉及的抗Kaiso蛋白抗体，可以是市售的抗体如抗Kaiso一抗(ab12723，Abcam)、santacruz的抗体等；最好选用跟人同源的抗原制备得到的抗体。优选的，所述的诊断试剂或试剂盒包括：封闭液BlockerA(MSD配套)，4×Readbuffer，Kaiso重组蛋白，抗Kaiso一抗，二抗：SULFO-TAGAnti-MouseAntibody，SULFO-TAGAnti-HumanAntibody，稀释液：1×PBS，pH:7.35-7.45；抗体稀释液：0.02mol/LPBS(pH7.4)+0.2％BSA；终止液：2mol/L的硫酸溶液；缓冲液：1×PBS，pH:7.35-7.45；洗涤液：0.02mol/LPBS(pH7.4)+0.05％Tween-20。本专利技术的第二方面，提供一种Kaiso蛋白抗体的MSD检测试剂盒，包括以下试剂：封闭液BlockerA(MSD配套)，4×Readbuffer，Kaiso重组蛋白，抗Kaiso一抗，二抗：SULFO-TAGAnti-MouseAntibody，SULFO-TAGAnti-HumanAn本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用。

【技术特征摘要】
1.抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂或试剂盒是抗Kaiso蛋白抗体MSD技术检测试剂或试剂盒。3.根据权利要求2所述的抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂或试剂盒检测血清中抗Kaiso蛋白抗体的浓度。4.根据权利要求1所述的抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，当MSD方法检测血清抗Kaiso蛋白抗体浓度≥4482.33ng/ml，诊断为早期强直性脊柱炎。5.根据权利要求1所述的抗Kaiso蛋白抗体在制备早期强直性脊柱炎诊断试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述的诊断试剂或试剂盒包括：封闭液BlockerA，4×Readbuffer，Kaiso重组蛋白，抗Kaiso一抗，二抗：SULFO-TAGAnti-MouseAntibody，SULFO-TAGAnti-HumanAntibody，稀释液：1×PBS，pH:7.35-7.45；抗体稀释液：0.02mol/LPBS(pH7.4)+0.2％BSA；终止液：2mol/L的硫酸溶液；缓冲液：1×PBS，pH:7.35-7.45；洗涤液：0.02mol/LPBS(pH7.4)+0.05％Tween-20。6.一种Kaiso蛋白抗体的MSD检测试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：封闭液BlockerA，4×Readbuffer，Kaiso重组蛋白，抗Kaiso一抗，二抗：SULFO-TA...

【专利技术属性】
技术研发人员：童文文，张宸，冯新哲，王琛，何崇儒，李甲，徐卫东，
申请(专利权)人：上海长海医院，
类型：发明
国别省市：上海,31