检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒、制法制造技术

本发明专利技术涉及一种检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒、制法，制备的试剂盒包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的MGF和/或MGF‑Ct24E抗体工作液，化学发光标记物标记的MGF和/或MGF‑Ct24E抗体工作液，MGF和MGF‑Ct24E校准品和/或质控品工作液，化学发光底物液，清洗液，试剂盒的发光体系为直接化学发光，利用链霉亲和素‑生物素信号放大系统，检测灵敏度高、线性范围宽，检测结果重复性好，可以实现力生长因子和/或其E肽的准确定量。

Direct chemiluminescence kit for the detection of force growth factor and its E peptide

The present invention relates to a direct chemiluminescence reagent kit for detecting force growth factor and its E peptide, and a preparation method. The preparation kit includes: streptavidin-coupled magnetic particle working fluid, biotin-labeled MGF and/or MGF_Ct24E antibody working fluid, chemiluminescence marker-labeled MGF and/or MGF_Ct24E antibody working fluid, MGF_Ct24E antibody working fluid, MGF_Ct24E working fluid. The luminescent system of MGF_Ct24E calibration and/or quality control working fluid, chemiluminescent substrate liquid, cleaning fluid and kit is direct chemiluminescent. Using streptavidin_biotin signal amplification system, the detection has high sensitivity, wide linear range and good repeatability. The force growth factor and/or its E peptide can be realized. Accurate and quantitative.

【技术实现步骤摘要】
检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒、制法
本专利技术涉及一种检测力生长因子和/或其E肽的直接化学发光试剂盒及用法，属于免疫分析

技术介绍
力生长因子(MGF)最初在拉伸刺激的骨骼肌中被发现，是肌肉在力刺激诱导下，由胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)基因选择性剪接产生的重要变构体，选择剪接发生在IGF-Ⅰ基因外显子6之前的位点，而MGF在外显子5这一区域，人类和啮齿动物类分别插入了49bp和52bp，导致外显子6的翻译发生移码突变，产生特异的C端24个氨基酸的E肽序列(MGF-Ct24E)。MGF及MGF-Ct24E能够激活肌肉卫星细胞，促进组织再生，促进成骨细胞增殖，在成骨细胞或骨组织对应力刺激以及神经、肌肉组织对损伤的响应中发挥作用，对成熟运动神经元的维持也有着重要作用，具有促进多种细胞增殖和存活的作用。还有研究发现，MGF及MGF-Ct24有助于改善记忆。通过对C-末端和/或N-末端进行化学修饰，如聚乙二醇化、L-D型氨基酸转化、糖基化、硫酸化、酰胺化、乙酰化等方法修饰MGF，可增加MGF的稳定性，修饰后的MGF及MGF-Ct24E可制成药物制剂，如水性和非水性无菌注射液、水性和非水性无菌悬液，制剂可通过皮肤、肠胃外、肌肉、皮下或经皮肤等方式给药，或者通过直接注射到血液中或直接施用至粘膜组织给药，用来治疗骨骼肌障碍、心肌障碍、神经障碍等多种疾病。MGF及MGF-Ct24E可以应用到组织工程领域，通过合适的方式与改性的聚乳酸材料连接制备生物活性仿生材料，用于骨再生修复、血管再生修复等。另外，MGF及MGF-Ct24E可以通过合适的方式负载到镁合金表面，植入体内及时释放从而刺激成骨细胞的增长，来克服应力不足引起的问题。MGF及MGF-Ct24E的应用如此广泛，如何检测骨细胞或骨组织受到应力刺激或神经、肌肉组织受到损伤时是否有MGF及MGF-Ct24E产生，如何监控制剂在体内代谢程度以便于制定治疗/给药方案，如何监测仿生材料中MGF及MGF-Ct24E的释放速度，这些都是需要迫切解决的问题。然而，现有技术中仅有蛋白质免疫印迹法检测MGF及MGF-Ct24E，而该蛋白质免疫印迹检测只是定性的分析，不能定量，且速度较慢，目前尚未有快速、准确地定量检测MGF及MGF-Ct24E的方法或试剂盒。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：为解决现有技术中尚未有快速、准确地定量检测MGF及MGF-Ct24E的方法或试剂盒的技术问题，提供一种检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒及制法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液，化学发光标记物标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液，化学发光底物液，清洗液。优选地，所述MGF和/或MGF-Ct24E抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段，优选来源于鼠、兔、羊。优选地，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯衍生物、吖啶磺酰胺、异鲁米诺或异鲁米诺衍生物，所述吖啶酯衍生物为吖啶酯酸-NHS酯、吖啶酸丙磺酸钠盐或9-吖啶羧酸，所述异鲁米诺衍生物为异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)、N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺、N-(6-氨基已基)-N-乙基异鲁米诺、异硫氰酸异鲁米诺或N-(4-异硫氰基丁基)-N-乙基异鲁米诺。优选地，所述链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液由pH为6.8～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05～2wt％的牛血清白蛋白和/或酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚(Brij35)和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚(TritonX-100)和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯(Tween20)和/或月桂醇聚氧乙烯醚(平平加O-20)、0.05～0.5wt％的proclin300和/或叠氮钠。优选地，所述生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体以及化学发光标记物标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、1mg/L～100mg/L的鼠IgG、0.5～5wt％的氯化钠、1～5wt％的蔗糖、0.05～2wt％的小牛血清、0.02～1wt％的酪蛋白、0.02～1wt％的Brij35和/或TritonX-100和/或Tween20和/或平平加O-20、0.05～0.5wt％的proclin300和/或叠氮钠。优选地，所述检测力生长因子和/或其E肽的直接化学发光试剂盒还包括MGF和/或MGF-Ct24E校准品工作液和/或质控品工作液，所述MGF和/或MGF-Ct24E校准品和/或质控品工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液中含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、10～50wt％的人血清、0.5～3wt％的氯化钠、2～20wt％的乙二醇、0.02～1wt％的Brij35和/或TritonX-100和/或Tween20和/或平平加O-20、0.05～0.5wt％的proclin300和/或叠氮钠。优选地，所述清洗液为pH为6.8～7.6，浓度为0.1mol/L～0.5mol/L的磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液，所述缓冲液含有0.2～10wt％的TritonX-100和/或Tween20、5～20wt％的氯化钠、0.5～15wt％的proclin300和/或叠氮钠。优选地，所述化学发光底物液包括底物液1和底物液2，所述底物液1含有0.1～1.5wt％的二甲基甲酰胺和/或乙醇、0.1～1.5wt％的TritonX-100和/或Tween20、0.05～5wt％的双氧水以及1mmol/L-5mmol/L的EDTA或其盐；所述底物液2含有0.1～1.5wt％的二甲基甲酰胺和/或乙醇、0.1-1.5wt％的TritonX-100和/或Tween20、0.05～0.5wt％的proclin300、0.01mol/L-1mol/L的氢氧化钠、1mmol/L-5mmol/L的EDTA或其盐。本专利技术还提供一种上述检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒的制法，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液的制备，生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液的制备，化学发光标记物标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液的制备，清洗液的配制，化学发光底物液的配制，将上述制备的试剂进行分装及组装。优选地，所述生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体的制备方法为：将N-羟基琥珀酰亚胺活化的生物素与抗体按照1:10-100的摩尔比在2-8℃或室温条件下旋转混匀反应0.5-2小时，透析除去多余的生物素，得生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体。优选地，所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的MGF和/或MGF‑Ct24E抗体工作液，化学发光标记物标记的MGF和/或MGF‑Ct24E抗体工作液，化学发光底物液，清洗液；所述MGF和/或MGF‑Ct24E抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段。

【技术特征摘要】
1.一种检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，包括：链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液，生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液，化学发光标记物标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液，化学发光底物液，清洗液；所述MGF和/或MGF-Ct24E抗体为单克隆抗体、多克隆抗体、单克隆抗体Fab片段或多克隆抗体Fab片段。2.根据权利要求1所述的检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、吖啶酯衍生物、吖啶磺酰胺、异鲁米诺或异鲁米诺衍生物，所述吖啶酯衍生物为吖啶酯酸-NHS酯、吖啶酸丙磺酸钠盐或9-吖啶羧酸，所述异鲁米诺衍生物为异鲁米诺(4-氨基邻苯二甲酰肼)、N-(4-氨基丁基)-N-乙基异鲁米诺、N-(6-氨基已基)-N-乙基异鲁米诺、异硫氰酸异鲁米诺或N-(4-异硫氰基丁基)-N-乙基异鲁米诺。3.根据权利要求1或2所述的检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素偶联的磁性微粒工作液由pH为6.8～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.05～2wt％的牛血清白蛋白和/或酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05～0.5wt％的proclin300和/或叠氮钠。4.根据权利要求1-3任一项所述的检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体以及化学发光标记物标记的MGF和/或MGF-Ct24E抗体工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MOPSO缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、1mg/L～100mg/L的鼠IgG、0.5～5wt％的氯化钠、1～5wt％的蔗糖、0.05～2wt％的小牛血清、0.02～1wt％的酪蛋白、0.02～1wt％的十二烷基聚乙二醇醚和/或聚乙二醇对异辛基苯基醚和/或聚氧乙烯失水山梨醇单月桂酸酯和/或月桂醇聚氧乙烯醚、0.05～0.5wt％的proclin300和/或叠氮钠。5.根据权利要求1-4任一项所述的检测力生长因子、其E肽的直接化学发光试剂盒，其特征在于，所述检测力生长因子和/或其E肽的直接化学发光试剂盒还包括MGF和/或MGF-Ct24E校准品工作液和/或质控品工作液，所述MGF和/或MGF-Ct24E校准品和/或质控品工作液由pH为6.0～7.6，浓度为0.01mol/L～0.2mol/L的磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、HEPES缓冲液、MES缓冲液中的一种配制而成，所述缓冲液中含有0.5～5wt％的牛血清白蛋白、10～50wt％的人血清、0.5～3wt％的氯化钠、2～20wt％的乙二醇、0.02～1wt％的Brij35和/或...

【专利技术属性】
技术研发人员：李大军，蔡淑娟，徐霞飞，涂策，张金林，
申请(专利权)人：苏州长光华医生物医学工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32