The invention discloses a colon cancer cell line with abnormal O_glycosylation constructed by knocking out T synthase gene with Crispr technology. The preparation method of the colon cancer cell line with abnormal O_glycosylation comprises the following steps: editing the C1GALT1 gene in the genome of the colon cancer cell by CRISPR/Cas9 system, thereby losing the function of the T_synthase, and obtaining the colon cancer cell line with abnormal O_glycosylation. The invention uses lentiviruses as intermediaries to knock out C1GALT1 gene in colon cancer cells, replacing plasmids directly transforming cells, and more effectively exerts the knockout effect of Crispr/Cas9. In order to study the abnormal O glycosylation, we can lay a foundation for the development of colorectal cancer.
【技术实现步骤摘要】
利用Crispr技术敲除T合酶基因构建的O-型糖基化异常的结肠癌细胞系
本专利技术属于生物
，具体涉及利用Crispr/Cas9系统构建的敲除C1GALT1基因的结肠癌细胞系，特别涉及利用Crispr/Cas9技术靶向编辑C1GALT1基因制备O-型糖基化异常的HCT116结肠癌细胞的方法。
技术介绍
糖链的修饰是重要的蛋白质翻译后修饰，黏蛋白O型糖基化是其中重要的类型之一。黏蛋白型O-聚糖通过一个在高尔基体发生的连续糖基转移作用合成，而合成的过程由一套糖基转移酶催化。T-synthase是合成O-聚糖核心1的唯一糖基转移酶，由C1GALT1基因编码，它主要的功能是将半乳糖添加到Tn抗原糖链上。T-synthase失活将导致机体细胞只能合成Tn抗原以及唾液酸化的sTn抗原。已有研究发现在结直肠癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌组织中高表达Tn抗原，Tn抗原的暴露与肿瘤的发生发展有密切联系。目前大部分结肠癌细胞系均为O-型糖基化正常的细胞系，为了研究O-型糖基化在肿瘤中的功能与机制，需要在体外构建可稳定遗传的异常型O-型糖基化细胞系。
技术实现思路
本专利技术的一个...
【技术保护点】
1.一种O‑型糖基化异常的结肠癌细胞系的制备方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对结肠癌细胞基因组中的C1GALT1基因进行编辑，进而使所述T‑synthase功能丧失，得到O‑型糖基化异常的结肠癌细胞系。
【技术特征摘要】
1.一种O-型糖基化异常的结肠癌细胞系的制备方法，包括如下步骤：利用CRISPR/Cas9系统对结肠癌细胞基因组中的C1GALT1基因进行编辑，进而使所述T-synthase功能丧失，得到O-型糖基化异常的结肠癌细胞系。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述CRISPR/Cas9系统包括sgRNA；或，所述sgRNA的靶序列为C1GALT1基因的第39-58位。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述编辑的方法为向所述结肠癌细胞中导入C1GALT1基因编辑的慢病毒载体；或，所述C1GALT1基因编辑的慢病毒载体含有所述sgRNA的编码基因和Cas9蛋白的编码基因。4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述C1GALT1基因编辑的慢病毒载体为将双链DNA分子插入慢病毒表达载体的酶切位点间得到的载体；所述双链DNA分子是将单链DNA分子甲和单链DN...
【专利技术属性】
技术研发人员：温韬，安广宇，董希琛，刘健，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京朝阳医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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