The invention discloses a construction method of gene knockout CHO cell line and its application in therapeutic recombinant protein expression. CYLD knockout CHO cell line construction method, specifically: the knockout vector into CHO cells after screening, obtained by the knockout plasmid-mediated CYLD expression deletion cell line. The nucleotide sequence SEQ ID NO:1 in knockout cells can be replaced by SEQ ID NO:2, NO:3, NO:4, NO:5 or NO:6; the transfected cells can be CHO_K1 cells or CHO cells stably expressing certain antibodies. The invention has important application value for improving the expression yield of therapeutic recombinant protein.
【技术实现步骤摘要】
一种基因敲除CHO细胞株的构建方法及其在治疗性重组蛋白表达中的应用
本专利技术主要涉及一种CHO改造细胞株的构建及其在治疗性重组蛋白表达过程中的应用。
技术介绍
近年来，治疗性抗体在临床恶性肿瘤、自身免疫病以及快速传染病等疾病的防治上取得了显著的疗效。同时也促进了抗体行业的整体发展，全球抗体行业总产值逐年攀升，据统计2016年单克隆抗体全球销售额近700亿美元，并以10％左右的速度在增加。而我国抗体行业目前仍以仿制为主，在抗体品种上缺乏有效创新。同时，整体产能严重不足，文献报道我国抗体行业平均产量在1g/L左右，显著低于国外的4g/L的水平。因此，有效提高抗体产量成为当务之急。中国仓鼠卵巢(CHO)细胞是抗体行业最常用的宿主细胞。CHO细胞具有良好的可塑性和生长特性，能够在无血清的培养基中进行高密度悬浮培养。然而随着反应器容积的增大，保持长时间高密度生长及持续生产抗体的能力成为进一步提高抗体产量的关键因素。在代谢压力、营养限制以及剪切压力等情况下能够介导CHO细胞发生凋亡，因此控制凋亡成为有效提高产量的一种方法。主要方法有：1、优化培养过程和培养基优化；2、CHO...
【技术保护点】
1.一种敲除CHO细胞中CYLD基因的方法，其特征在于，利用基因编辑技术手段在CHO细胞中改造CYLD基因并使其失活，获得CYLD敲除的重组平台细胞株。
【技术特征摘要】
1.一种敲除CHO细胞中CYLD基因的方法，其特征在于，利用基因编辑技术手段在CHO细胞中改造CYLD基因并使其失活，获得CYLD敲除的重组平台细胞株。2.根据权利要求1所述的一种敲除CHO细胞中CYLD基因的方法，其特征在于，所述的基因编辑方法可以为CRISPR-Cas9技术，特异性靶向编辑CYLD的sgRNA序列为：GCTGTACGGACGGAACTTTC。3.根据权利要求1所述的一种敲除CHO细胞中CYLD基因的方法，其特征在于，敲除细胞中核苷酸序列SEQIDNO:1可以替换为SEQIDNO:2、NO:3、NO:4、NO:5或NO:6。4.一种如权利要求1-3任一所述方法构建的基因敲除CHO细胞株在治疗性重组蛋白表达中的应...
【专利技术属性】
技术研发人员：张部昌，韩倩倩，徐昌志，鲁亚芳，周琴，吴鹏飞，张兰兰，邵国建，喻阳，
申请(专利权)人：安徽大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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