一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒及其制备方法，包括在玻纤上喷涂胶体金复合物，在硝酸纤维素层析薄膜的检测限上包被重组抗原。用于检测唾液中含有的微量病毒特异性抗原。其中胶体金复合物是通过桥接分子，将识别抗体和胶体金颗粒进行连接，提高了标记效率，减少胶体金空间位阻。本发明专利技术的符合率高，并且提高了唾液抗体检测胶体金试纸的灵敏度，显色更加明显，检测结果更准确。

A highly sensitive saliva antibody test kit

The invention discloses a highly sensitive salivary antibody detection kit and a preparation method thereof, including spraying colloidal gold complex on glass fiber and coating recombinant antigen on the detection limit of nitrocellulose chromatography film. It is used to detect trace virus specific antigen in saliva. Colloidal gold complexes connect the recognition antibody with colloidal gold particles by bridging molecules, which improves the labeling efficiency and reduces the steric hindrance of colloidal gold. The invention has high coincidence rate, and improves the sensitivity of saliva antibody detection colloidal gold test paper, the color development is more obvious, and the detection result is more accurate.

【技术实现步骤摘要】
一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒
本专利技术涉及生物检测领域，尤其涉及一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒。技术背景传统的人类抗体检测主要是检测血液中的抗体，如乙型肝炎病毒表面抗体检测试剂盒、人类免疫缺陷病毒抗体检测试剂盒等。但是在应用过程中，采集的血液样本可能携带病毒，是潜在的感染源。对医疗检测人员及环境存在潜在的危险。另外，刺血检测会带来创口，增加感染的几率。所以在传统的抗体检测试剂盒的基础上，开发了抗体唾液检测试剂盒。唾液中抗体的含量约为血清中抗体含量的1/50至1/800。相对于血清，抗体含量极低，如果直接用检测血液的抗原检测试剂盒直接检测唾液，灵敏度过低，极易造成假阴性。这就需要提高检测试剂灵敏度。本专利技术采用了一种新的胶体金标记抗体的方法，在抗体与胶体金颗粒之间，加入桥接分子，制备金标颗粒复合物，使胶体金标记的效率显著提高，从而增强显色程度，进行信号放大，提高检测试纸的灵敏度。在临床检测中，机体产生的抗体作为判断是否感染病毒的指标，所以使用鼠抗人IgG单克隆抗体为金标试剂，鼠抗人IgG能够特异性识别并结合免疫球蛋白IgG的FC端，形成三层夹心状结构，保证了检测的精确度。
技术实现思路
本专利技术针对上述技术背景提出来的问题，提供一种能够在保持精确度的前提下，提高检测灵敏度的方法。一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒，包括在样品垫上标记金标颗粒复合物，在硝酸纤维素层析膜检测线上标记重组抗原。用于检测对应的唾液中特异性抗体。一种高灵体唾敏抗液检测试剂盒的制备，主要包括胶体金复合物的制备，硝酸纤维素薄膜包被。样品垫制备等过程，具体方法见具体实施例。作为本专利技术进一步的方案，金标颗粒的制备原料包括：直径为20-40nm的胶体金颗粒、亲和素化鼠抗人IgG抗体、桥接免疫分子、桥接免疫分子抗体等，在一定反应条件下，形成“亲和素化鼠抗人IgG—桥接分子—金颗粒”复合物，将在具体实施例中进一步阐述。本专利技术具有以下有益效果为：本专利技术通过使用新的胶体金标记技术，使鼠抗人IgG和胶体金颗粒之间产生一定的距离，减小了由于胶体金直径造成的空间位阻，使待测抗原和鼠抗人IgG之间的反应效率提高；由于亲和素化的鼠抗人IgG的FC端具有四价的生物素识别位点。通过标记了生物素的桥接分子的连接作用，理论上至少可以携带2个胶体金颗粒，可以提高胶体金颗粒与金标试剂的标记效率，使检测线显色加深，从而提高检测的灵敏度。具体实施方式为了使本专利技术的优势和技术方案阐述的更加清晰，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步的阐述。实施例1。本实施例以唾液中乙型肝炎病毒抗体（HCV）为检测对象。步骤1：制备胶体金颗粒，使用柠檬酸还原法，制备20-40nm直径的胶体金颗粒备用。步骤2:制备桥接分子：作为一种实施方式，选择寡聚DNA链作为桥接分子，长度约20-30bp，在3’端使用生物素标记，5’端使用地高辛（桥接分子1）和FAM（桥接分子2）分别标记。桥接分子可由商业DNA合成公司购买，本实施例中的桥接分子1和桥接分子2购买于上海生工。桥接分子1：bio-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-DIG。桥接分子2：Bio-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-FAM。步骤3：胶体金颗粒包被：金标颗粒1为标记了地高辛抗体，金标颗粒2包被了FAM抗体，单克隆抗体购置于生物制剂公司。标记方法为：在搅拌状态下，使用碳酸缓冲液调解PH至6.5-7.0之间，加入3-4ul地高辛抗体或FAM抗体继续搅拌30分钟，检测吸光度为OD525-530nm=1.7-2.0.进行离心处理。去上清之后，将沉淀使用PH为6.5-7.0的缓冲溶液进行复融。步骤4：将上述包被的胶体金颗粒1和2等体积混合，制成混合体系。再将上述混合液与桥接分子1、桥接分子2、亲和素化的鼠抗人IgG以4：2：2:1进行搅拌混合，反应温度为常温，反应体系中NaCl浓度为0.85%，PH为6-9。在反应过程中，持续搅拌，使溶液保持澄清状态。反应30min后，加入地高辛和FAM分子，中和识别位点，终止反应。随后进行低温冷冻离心机上纯化，时间为50-60min，转数1-8000-12000rpm，温度4-8℃。弃去上清，将沉淀物复融至30-40OD。步骤5:将包被的胶体金复合物加入保护蛋白和表面活性剂，喷涂至玻璃纤维样品垫上。干燥备用。步骤6将HCV半抗原包被于检测线上，质控抗体蛋白标记于控制线上。干燥。试验分组：选取不同年龄、不同感染程度的HCV唾液样本100份，同时对样品提供者进行血液样本采集，通过荧光定量PCR法进行检测，阳性样本为61份，其中弱阳性样本为12份。对上述样本进行检测。采用两种检测试纸条。一种是上述实施例描述的高灵敏试纸，另一种是直接使用鼠抗人IgG标记金颗粒制成的试纸，进行对比试验。由上述实施例制备的唾液HCV检测试剂盒的实际检测结果可知，通过创新的标记方法，可以降低产品的检测限，从而提高了检测的灵敏度，并且显色均一，易于判读。以上所述，仅为本专利技术较佳的具体实施例，但本专利技术的保护范围并不局限于上述实施例，任何熟悉本
的技术人员在本专利技术的保护范围内，可以轻易想到的优化或替换，都应该涵盖在本专利技术的保护范围之内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒，其特征在于：包括在玻璃纤维上喷涂胶体金复合物，在硝酸纤维素薄膜上包被重组抗原，用于检测唾液中的病毒特异性抗体。

【技术特征摘要】
1.一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒，其特征在于：包括在玻璃纤维上喷涂胶体金复合物，在硝酸纤维素薄膜上包被重组抗原，用于检测唾液中的病毒特异性抗体。2.根据权利要求1所述的一种高灵敏唾液抗体检测试剂盒，其特征在于：胶体金复合物的结构为：桥接分子一端的生物素与亲和素识别结合，另外一端标记的地高辛特异性结合标记在金颗粒上的地高辛抗体，标记的FAM特异性结合标记在金颗粒上的FAM抗体，形成胶体金复合物。3.根据权利要求2所述的一种高灵敏唾液抗体检测试...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雨峰，陈立柱，卢奇勇，
申请(专利权)人：北京库尔科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11