子痫前期的诊治标志物制造技术

本发明专利技术公开了LPCAT1在子痫前期诊治中的应用。实验证明在正常胎盘组织和子痫前期胎盘组织中LPCAT1基因及其表达产物存在差异表达，据此可将LPCAT1基因及其表达产物作为诊断子痫前期的生物标志物。另外，本发明专利技术体外细胞实验证明干扰LPCAT1基因表达，可以抑制细胞增殖，据此可以开发治疗子痫前期的药物。

Biomarkers for diagnosis and treatment of preeclampsia

The invention discloses the application of LPCAT1 in the diagnosis and treatment of preeclampsia. The results showed that LPCAT1 gene and its expression products were differentially expressed in normal placenta and preeclampsia placenta, and LPCAT1 gene and its expression products could be used as biomarkers for the diagnosis of preeclampsia. In addition, the in vitro cell experiment of the invention proves that interfering with the expression of LPCAT1 gene can inhibit cell proliferation, thereby developing drugs for treating pre-eclampsia.

【技术实现步骤摘要】
子痫前期的诊治标志物
本专利技术涉及生物医学领域，更具体地，本专利技术涉及LPCAT1基因在制备诊治子痫前期的产品中的应用。
技术介绍
子痫前期是产科领域中引起母儿病率及死亡率增高的主要疾病之一，有明显的遗传倾向，病理生理变化涉及到多系统、多器官的病变，病因和发病机制至今仍未完全阐明，始终为产科研究的焦点。而基因表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制，异常的代谢过程或病理变化，不管是由单基因还是由多基因体系控制，本质上都是基因差异表达所致，所以能调节血压、体液量、胎盘生长、血栓形成、血管重铸、血管内皮功能、脂类代谢、免疫及线粒体功能等的基因都可能是子痫前期的易感基因(汪希鹏，林其德.妊娠期高血压综合征易感基因的研究.中华妇产科杂志，2001,(36)4：248-251)，这些基因的表达异常是子痫前期发生及发展的根本原因，近年来，随着基础实验方法的飞速发展，特别是人类基因组计划的全面完成，人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移，寻找差异表达基因已成为分子生物学的研究热点之一(GabrielsonE,BergK,AnbazhaganR,etal.Functionalgenomics,genearrays,andthefutureofpathology.ModPathol,2001,(14)12:1294-1299)，分离、克隆不同组织或同一组织不同发育阶段差异表达的基因，对于了解疾病的分子机理均具有十分重要的意义，子痫前期病因及发病机制的研究重点也已从最初的临床资料总结及组织细胞学观察逐渐转变为探索疾病的易感基因并研究其表达情况。虽然目前己经发现许多子痫前期相关基因，如血管紧张素原(AGT)基因(WardK,HataA,JeunemaitreX,etal.Amolecularvariantofangiotensiongenassociatedwithpreeclampsia.NatureGenet,1993,4:59-61.)、凝血酶原基因〔KupfermincMJ,EldorA,SteinmanN,etal.Increasedfrequencyofgeneticthrombophiliainwomenwithcomplicationsofpregnancy.NEnglJNed,1999,340:9-13〕、肿瘤坏死因子a(TNFa)基因〔RinehartBK,TerroneDA,Lagoo-DeenadayalanS,etal.Expressionoftheplacentalcytokinestumornecrosisfactoralpha,interleukin1beta,andinterlukin10isincreasedinpreeclampsia.AmJObstetGynecol,1999,181(4):915-920.]等，但因其发生、发展涉及到多基因的表达异常，故仍需做更深入地研究。胎盘作为妊娠期的特殊器官，承担了未成熟胎儿几乎所有器官的功能，并可分泌多种激素、酶、细胞因子、生长因子等物质，协调母体内分泌、免疫和代谢功能，对维持正常妊娠有重要作用。胎盘缺血学说是子痫前期病因学说之一，正常妊娠时胎盘滋养细胞沿螺旋小动脉逆行浸润，逐渐取代血管内皮，使血管腔扩大、血流增加，这一过程称之为血管重铸，深度可达子宫肌层的内1/3。而子痫前期胎盘滋养细胞浸润能力下降，浸入仅达蜕膜段，使子宫螺旋小动脉生理重铸障碍，致胎盘缺血缺氧；血管内皮损伤学说是目前公认的子痫前期发病的中心环节，子痫前期患者胎盘分泌的缩血管物质及细胞毒性因子如内皮素(ET)，AGT、血栓烷A2，TNFa等增加，而舒血管物质如前列环素、一氧化氮(NO)等减少，均可加重机体血管内皮细胞的损伤；且临床证实胎儿胎盘娩出后，子痫前期的病情才可缓解甚至消失，均表明胎盘与子痫前期的发生及发展密不可分。本实验应用此技术通过胎盘组织基因表达产物(mRNA)的差异了解基因的表达情况，可直接从基因水平发现并克隆子痫前期患者与正常孕妇胎盘组织差异表达基因。不仅可以检测己知基因的差异，还可发现与子痫前期相关的新基因，为子痫前期的遗传学和易感基因的研究提供新的思路。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测LPCAT1基因表达差异来实现子痫前期诊断的方法。本专利技术的目的之二在于提供一种通过抑制LPCAT1基因表达来治疗子痫前期的方法。本专利技术的目的之三在于提供一种用于筛选子痫前期治疗药物的方法。本专利技术的目的之四在于提供一种用于治疗子痫前期的药物。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测LPCAT1的试剂在制备诊断子痫前期的工具中的应用。进一步，所述检测LPCAT1的试剂包括检测LPCAT1基因表达量的试剂。更进一步，所述检测LPCAT1的试剂包括能够定量LPCAT1基因mRNA的试剂，和/或能够定量LPCAT1蛋白的试剂。本专利技术的定量LPCAT1基因mRNA的试剂可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该试剂可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。所述能够定量LPCAT1基因mRNA的试剂可以是LPCAT1基因或转录本的特异性引物，也可以是LPCAT1基因或转录本的特异性识别探针，或同时包括引物和探针。上面所述的LPCAT1基因或转录本的特异性引物包括实时定量PCR中使用的特异扩增LPCAT1基因的引物。在本专利技术的的具体实施例中，所述引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。引物可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的定量LPCAT1蛋白的试剂可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的定量LPCAT1蛋白的试剂包括特异性结合LPCAT1蛋白的抗体或其片段。可以使用任何结构、尺寸、免疫球蛋白类别、起源等的抗体或其片段，只要它结合靶蛋白质即可。本专利技术的检测产品中包括的抗体或其片段可以是单克隆的或多克隆的。抗体片段指保留抗体对抗原的结合活性的抗体一部分(部分片段)或含有抗体一部分的肽。抗体片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、单链Fv(scFv)、二硫化物键合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测LPCAT1的试剂在制备子痫前期的诊断工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测LPCAT1的试剂在制备子痫前期的诊断工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测LPCAT1的试剂包括检测LPCAT1基因表达量的试剂。3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述检测LPCAT1的试剂包括能够定量LPCAT1基因mRNA的试剂，和/或能够定量LPCAT1蛋白的试剂。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述能够定量LPCAT1基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异扩增LPCAT1基因的引物；所述能够定量LPCAT1蛋白的试剂包括特异性结合LPCAT1蛋白的抗体。5.一种用于子痫前期诊断的工具，其特征在于，所述工具包括能够检测LPCAT1基因表达量的工具；优选的，所述工具包括能够定量LPCAT1基因mRNA的试剂...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙耀兰，张冬梅，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11